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ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 （停产）
ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 （停产）
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货号 |
20200 |
存储条件 |
在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 |
100 Tests |
价格 |
0 |
| Ex (nm) |
350 |
Em (nm) |
470 |
| 分子量 |
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溶剂 |
DMSO |
| 产品详细介绍 |
简要概述
ApoBrite U470 caspase 3/7底物是美国AAT Bioquest生产的细胞功能探针，ApoBrite U470是我们最近开发的可渗透细胞的荧光半胱天冬酶底物，是首个直接检测活细胞中半胱天冬酶活性的荧光探针。 ApoBrite U470由三个部分组成，包括a）掩蔽的荧光团，b）半胱天冬酶选择性肽片段（DEVD），以及c）细胞穿透部分。细胞穿透部分将探针带入活细胞。一旦进入活细胞，胱天蛋白酶选择性肽片段被胱天蛋白酶切割以释放掩蔽的荧光团。恢复的荧光强度与要测量的胱天蛋白酶的活性直接相关。与活细胞中现有的半胱天冬酶测定相比，ApoBrite U470更稳定，方便和准确。 ApoBrite U470释放出具有Ex / Em〜350/470的荧光团。如NucView试剂所报道的，它不需要DNA相互作用就能发荧光。如FMK肽探针所报道的，它不抑制胱天蛋白酶活性。尽管胱天蛋白酶的荧光FMK肽抑制剂被广泛用于检测活细胞中的胱天蛋白酶活性，但是该技术有一些严重的局限性：a）FMK半胱天冬酶抑制剂具有高细胞毒性，因为FMK肽与活性胱天蛋白酶共价结合。 b）FMK肽与caspase不可逆地共价结合会抑制caspase活性，导致假阳性凋亡。 C）FMK分析具有极高的背景，并且需要大量洗涤，从而导致通量非常低； d）FMK肽在水溶液中不稳定，必须立即使用。
产品说明书
操作步骤
1）将细胞在生长培养基中过夜培养。
2）通过将2 µL 500X ApoBrite caspase底物DMSO储备溶液加入1 mL HHBS中，制成1X ApoBrite caspase底物工作溶液。
3）除去生长培养基，并用HHBS洗涤一次。
4）加入100 µL /孔/ 96孔板的1X ApoBrite caspase底物工作溶液，并在37ºC，5％CO2的培养箱中孵育2小时。
5）去除ApoBrite caspase底物工作溶液，并用HHBS洗涤一次。
6）将生长培养基加回到载有ApoBrite caspase底物的细胞中，并根据需要处理细胞（例如1µM Staurosporine 1小时）。
7）用适当的荧光仪器（例如荧光显微镜或流式细胞仪）分析细胞。
参考文献
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
相关产品
| 产品名称 |
货号 |
| ApoBrite V570 caspase 3/7底物 细胞渗透 |
Cat#20201 |
说明书
ApoBrite U470 caspase 3/7底物 细胞渗透 （停产）.pdf
U6175