sgrna | 修饰性PEG

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sgRNA体外转录和筛选
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	632635	Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit	50 Rxns	￥8,771 ￥7,017
Clontech	632636	Guide-it Complete sgRNA Screening System	50 Rxns	￥10,701 ￥8,561
Clontech	632639	Guide-it sgRNA Screening Kit	50 Rxns	￥4,810 ￥3,848
Clontech	632638	Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit	50 Rxns	￥4,439

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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Sgrna – 修饰性PEG

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sgRNA的体外转录和筛选试剂盒
In Vitro Transcription and Screening Kits for sgRNA

我们的Guide-it in vitro transcription and screening kits for sgRNA 包括四个试剂盒，用于CRISPR/Cas9 研究中单链向导RNAs(single guide RNAs ,sgRNAs)的简单制备、清理和评价。每个试剂盒提供足够 50次反应的材料。
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 被用于通过体外转录制备大量的 sgRNAs。这个试剂盒同样包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638), 被用于快速纯化参与体外转录（vitro transcription，IVT) 反应的sgRNA。从这个试剂盒纯化后的 sgRNA 可以直接被用于转染、电穿孔以及体外剪切实验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639) 可以在Cas9介导的基因编辑相关研究前，先在体外检测不同sgRNAs的效率，这样就不必浪费时间将无效的sgRNAs转入您的细胞了。使用这个试剂盒，首先通过PCR产生包含sgRNA靶点的模板，随后再与您想测试的sgRNA以及重组Cas9核酸酶结合。Cas9 核酸酶剪切模板的效率可以通过使用琼脂糖凝胶电泳检测。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636) 包含以上提到的全部试剂盒组分，可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了用于体外转录和纯化sgRNAs，以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率的所有试剂。

■ 产品特点

· 共有4个试剂盒，可用于Cas9介导的基因编辑研究中sgRNA (single guide RNA)的简单制备、清洁以及效率评价。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit, Code No. 632638)体外转录和纯化大量sgRNA，用于转染或体外筛选。
· 使用Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638) 对IVT 反应后sgRNA的快速纯化，直接用于转染、电穿孔以及体外剪切试验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)包含高质量的重组Cas9蛋白质。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636)是Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 和 Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)的组合，允许您进行sgRNA制备和对预设靶点体外剪切能力的测试。

■ 实验例

Clontech 632635 Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit 50 Rxns ￥8,771 ￥7,017 Clontech 632636 Guide-it Complete sgRNA Screening System 50 Rxns ￥10,701 ￥8,561 Clontech 632639 Guide-it sgRNA Screening Kit 50 Rxns ￥4,810 ￥3,848 Clontech 632638 Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit 50 Rxns

图1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening System试剂盒组成和操作流程

图2. 采用Guide-it试剂盒制备高产量single guide RNA (sgRNA)和重组Cas9蛋白质剪切靶位点检测sgRNA剪切效率操作步骤概要

图3. Guide-it试剂和同类产品所制备的sgRNA品质比较
采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的所有sgRNAs均为单一条带，而其他公司同类产品制备的sgRNAs均可观察到杂带，因此Guide-it试剂盒所制备的sgRNAs品质更高。

* 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.

图4. 以不同基因为靶标制备的sgRNA产量和品质比较
采用Guide-it Complete sgRNA Screening System以多个基因为靶基因制备sgRNA。
Panel A. 将20 μl sgRNA体外转录（IVT）反应液置于37°C孵育4 hr，采用NanoDrop分光光度计检测所制备产生的sgRNA产量。
Panel B. 采用安捷伦生物分析仪分析分析每一个sgRNA IVT反应液，检测sgRNA质量。

■ 产品组份

Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 50 rxns)
· 1 each Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2 (Code No. 632637; 50 rxns; Not sold separately)
    ○ 50 μl Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)
    ○ 350 μl Guide-it In Vitro Transcription Buffer
    ○ 1 ml RNase Free Water
    ○ 500 μl RNase Free Water
    ○ 150 μl Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)
    ○ 625 μl PrimeSTAR Max Premix (2X)
    ○ 100 μl Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)
· 1 each Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
    ○ 13 ml RNase Free Water
    ○ 3 ml IVT Binding Buffer
    ○ 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
    ○ 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
    ○ 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
· 13 ml RNase Free Water
· 3 ml IVT Binding Buffer
· 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
· 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
· 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639; 50 rxns)
· 25 μl Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)
· 50 μl 15X Cas9 Reaction Buffer
· 50 μl 15X BSA
· 5 μl Control sgRNA (50 ng/μl)
· 25 μl Control Fragment (20 ng/μl)
· 50 μl Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)
· 1.25 ml 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· 5 ml RNase Free Water
· 5 ml Extraction Buffer 1
· 0.5 ml Extraction Buffer 2

Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636; 50 rxns)
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635)
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)

■ 关联资料
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