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DNA Ligation Kit Ver.2.1
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6022Q	DNA Ligation Kit Ver.2.1	1 Kit	￥200
Takara	6022	DNA Ligation Kit Ver.2.1	1 Kit	￥501 ￥401

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■ 制品内容 (Code No.: 6022：100 次)

Solution Ⅰ：Enzyme Solution 3 × 250 μl Solution Ⅱ：Concatenation Buffer 1 × 750 μl Solution Ⅲ：Transformation Enhancer 1 × 200 μl   * 如果每次使用7.5 μl Solution Ⅰ则可反应100次。

■ 制品说明

本试剂盒是用于快速DNA连接反应的简易系统。在本试剂进行连接反应时，只需要加入一种包含T4 DNA Ligase和最适buffer的酶溶液，终反应液体积小。因为反应高效，大多数连接反应只需3分钟，较难的反应也可在30分钟内完成。 转化之前在连接混合液中加入Solution III（转化增强剂）有助于提高转化效率。如果目的DNA含量低或预期的连接效率较低，建议使用Solution III。连接反应液不必经过DNA纯化，可直接用于细菌的转化。   ■ 保存 -20℃。Solution Ⅲ融化后室温保存，如果产生沉淀，可涡旋数分钟溶解。

■ Ligation Kit 的操作示意图及连接效率图

■ 使用注意

1. 试剂盒中的Solution Ⅰ和Solution Ⅱ建议-20℃保存，反复冻融不会失活。Solution Ⅰ因含有T4 DNA Ligase，使用前请在冰中融化并轻柔混匀。Solution Ⅱ可在室温融化并混匀。Solution Ⅲ一旦融化，就应于室温保存，若有沉淀，使用前请涡旋溶解。 2. DNA连接液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如要进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，建议使用乙醇沉淀法*浓缩 DNA，请不要用苯酚抽提DNA连接液。 * 乙醇沉淀法： 1) 在反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇。 2) -20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟。 3) 4℃离心收集DNA。当DNA的含量较少时，可加入carrier使沉淀效果更好。 3. 如果在反应液中加入苯酚，则会出现类似沉淀物的白色浑浊，将不能用于连接反应。

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6023Q	DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞	1 Kit	￥150
Takara	6023	DNA Ligation Kit ＜Mighty Mix＞	1 Kit	￥501 ￥401

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■ 制品内容 (Code No.: 6023)

Ligation Mix 150 μl × 5 按每次反应使用7.5 μl 进行计算，可使用100次。

■ 制品说明

DNA片段连接反应频繁用于基因工程实验操作中。DNA的连接通常使用T4 DNA Ligase，但DNA片段的末端形状对T4 DNA Ligase连接反应速度影响很大。因此，根据DNA片段末端形状需要调整酶的添加量和反应时间。本公司研发的DNA Ligation Kit，不需要调整酶添加量和反应时间，可简便、快速地进行DNA连接反应。 DNA Ligation Kit〈Mighty Mix〉是以往DNA Ligation Kit 的升级产品，连接效率高。本制品具有以下特点： 1) 预混型 是酶和Buffer的预混型试剂，只需在DNA中加入Ligation Mix溶液即可高效完成连接反应，操作简便。本制品反复冻融后，反应性能仍然稳定。 2) 也适用于平滑末端和TA克隆 不仅适用于粘性末端连接，也可以高效地进行平滑末端的DNA连接和TA克隆。 3) 连接反应仅需5分钟 25℃反应5分钟即可完成插入片段与质粒载体的连接，节省实验时间。   DNA Ligation Kit的反应液量和反应条件 克隆编号 DNA溶液：Ligation Mix (体积比) 反应条件 [1] 质粒载体中插入外源DNA片段 [标准操作流程] [快速操作流程] 1：1   16℃，30分钟 25℃，5分钟 [2] PCR产物的T载体克隆 1：1 16℃，30分钟 [3] 线性DNA的分子内连接 (自身环化) 1：1 16℃，30分钟 [4] Linker Ligation，Adaptor Ligation质粒载体中插入linker DNA cDNA与连头 (Linker、 Adaptor) 连接   1：1 1：2 16℃，30分钟 [5] λ噬菌体中插入外源DNA片段(体外包装) 1：2 26℃，10分钟 * 说明书提供的实验结果是表中使用DNA Ligation Kit获得的实验数据，仅供参考。   ■ 保存 -20℃。使用前在冰上融化 (5-10分钟)，吸打混匀。已证实反复冻融50次对反应性能没有影响。

■ DNA Ligation Kit的操作原理图

■ 使用注意

1. DNA Ligation是-20℃保存的冷冻品，反复冻融不会失活。使用前在冰上融化，吸打混合。 2. 使用本试剂盒获得的DNA连接反应液，可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如果进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，建议乙醇沉淀后再进行电泳。 3. DNA连接反应液直接进行苯酚抽提时，反应液会出现白色浑浊。 4. DNA连接反应后进行乙醇沉淀处理时，向反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇，-20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟后，4℃离心回收DNA。DNA含量较少时，加入Carrier使沉淀效果更好。