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微球菌核酸酶 货 号 #M0247S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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微球菌核酸酶 货 号 #M0247S 微球菌核酸酶 货 号 #M0247S 微球菌核酸酶 货 号 #M0247S 微球菌核酸酶 货 号 #M0247S 微球菌核酸酶 货 号 #M0247S

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特性

 蛋白质制备中降解核酸
 体外翻译
 在非机械细胞裂解液制备时降低细胞裂解液的粘性
 染色质结构分析
 快速 RNA 测序
 ChIP 分析 

概述

微球菌核酸酶来源于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），是一种非特异性的核酸内切酶和核酸外切酶。该酶从重组 E. coli 菌株纯化得到，可消化双链、单链、环化以及线性的核酸。在 pH 7.0-10.0 的范围内，微球菌核酸酶均有活性，无论对于 DNA 底物还是 RNA 底物，其最适 pH 值均为 9.2。微球菌核酸酶偏向于切割富含腺苷酸、脱氧腺苷酸或胸腺苷酸的底物。酶切 DNA 和 RNA 底物产生带有 3´ 磷酸的单核苷酸和二核苷酸。 

来源

重组 E. coli 菌株，含有微球菌核酸酶（GeneID：3238436）和麦芽糖结合蛋白（MBP）的融合基因。融合蛋白去除 MBP 并经纯化获得微球菌核酸酶。 

反应条件

1X 微球菌核酸酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl（pH 7.9 @ 25℃），5 mM CaCl2]，加入 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。 

质保声明

微球菌核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

（Kunitz 单位）1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内催化生成能在 260 nm 处增加 1 个 OD 值的酸溶性寡核苷酸所需的酶量。
（琼脂糖凝胶单位）1 单位指 37℃ 条件下，15 分钟内消化 1 μg Lambda 基因组 DNA，使低分子量 DNA 片段（100-400 bp）在 1.2% 的琼脂糖凝胶上消失所需的酶量。
注意：10,000 个琼脂糖凝胶单位约等于 1,000 个Kunitz 单位。
单位活性检测条件请联系我们。 www.neb.com 或 www.nebchina.com。 

浓度

2 X 106 gel units/ml。 

注意事项

微球菌核酸酶的活性需要 1-5 mM Ca2+。微球菌核酸酶的活性范围为 pH 7-10，盐离子浓度低于 100 mM。加入过量 EGTA 可使酶失活。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

核酸内切酶 V 货 号 #M0305S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S 核酸内切酶 V 货 号 #M0305S

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特性

 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸
 切割错配 

概述

核酸内切酶 V 是在 E. coli 中发现的一种 DNA 修复酶。它识别 DNA 中的脱氧次黄嘌呤核苷，即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V，也称为脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 内切酶，识别含脱氧次黄嘌呤核苷（无论配对与否）的双链或单链 DNA。也可识别含脱碱基（AP）位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类 -Y 型结构的 DNA，但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶 V 发挥 DNA 修复功能时，还需另外一种蛋白的存在，因为它不能切除 DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基。
 
核酸内切酶 V 对错配脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 端第二个磷酸二酯键进行切割，产生一个 3´ 羟基、5´ 磷酸的切刻。 

来源

重组 E. coli 菌株，携带有 Endo V 基因与编码麦芽糖结合蛋白（MBP）基因的融合基因。融合蛋白纯化后具有生物活性。该蛋白含 223 个氨基酸，分子量为 24.9 kDa。 

反应条件

1X NEBuffer 4
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2 ，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 V 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 10 μl反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含单脱氧次黄嘌呤核苷位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。

* 脱氧次黄嘌呤核苷位点的制备：合成 34 mer 寡核苷酸双链时，在其一条链的中间掺入脱氧次黄嘌呤核苷（dI）碱基。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

KLD 酶混合液 货 号 #M0554S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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KLD 酶混合液                              收藏

KLD 酶混合液 货 号 #M0554S

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NEB PCR 克隆试剂盒
#E1202S 20 次反应 . . . . . .￥3,299
NEB PCR 克隆试剂盒（不含感受态细胞）
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KLD 酶混合液
#M0554S 25次反应 . . . . . .￥3,599

特性：

 KLD 酶混合液 货 号 #M0554S

概述

 概述：Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变，该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶，结合客户自行设计的引物，在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率，将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞，质粒长度可达 14.3 kb。

应用：

 • 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

Q5 定点突变试剂盒包含：

 – Q5 热启动超保真预混液（2X）

– KLD 酶混合液（10X）和反应缓冲液（2X）
– 对照引物混合液（各 10 μM）和 DNA 模板
（5 ng/μl）
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞（高效级）
– pUC19 转化对照质粒（5 pg/μl）
– SOC Outgrowth 培养基

质保声明：

 Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

实验流程：

 KLD 酶混合液 货 号 #M0554S

热稳定 FEN1 货 号 #M0645S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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热稳定 FEN1                              收藏

热稳定 FEN1 货 号 #M0645S 热稳定 FEN1 货 号 #M0645S 热稳定 FEN1 货 号 #M0645S 热稳定 FEN1 货 号 #M0645S 热稳定 FEN1 货 号 #M0645S

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特性

  切除 DNA flap 结构

概述

 热稳定 Flap 核酸内切酶 1 (FEN1) 催化切除分叉双链 DNA 底物中的flap 结构，产生 5´ 磷酸末端。DNA 连接酶可以连接 FEN1 消化产物产生双链 DNA。在体内，FEN1 是冈崎片段加工成熟的基本元件，并参与调控碱基切除修复过程。

来源：

 纯化自含 Thermococcus 9°N FEN1 基因的 E.coli 菌株。

反应条件：

1X ThermoPol 反应缓冲液

[20 mM Tris-acetate,10 mM (NH4)2SO4,10 mM KCl,
10 mM MgSO4,0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃)]，65℃温育。

质保声明：

热稳定 FEN1 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆

www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义：

 1 单位指在 10 μl 反应体系中，65℃ 条件下，10 分钟内切割 10 pmol 含 5´ flap 结构的寡核苷酸底物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆

www.neb.com 或 www.neb-china.com。

浓度：

32,000 units/ml

参考文献：

 关于该酶性质和产品应用的参考文献，请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

核酸消化混合液 货 号 #M0649S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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核酸消化混合液                              收藏

核酸消化混合液 货 号 #M0649S 核酸消化混合液 货 号 #M0649S

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特性

  Convenient one-step protocol
  Digests both DNA and RNA to single nucleosides
  Low-glycerol formulation significantly reduces glycerol-induced ion suppression during MS analysis

概述

核苷消化混合液是复合酶，能一步将 DNA 或 RNA 消化成单核苷，省去了多步耗时的消化步骤，特别适用于液相色谱-质谱（LC-MS）定量分析。

反应条件

1X Nucleoside Digestion Mix Reaction Buffer.   Incubate at 37°C.

贮存温度

-20°C

注意事项

1.  Dilution of the Nucleoside Digestion mix may result in a decrease of enzymatic activity and incomplete

      digestion of substrate. Therefore, we recommend using 1 µL of the Nucleoside Digestion Mix for

      digestion of samples containing < 1 µg of DNA or RNA substrate.
2.  Samples containing a large number of modifications (particularly modifications at the ribose 2´-position)

     may benefit from overnight incubation with the Nucleoside Digestion Mix in order to achieve complete

     digestion. No signal deterioration has been observed by incubating DNA or RNA samples with the

      Nucleoside Digestion Mix for up to 24 hours at 37°C. Alternatively, the ratio of Nucleoside Digestion

      Mix:nucleic acid may be increased from 1 μl/μg substrate to 5-10 μl/μg substrate to ensure complete

      digestion.
3.  Although it is not necessary to stop the reaction prior to LC-MS, the mix can be inactivated by the

     addition of EDTA (5 mM, final concentration).
4.  In order to reduce the ion suppression effects of glycerol, the Nucleoside Digestion Mix has been

     formulated to contain very little glycerol (<1%) and therefore the mix will freeze when stored at -20°C.

     The mix is stable for >2 years when stored at -20°C and can withstand 50 freeze-thaw cycles without

     significant activity loss.
5.  As carryover of certain reaction components (e.g., EDTA, detergents, etc) from upstream steps may

     result in incomplete digestion, it is highly recommended that DNA or RNA substrates be purified

     (column purification/phenol chloroform extraction) before digestion with the Nucleoside Digestion

     Mix.

切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品特点

 切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

• DNA 核酸内切酶
• 催化切割一些 DNA 错配（T:T，G:G 和 G:T）
• 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端，含 3′-OH 和 5′- 磷酸
• 对于 T 错配切割效果最好；无法识别所有类型的 DNA 错配
 

产品描述

切割错配核酸内切酶 I 是一种依赖 Mg2+ 的 DNA 核酸内切酶，可特异切割错配碱基对（T:T、G:G 和 T:G 错配）。切割错配核酸内切酶 I 在两条链上错配碱基 5’端的第三个磷酸二酯键处切割，切割后产生 5 bp 粘性末端。切割错配核酸内切酶 I 优先切割的 DNA 错配为:T:T、G:G 和 T:G，也可轻松切割 T:I、G:I 和 G:U 错配。此外，实验证明：切割错配核酸内切酶 I 在 T:C 类型的 DNA 错配中可在含 T 的链上形成切刻。该酶还能切割 DNA:RNA 杂交链上的 T:G 和 T:U 错配，但其切割效率低于 DNA:DNA 错配。

 

图 1.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配
切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

（A）构建四个在同一位点包含特定突变质粒（p1-p4），使用差异磷酸化引物（正向或反向）扩增生成 8 个双链 PCR 片段，长度约 672 bp （ds1-ds8）。经 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）纯化后，使用 5 units Lambda 核酸外切酶，经37℃孵育 60 分钟，以特异性降解双链片段中的磷酸化链（2.2 µg），从而产生一系列单链（正链/负链），同一位点碱基为 A/T/C/G。随后使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒（NEB #T1030）对这些单链片段（ss1-ss8）进行纯化。

（B）将纯化后的含有 A/T/C/G 的单链片段进行混合，可形成精准配对的 DNA（绿色 √ 框）或含单碱基错配的双链片段（黄色 × 框）。为了生含错配碱基的双链，在下述条件下，选择特定的正/反义链进行混合：在 1X NEBuffer 2.1 中重新退火，加热至 95℃，再冷却至室温。上述实验可产生 8 种 DNA 错配（A:A、A:C、A:G、C:C、C:T、G:G、G:T、T:T）。（C）如下方法检测该酶切割 dsDNA 中特定错配的能力：在 200 ng 含错配的 dsDNA 中加入 80 units 切割错配核酸内切酶 I，37℃孵育 30 分钟。后将产物进行琼脂糖（1.2%）凝胶电泳并用溴化乙锭染色观察。

 

图 2.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配 

 

切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678S

使用前端带有 FAM 荧光标记（蓝色示踪染料），末端带有 ROX 荧光标记（红色示踪染料）的双链 DNA 片段与80 units 切割错配核酸内切酶 I（+M0678）在 NEBuffer r2.1 中，37℃孵育 30 分钟，用于测定切割错配核酸内切酶 I 切割 dsDNA 中特定错配的能力。样品经毛细管电泳分析显示：酶解样品（+M0678 样品）与未经酶处理的样品（-M0678）相比，T:T、G:T 和 G:G 错配的底物峰发生偏移。此外，在 30 分钟内即可看到 T:C 错配中的含 T 链（蓝色链）出现一些轻微切割。该酶在 T:C 错配底物上的切刻活性随着时间的推移而增加（最多 18 小时，本数据未显示）。
 

胰蛋白酶酶切的 BSA MS 标准 货 号 #P8108S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 蛋白酶&蛋白质组分析

胰蛋白酶酶切的 BSA MS 标准                              收藏

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特性

 标准分子量范围：500-2,400 Da

概述

用胰蛋白酶酶切牛血清白蛋白（BSA）生成多肽复杂混合物，再用碘乙酰亚胺（Iodoacetimide）还原和烷基化（CAM 修饰）。该多肽混合物可用于校准 MALDI-TOF（基质辅助激光解吸/离子化飞行时间质谱仪）或 ESI（电喷雾电离）质谱（TOF、Q-TOF 或离子阱）。
 
胰蛋白酶酶切的 BSA MS 标准 货 号 #P8108S

来源

用胰蛋白酶-ultra，质谱级（NEB #P8101）酶切 BSA（GENEBANK P02769）得到。

质量保证

本品无盐、无甘油和去污剂。