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McrBC 货 号 #M0272L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 限制性内切酶 – 用于表观遗传学甲基化敏感性内切酶

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货 号
规 格
价 格(元)
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#M0272L
2,500 units
3,249.00
无
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#M0272S
500 units
819.00
有
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识别位点

McrBC 货 号 #M0272L

特性

 测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态
 测定胞嘧啶甲基化的 DNA
McrBC 货 号 #M0272L
与 McrBC 一起温育的人类和果蝇基因组 DNA。在脊椎动物中估计有 60-90% 的 CpGs 是被甲基化的（6），而果蝇 DNA 中甲基化的 CpGs 非常稀少（大约 12.5 kb 的 DNA 中仅出现一个甲基胞嘧啶，7）。泳道 1：人类 DNA；泳道 2：与 McrBC 一起温育的人类 DNA；泳道 3：果蝇DNA；泳道 4：与 McrBC 一起温育的果蝇 DNA；泳道 M：BstEII 消化的 λDNA（NEB #N3014）。

概述

McrBC 是一种核酸内切酶，无论甲基胞嘧啶*是在 DNA 的一侧链上还是在对侧链上，McrBC都能切割。对未甲基化的 DNA，McrBC 无作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A)mC 形式的半位点组成，这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb，但是最佳距离为 55-103 bp。McrBC 的切割需要 GTP，当存在不可水解的 GTP 类似物时，该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上，但不能进行切割。McrBC 作用于一对 PumCG 序列元件,以此检测高比例甲基化的 CpGs，但是不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点（CCGG）。
* 5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。

来源

两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB和 McrC 质粒的 E.coli K-12 菌株。

反应条件

NEBuffer 2 + BSA + GTP，37℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X NEBuffer 2
100X BSA
100X GTP (100 mM)
对照质粒 DNA

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时切割 0.5 μg 含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

注意事项

McrBC 在每对半位点之间切割一次，切割位点靠近某一个半位点，但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此，当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时（例如胞嘧啶甲基化基因组DNA），识别序列的可变性导致位点重叠，产生弥散状而不是细窄的条带。

参考文献

有关该产品性质和应用的参考文献请联系我们。 www.neb-china.com，www.neb.com。

Takara 1234A McrBC 200 U酶试剂盒

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McrBC
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 1234A McrBC 200 U ￥350 Takara 1234A McrBC 200 U Takara 1234A McrBC 200 U Takara 1234A McrBC 200 U
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5’ …PumC(Nn)PumC…3’
*Pu: A or G, mC: 5-hydroxymethylcytosine, 5-methylcytosine, 4-methylcytosine, n=40-2,000
 
■ 附带试剂
     10X McrBC Buffer 500 μl
     0.1% BSA 1 ml
     100 mM GTP(100 ×) 50 μl
 
■ 制品说明
McrBC是一种作用于含有甲基胞嘧啶DNA的特异性核酸内切酶，不作用于非甲基化DNA。它能够特异性地识别和切割包含两个(G/A)mC间距在40 bp-2000 bp的DNA序列。(G/A)mC中的甲基化胞嘧啶可以是5-羟甲基胞嘧啶, 5-甲基胞嘧啶或4-甲基胞嘧啶。
 
■ 起 源
大肠杆菌表达的重组体蛋白质。
 
■ 反应温度
37℃
 
■ 活性确认
在50 μl反应液中，37℃下反应1小时，将0.25 μg的含有单一McrBC酶切位点的线型pBR322 (pBR322-mu-BamH I-M Alu I) 完全分解，所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
 
■ 用途
DNA甲基化位点解析 (qAMP：应用Real Time PCR方法定量解析DNA甲基化位点) 。
富集非甲基化DNA (CHARM：Comprehensive high-throughput arrays for relative methylation, Genome Res. 2008 May;18(5):780-90. Epub 2008 Mar 3.)
 
 

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特性

 测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态
 测定胞嘧啶甲基化的 DNA
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与 McrBC 一起温育的人类和果蝇基因组 DNA。在脊椎动物中估计有 60-90% 的 CpGs 是被甲基化的（6），而果蝇 DNA 中甲基化的 CpGs 非常稀少（大约 12.5 kb 的 DNA 中仅出现一个甲基胞嘧啶，7）。泳道 1：人类 DNA；泳道 2：与 McrBC 一起温育的人类 DNA；泳道 3：果蝇DNA；泳道 4：与 McrBC 一起温育的果蝇 DNA；泳道 M：BstEII 消化的 λDNA（NEB #N3014）。

概述

McrBC 是一种核酸内切酶，无论甲基胞嘧啶* 是在 DNA 的一侧链上还是在对侧链上，McrBC 都能切割。对未甲基化的 DNA，Mc rBC 无作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A)mC 形式的半位点组成，这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb，但是最佳距离为 55-103 bp。McrBC 的切割需要 GTP，当存在不可水解的 GTP 类似物时，该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上，但不能进行切割。McrBC 作用于一对 PumCG 序列元件,以此检测高比例甲基化的 CpGs，但是不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点（CCGG）。
* 5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。

来源

两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB 和 McrC 质粒的 E.coli K-12 菌株。

反应条件

NEBuffer 2 + BSA + GTP，37℃ 温育。
热失活：65℃ 20 分钟。

随酶提供的试剂

10X NEBuffer 2
100X BSA
100X GTP (100 mM)
对照质粒 DNA

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时切割 0.5 μg 含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。

浓度

10,000 units/ml。

注意事项

McrBC 在每对半位点之间切割一次，切割位点靠近某一个半位点，但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此，当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时（例如胞嘧啶甲基化基因组DNA），识别序列的可变性导致位点重叠，产生弥散状而不是细窄的条带。

参考文献

有关该产品性质和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。