10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)酶试剂盒Takara Clontech

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10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9151A 10 × PCR Buffer (Mg2+ plus) 1 ml × 10 ¥150 10 × PCR Buffer (Mg2+ plus) 10 × PCR Buffer (Mg2+ plus) 10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
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■ 制品内容
10X PCR Buffer (Mg2+ plus) 1 ml×10 tubes
 
■ 制品说明
本产品与TaKaRa Taq (Code No.: R001A/B/C) 以及TaKaRa Taq Hot Start Version (Code No.: R007A/B) 中所提供的Buffer相同。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 用 途
1. PCR法扩增DNA。
2. DNA序列测定。
 
 

Multiplex PCR Assay Kit Ver.2酶试剂盒Takara Clontech

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Multiplex PCR Assay Kit Ver.2
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR062A Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 100 Rxns ¥2,003
¥1,703
Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2
Takara RR062B (A × 4) Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 100 Rxns × 4 ¥7,209 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2

*红字为促销价格,促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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PCR – 修饰性PEG – Page 4

 
 
Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2
 
 
■ 制品内容 (100 次量)
2×Multiplex PCR Buffer(Mg2+, dNTP plus)* 1.25 ml×2支
Multiplex PCR Enzyme Mix 25 μl
   
* 内含Buffer、dNTP Mixture等,Mg2+的终浓度是2 mM。
 
 
■ 制品说明
Multiplex PCR是在同一个PCR反应体系中,使用多对引物,对多个基因同时进行扩增的方法。Multiplex PCR具有节约试剂及器材的经济性,以及同时检出多个基因所带来的迅速性等优点,特别适用于珍贵样品的检测。
本制品是由能快速进行Priming的酶与能很好提高引物退火特异性的反应液配套组成的Multiplex PCR用试剂盒。同以往Multiplex PCR Enzyme相比,可在短时间内特异性地进行无偏差的PCR扩增。另外,调整酶量和反应时间也可对大约200对引物进行Multiplex PCR。使用本制品不仅能进行Multiplex PCR,而且在Extra band及Smear大量出现时,以及难以获得目的扩增片段的Single PCR反应时也可使用,能减少Extra band及Smear的量,可在短时间内特异性扩增目的片段。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前请一定认真阅读。
1. 进行PCR反应液的配制时,配制成Master mix(2×Multiplex PCR Buffer(Mg2+, dNTP plus)、Multiplex PCR Enzyme Mix、灭菌水等混合液),即配制成数份(~10份)使用量比较方便。制品配制成Master mix的形式后,可以减少试剂分注、混匀次数,并能保证准确的试剂分注,有效降低实验结果间的误差。
2. 2×Multiplex PCR Buffer(Mg2+, dNTP plus)、Multiplex PCR Enzyme Mix在混匀时要缓慢进行,避免产生气泡。不要Vortex混匀。在移液操作前,要将试剂轻轻离心至Microtube底部。Multiplex PCR Enzyme Mix因为含有50%的甘油,粘度很高,在取液时一定要缓慢操作。
3. 2×Multiplex PCR Buffer(Mg2+, dNTP plus)、Multiplex PCR Enzyme Mix使用前于-20℃保存,使用后也要立即置于-20℃保存。
4. 反应液的配制、分装请一定使用新的(无污染的)枪头,尽量避免污染。
5. 本说明书中的PCR反应条件是使用TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice时的条件。在使用其它基因扩增仪器时,适宜PCR条件可能会发生变化。
 
 

TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit
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Takara 6088 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit 200 Rxns ¥2,003 TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit TaKaRa PCR Carryover Prevention Kit
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■ 制品内容 (200 次量)
UNG (2 U/μl) 100 μl
dU plus dNTP Mixture* (12.5×) 800 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
 
* dU plus dNTP Mixture的Na盐溶液组成如下: dUTP 7.5 mM;dATP 2.5 mM;dGTP 2.5 mM;dCTP 2.5 mM
 
■ 制品说明
PCR是一种非常敏感的DNA扩增技术,易受污染影响,PCR扩增产物的污染会产生假阳性结果。PCR扩增产物的污染是End-point PCR方法,特别在食品、环境检测中是令人头痛的问题。
本制品是一种可防止假阳性产生的试剂盒。使用本制品是在PCR反应时以dUTP取代dTTP,并同时使用对含有dU的DNA具有降解作用的UNG酶 (Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前加入UNG可降解含有尿嘧啶的PCR产物,而对不含尿嘧啶的模板无任何影响,可选择性水解含有尿嘧啶的PCR产物。 UNG的作用原理:在PCR反应前25℃、10分钟反应中,UNG酶可水解PCR反应液中含有尿嘧啶的PCR产物的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,释放游离尿嘧啶。随后进行95℃、2分钟热处理,在UNG酶失活的同时进一步对磷酸骨架水解,从而消除含有尿嘧啶的PCR产物的污染。UNG酶可以作用于单链或双链DNA,对RNA无活性。
本试剂盒除含有UNG酶外还附带含有dUTP的dNTP Mixture以及MgCl2溶液。使用本试剂盒时请与TaKaRa Taq Hot Start Version (Code No.: R007A/B) 等Pol I 型PCR酶组合使用。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 注意事项
从反应液的配制到PCR产物的检出应分别在4个操作区操作,操作区推荐进行物理性隔离。
操作区1:反应液的配制及分装。
操作区2:样品的制备。
操作区3:将样品添加到反应液中。
操作区4:PCR反应及凝胶电泳对PCR产物进行检出。
为防止污染,除在操作区4外请避免对PCR扩增产物tube进行开闭。
 
 

CloneAmp™ HiFi PCR 预混合液酶试剂盒Takara Clontech

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CloneAmp HiFi PCR 预混合液
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Clontech 639298 CloneAmp HiFi PCR Premix 200 Rxns ¥2,468 CloneAmp™ HiFi PCR 预混合液 CloneAmp™ HiFi PCR 预混合液 CloneAmp™ HiFi PCR 预混合液
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CloneAmp HiFi PCR Premix是一种方便的2X预混合物,可提供高保真和高扩增效率的DNA扩增,是In-Fusion PCR克隆的理想选择。 它包含dNTP和优化的缓冲液,可进行快速PCR反应以及高通量反应。
 
产品特点
· 高保真性-很低的错配率(每542,580个总碱基12个错配碱基)
· 快速性-高priming效率、快速反应延伸时间为5秒/ kb
· 特异性-热启动抗体可防止非特异性扩增
· 通用性-适用于长(高达10 kb)和富含GC的模板
· 方便性-预混液形式,可进行快速反应设置
 
 
产品详情请点击:CloneAmp™ HiFi PCR 预混合液
 
 

高保真 PCR EcoDry™ Premix酶试剂盒Takara Clontech

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高保真 PCR EcoDry Premix
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Clontech 639282 High Fidelity PCR EcoDry Premix 24 Rxns ¥718 高保真 PCR EcoDry™ Premix 高保真 PCR EcoDry™ Premix 高保真 PCR EcoDry™ Premix
Clontech 639280 High Fidelity PCR EcoDry Premix 48 Rxns ¥1,329 高保真 PCR EcoDry™ Premix 高保真 PCR EcoDry™ Premix 高保真 PCR EcoDry™ Premix
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高保真PCR EcoDry Premix是一种方便的冻干混合物,可让您以更小的工作量和更大的简便性准确扩增DNA模板。 每个预混管包含高保真PCR所需的所有试剂。 只需添加PCR级别水、引物和模板即可进行PCR反应。
 
产品特点
· 环保型
· 冻干型可实现室温保存和运输
· Clontech前所未有的方便性和易用性
 
 
产品详情请点击:高保真 PCR EcoDry™ Premix
 
 

PCR Master Mix – EcoDry™ Premix酶试剂盒Takara Clontech

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PCR Master Mix – EcoDry Premix
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Clontech 639278 High Yield PCR EcoDry Premix 24 Rxns ¥596 PCR Master Mix - EcoDry™ Premix PCR Master Mix - EcoDry™ Premix PCR Master Mix - EcoDry™ Premix
Clontech 639276 High Yield PCR EcoDry Premix 48 Rxns ¥1,180 PCR Master Mix - EcoDry™ Premix PCR Master Mix - EcoDry™ Premix PCR Master Mix - EcoDry™ Premix
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High Yield PCR EcoDry Premix是简单进行PCR扩增的冻干品。每个管包含Titanium Taq DNA Polymerase Mix、dNTPs、MgCl2和反应Buffer,只需添加引物,模板和水即可进行PCR反应。
 
· 室温保存冷冻品
该产品可在室温下保存和运输。该冻干品包括PCR反应主要试剂,节省时间并避免污染。此外,该冻干品分装到8联管,可同时使用,也可以切割成单独的反应管使用。
 
· 采用Titanium Taq DNA Polymerase Mix
该产品包括Titanium Taq DNA Polymerase和Taq Start Antibody,即使少量模板也可进行高效率的PCR扩增。也适用于常规的高通量分析,如重组大肠杆菌的筛选。
 
PCR Master Mix - EcoDry™ Premix
 
 
 
产品详情请点击:PCR Master Mix - EcoDry™ Premix
 
 
Technote:
Titanium Taq outperforms other polymerases in high-throughput genotyping
 

TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa LA PCR Kit Ver.2.1
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR013A TaKaRa LA PCR Kit Ver.2.1 50 Rxns ¥801 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1
Takara RR013B (A × 2) TaKaRa LA PCR Kit Ver.2.1 50 Rxns × 2 ¥1,442 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1 TaKaRa LA PCR™ Kit Ver.2.1
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■ 制品内容 (Code No.: RR013A : 50 次量)
TaKaRa LA Taq (5 U/ μl) 125 U
dNTP Mixture (各2.5 mM) 400 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ plus; Mg2+浓度25 mM) 250 μl
10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ free) 250 μl
MgCl2 (25 mM) 500 μl
Control Template (100 ng/μl)*1 10 μl
Control Primer LA3 (10 μM) 10 μl
Control Primer LA4 (10 μM) 10 μl
λ –Hind III digested MW Marker*2 (100 ng/μl) 20 μl
2 × GC Buffer I (Mg2+ plus; Mg2+ 浓度5 mM)*3 1.25 ml
2 × GC Buffer II (Mg2+ plus; Mg2+ 浓度5 mM)*3 1.25 ml
Control Primer GC1 (10 μM) 10 μl
Control Primer GC2 (10 μM) 10 μl
   
*1 Control Template
Human HL60来源的基因组DNA,浓度为100 ng/μl
*2 λ-Hind III digest MW Marker
Marker大小范围:23,130;9,416;6,557;4,361;2,322;2,027;564;125 bp。
*3 GC Buffer的使用
当扩增GC rich或复杂的立体结构DNA片段时,请先使用GC Buffer I,当使用GC Buffer I 不能扩增时,再试用GC Buffer II。
 
 
■ 制品说明
本试剂盒应用了特别的LA PCR (Long and Accurate PCR) 技术,适用于正确地扩增长链DNA片段。使用TaKaRa LA Taq并搭配专用的反应缓冲液 (10 × LA PCR Buffer II),可得到更长更准确的扩增产物。以λ DNA为模板,扩增产物可达48 kb;以基因组DNA为模板,扩增产物可达30 kb。
本试剂盒包含所有适合LA PCR反应的必要试剂,以达到高效扩增、准确地获得长链PCR产物。LA PCR技术扩大了PCR技术的应用范围,并在推动基因组分析的方方面面体现着特殊价值。本试剂盒同样适用于短链目的产物的扩增。此外,本制品中还配备了高GC含量模板专用的Buffer (2×GC Buffer I、II)。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Control Primer序列
引物名称 各引物序列
Control Primer LA3*1
   5′-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3′
Control Primer LA4*1
   5′-TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC-3′
Control Primer GC1*2
   5′-GGGAGGGGACCGGGGAACAGAG-3′
Control Primer GC2*2
   5′-GAACAGTCCGTCACTTCACGTG-3′
*1 Control Primer LA3和Control Primer LA4可以扩增Control Template的17.5 kb 片段。
*2 Control Primer GC1和Control Primer GC2可以扩增Control Template的1,255 bp的GC rich区域。
 
■ 使用注意
1. 试剂盒中的所有组份,在室温~37℃完全融化后,用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀,尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, TaKaRa LA Taq时, 为防止起泡或酶失活,需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。
2. 配制反应液时,使用移液器轻轻吸打混合,不能剧烈振荡。
3. 扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。
4. 尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4~5倍。
 
 

TaKaRa PCR Amplification Kit酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa PCR Amplification Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara R011 TaKaRa PCR Amplification Kit 100 Rxns ¥514 TaKaRa PCR Amplification Kit TaKaRa PCR Amplification Kit TaKaRa PCR Amplification Kit
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PCR – 修饰性PEG – Page 4

 
■ 制品内容 (100 μl PCR×100次或50 μl PCR×200次)
TaKaRa Taq*1 (5 U/ μl) 50 μl (250 U)
dNTP Mixture*2 (各2.5 mM) 1.28 ml
10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
        100 mM  Tris-HCl(pH8.9)
        500 mM  KCl
        15 mM   MgCl2
1 ml

10 × PCR Buffer (Mg2+ Free)
        100 mM  Tris-HCl(pH8.9)
        500 mM  KCl

1 ml
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control Template (1 μg/ml λ DNA) 100 μl
Control Primer 1*3 (20 pmol/μl) 50 μl
Control Primer 2*3 (20 pmol/μl) 50 μl
Control Primer 3*3 (20 pmol/μl) 50 μl
λ-EcoT14 I Marker*4 (100 ng/μl) 40 μl
6 × Loading Buffer*5 1 ml
   
*1 TaKaRa Taq酶说明 (5 U/μl)
    【酶贮存液】
    20 mM Tris-HCl(pH8.0),100 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.5% Tween20,0.5% NP-40,50% Glycerol。
    【活性定义】
    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、pH9.3、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。
    【Reaction mixture】
    25 mM   TAPS (pH9.3,25℃)
    50 mM   KCl
    2 mM   MgCl2
    0.1 mM   DTT
    200 μM   each dATP·dGTP·dCTP
   100 μM   [3H]-dTTP
    0.25 mg/ml   activated salmon sperm DNA
 
*2 dNTP Mixture (各2.5 mM)
    dNTP Mixture无需稀释,可直接用于PCR。
    Form:溶于水 (钠盐),pH7-9
    纯度:每种dNTP≥98%
 
*3 Control Primer序列
       Control Primer 1       5′-GATGAGTTCGTGTCCGTACAACT-3′
       Control Primer 2       5′-CCACATCCATACCGGGTTTCAC-3′
       Control Primer 3       5′-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3′
     * 使用Control Primer 1、2时,可以扩增Control Template (λ DNA)的6,012 bp DNA片段。使用Control Primer 1、3时,可以扩增Control Template (λ DNA)的500 bp DNA片段。
 
*4 λ-EcoT14 I Marker
    此marker是用限制性内切酶EcoT14 I分解λcl857 Sam7 DNA得到的。由DNA片段19,329 bp;7,743 bp;6,223 bp;4,254 bp;3,472 bp;2,690 bp;1,882 bp;1,489 bp;925 bp;421 bp;74 bp等组成。由于λ DNA分解的末端片段与COS end相连,需加热处理(60℃,5 min.)。
 
*5 6×Loading Buffer的组成
36%   甘油  
30 mM   EDTA  
0.05%   溴酚兰  
0.035%   二甲苯青  
 
 
■ 制品说明
PCR Amplification Kit适用于各种DNA模板的PCR扩增。本试剂盒含有λ DNA作为对照模板以及扩增λ DNA目的序列用的对照引物 (6,012 bp,500 bp) 。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前一定认真阅读。
1. 试剂盒中的各组份,要仔细混匀后使用,但TaKaRa Taq要避免剧烈操作。
2. 因为样品DNA的提取方法不同,10×PCR Buffer (Mg2+ plus)中的Mg2+浓度可能并非最适浓度,此时可使用10×PCR Buffer (Mg2+ Free)和MgCl2,调整PCR反应液的适合的Mg2+浓度。
 
 

随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify)酶试剂盒Takara Clontech

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随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 630703 Diversify PCR Random Mutagenesis Kit 30 Rxns ¥9,178 随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify) 随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify) 随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify)
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PCR – 修饰性PEG – Page 4

 
Code No. 产品名称
630703   Diversify PCR Random Mutagenesis Kit
 
Diversify PCR Random Mutagenesis Kit采用无毒方法可突变长度至多4.0 kb的序列。 该试剂盒应用广泛,可用于所有的突变而不产生突变热点。
 
产品特点
· 可控的随机突变。可用于分析蛋白质功能
· 准确的控制突变率
· 无突变热点
· 获取所有的碱基替换
 
 
产品详情请点击:随机突变试剂盒(PCR Random Mutagenesis Kit—Diversify)
 
 

TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0酶试剂盒Takara Clontech

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TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara RR019A TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns ¥1,683 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
Takara RR019B (A × 2) TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns × 2 ¥3,024 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
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PCR – 修饰性PEG – Page 4

※ 上表中产品货期不定,请您在下单前咨询当地代理商。
 
■ 制品内容 (Code No.: RR019A : 100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (Avian Myeloblastosis Virus来源)
50 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10 × RT Buffer [100 mM Tris-HCl (pH8.3),500 mM KCl] 1 ml
5 × PCR Buffer 1 ml
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*3 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)
25 μl
 
*1:1次反应即10 μl RT及 50 μl PCR
*2:引物序列
引物名称 各引物序列
Random 9 mers
       5′-(P)NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
       包含dT区域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
       5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
       5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
       5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
*3:Positive Control RNA
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时,该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。
TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
图1. Positive Control RNA:使用各种引物所能扩增的DNA片段
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由来的反转录酶将RNA合成cDNA,然后在同一反应管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶扩增此cDNA的RT-PCR试剂盒。本试剂盒含有从RNA到cDNA,然后使用PCR法扩增此cDNA所需的全部试剂,可实现简单高效的RNA分析。
本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特殊设计,大大地提高了Poly(A)+ RNA 3′端区域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的应用,避免扩增前由于错配或引物二聚体产生的非特异性扩增。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ RNA LA PCR的原理
本试剂盒使用AMV由来的反转录酶由RNA合成cDNA,并可在同一反应管中使用TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA。Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物等均可作为反转录引物用于cDNA合成。Oligo dT-Adaptor Primer同时适用于3′-RACE实验。
TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
图2. RNA PCR的原理
 
■ 特点
RNA模板
  适用于所有RNA
扩增片段大小
  ≤5 kb
反转录酶
  AMV Reverse Transcriptase XL
DNA Polymerase
  TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor
  必须使用 (Kit中含有)
合成第一条cDNA链的引物
  Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特异性下游PCR Primer 可供选择
3′-RACE法
  RT反应时使用Oligo dT-Adaptor Primer,PCR反应时下游引物使用M13 Primer M4
操 作
  在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)
 
■ 反转录反应时Primer的选择
Random 9 mers
  适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA进行PCR反应时,必须使用特异性引物。
Oligo dT-Adaptor Primer
  适用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意:原核生物的RNA、真核生物 Primer 的rRNA及tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA不具有Poly (A)+ Tail)。 本Primer设计巧妙,反转录效率高。反转录反应后,可用M13 Primer M4进行3′-RACE实验。
特异性下游PCR Primer
(PCR时的下游引物)
  因其必须与模板序列互补,所以只适用于Target序列已知的情况。
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 酶等酶类时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。
5. 最佳的PCR条件,因PCR扩增仪的不同而不同,所以在使用您的样品之前最好先试做一下Control反应,以确定最佳的PCR条件。