PrimeScript II Reverse Transcriptase在42℃条件下能够有效地合成低背景、高质量的cDNA,无需进行高温反转录反应,高温的反转录反应会导致RNA的降解,且由于引物的有效使用和辅助蛋白质的添加,避免了因RNA二级结构对cDNA合成的抑制及RT引物错配引起的非特异性延伸。辅助蛋白质完全抑制了由于反转录酶冰上放置引起的非特异性延伸反应,因此,即便是反应液配制到反转录反应开始要间隔一段时间,也不会抑制长链cDNA的合成。合成的cDNA可以广泛应用于2nd-strand合成、杂交、终点PCR和定量PCR,而且本酶特别适用于全长cDNA文库构建用的高质量cDNA合成等。
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Purified from an E. coli strain expressing a recombinant enzyme.
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
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Takara
RR047Q
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
10 Rxns
¥263
Takara
RR047A
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
100 Rxns
¥1,963 ¥1,178
Takara
RR047B (A × 4)
PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)
100 Rxns × 4
¥7,456 ¥4,474
*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日
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Primescript – 修饰性PEG
■ 制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量)
1. gDNA Eraser
100 μl
2. 5X gDNA Eraser Buffer*1
200 μl
3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2
100 μl
4. 5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3
400 μl
5. RT Primer Mix*4
400 μl
6. RNase Free dH2O
1 ml×2
7. EASY Dilution (for Real Time PCR)*5
1 ml
*1 5X gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用,请务必进行基因组DNA的除去反应。 *2 含有RNase Inhibitor。 *3 含有dNTP Mixture。 *4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。 *5 制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板cDNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时,由于受Microtube吸附作用等的影响,往往不能准确地进行稀释,导致实验结果精度降低。使用本制品时,即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) (Code No. 9160/9160Q) 也可以单独购买。 注意:EASY Dilution (for Real Time PCR) 请与本公司Real Time PCR试剂组合使用,对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
■ 制品说明
为了准确地进行基因表达量分析,必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件,但Total RNA中常常混有基因组DNA,并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增,因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上,使基因组DNA得不到扩增。但是,此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因,同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下,我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理,以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作,同时会造成RNA的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser,通过42℃,2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分,经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA,因此,20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析,可以根据实验目的,选择与TB Green®Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
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■ 试剂盒特长
1. 含有去除基因组DNA的gDNA Eraser,只需2 min即可除去基因组DNA。 2. 只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。 3. 反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix,可以均匀合成样品中的各种cDNA。 4. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。 TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下: (1) 反转录反应中RT Primer Mix的用量。 (2) 反转录反应中总RNA的用量。 5. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR) ,将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
■ 注意事项
1.使用本制品合成的cDNA与TB Green关联制品组合使用时,建议使用: TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820Q/A/B) TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B) 以上制品与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。 本制品与TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) 组合使用时,有时反应性能不好,不推荐使用。 2. 当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等),然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 3. gDNA Eraser和PrimeScript RT Enzyme Mix I 在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失,而使酶量不足。 4. 5X gDNA Eraser Buffer和5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)在使用前需Vortex振荡混匀,轻轻离心后使用。 5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。
*1 含有PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer (含有Mg2+) 。 *2 制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时,由于受Microtube吸附作用等的影响,往往不能准确地进行稀释,导致实验结果精度降低。使用本制品时,即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以单独购买 (Code No.: 9160/9160Q)。 注意:EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用,对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
■ 制品说明
本制品是2 Step Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。5×PrimeScript RT Master Mix中含有定量RT-PCR的反转录反应所需的所有试剂 (PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、Random 6 mers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反应Buffer),加入模板RNA和水即可迅速进行反应。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase,与制品PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)(Code No.: RR037Q/A/B) 相同,可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用模板cDNA。 本制品合成的cDNA可以用于嵌合法和探针法qPCR分析,可以根据实验目的与TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)* 、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* 和Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 等定量试剂配合使用,能够进行高性能的基因表达分析。
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
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-20℃。
■ 试剂盒特长
1. 制品为预先混好的Premix形式,只需加入模板RNA和水便可以开始反应。 2. 可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。 3. 使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer 2种反转录引物,可以合成适合Real Time PCR用cDNA。 4. Real-time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR),将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
*1 含有dNTP Mixture 和 Mg2+。 *2 含有RNase Inhibitor。 *3 用于制作标准曲线时梯度稀释total RNA和cDNA。EASY Dilution (for Real Time PCR) 可以将其稀释至很低浓度也能够得到准确地稀释。本制品不影响反转录和PCR反应,用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) 也可以单独购买(Code No. 9160/9160Q)。 注意:EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用,对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。
■ 制品说明
本制品是Real Time RT-PCR用的理想反转录反应试剂。使用具有较强延伸能力的PrimeScript RTase可以在较短时间内高效合成Real Time PCR用cDNA。操作简单,适合进行高通量分析。进行2 Step Real Time RT-PCR反应时,与TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)(Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B)* , TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B)* 、 或Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 试剂配合使用,能进行高性能的基因表达分析。 本制品提供了TB Green分析法和探针分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。
*:Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
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-20℃。
■ 试剂盒特长
1. 可以快速、高效合成Real Time PCR用cDNA,是进行2 Step Real Time RT-PCR反应的理想试剂。 2. 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers两种反转录引物,可根据实际情况区别使用。反转录反应可以使用Random 6 mers或Oligo dT Primer,也可以Oligo dT Primer和Random 6 mers同时使用。只扩增一种目的基因时,也可以使用Specific Primer作为反转录引物。 3. 本制品提供了TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系,可以根据分析方法选择体系。 注意:以下是TB Green qPCR分析法和探针qPCR分析法进行反转录实验的区别 ① 用于反转录实验RT Primer Mix添加量。 ② 用于反转录实验total RNA的添加量。 4. Real Time RT PCR定量需要建立标准曲线,建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TE Buffer稀释时,由于模板浓度低不稳定,因而会缩小曲线范围,结果准确度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution (for Real Time PCR),将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
◆ 需要使用ROX Reference Dye (50×) 校正的仪器 Applied Biosystems 7900HT/7300 Real-Time PCR System StepOnePlus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 需要使用ROX Reference Dye II (50×) 校正的仪器 Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific) ◆ 不需要使用ROX Reference Dye校正的仪器 Thermal Cycler Dice Real Time System系列 LightCycler/LightCycler 480 system (Roche Diagnostics) CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad)
■ 制品说明
本制品是采用探针法进行1 Step Real Time RT-PCR的专用premix试剂。本制品将反转录酶和PCR酶及反应用buffer预先配制成premix形式,由于RT-PCR反应在单个反应管中连续进行,因而,操作更简便,同时降低了污染的风险。反转录酶采用了耐热性高的PrimeScript III RTase,且即使在反应阻害物存在的情况下也能够有效合成cDNA。此外,使用该试剂,也可以实现多个反应同时进行的多重qPCR。为防止PCR反应时的【carryover contamination】,可以使用添加有UNG的One Step PrimeScript III RT-qPCR Mix, with UNG (Code No. RR601A/B)。通过使用该制品,能够更简便、准确地实现RNA/DNA病毒的快速检出及mRNA的表达分析。
本制品适用于Takara公司Thermal Cycler Dice Real Time System仪器,已确认以下Real Time PCR仪器都适用。 · Thermal Cycler Dice Real Time System III(Code No. TP950/TP970/TP980/TP990) · Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific) · LightCycler 96 System(Roche Diagnostics) · CFX96 Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad)等
注:采用嵌合荧光法(TB Green)进行1 Step Real Time RT-PCR时, 请使用:One Step TB Green PrimeScript PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR096A) 或:One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time)(Code No. RR086A)。