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荧光底物FAM-LETD-FMK
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货号 | 13416 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 ug | 价格 | 3264 | |
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 | |
| 分子量 | 850.81 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
荧光底物FAM-LETD-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物，caspase 的激活在细胞凋亡中起着核心作用。 FAM-LETD-FMK 为灵敏检测活细胞中活化的 caspase-8 提供了一种方便的方法。 它是细胞可渗透的、无毒的，并且不可逆地与凋亡细胞中激活的 caspase-8 结合。 FAM 标签允许通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光读板器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的荧光底物FAM-LETD-FMK。
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产品说明书
样品实验方案
以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定
1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。
1.2制备2X半胱天冬酶底物（50μM）测定溶液，如下所示：
50 L基质原液
100L DTT（1M）
400L EDTA（100 mM）
10mL Tris缓冲液（20mM），pH = 7.4
1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤1.2）混合，并在室温下孵育溶液至少1小时。
1.4使用荧光酶标仪检测荧光，或使用吸光度酶标仪检测吸光度。
2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针
2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。
2.2根据需要对细胞进行处理。
2.3通过用20mM Hepes缓冲液（HHBS）稀释Hanks中的DMSO储备溶液（来自步骤2.1），制备2X可渗透的半胱天冬酶底物（20μM）测定溶液。
2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液（来自步骤2.3）混合等体积的处理细胞，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育至少1小时。
2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。
2.6用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针（仅适用于＃13470-13476）
3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。
3.2根据需要对细胞进行处理。
3.3将250 X DMSO储备溶液（来自步骤3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL细胞）添加到细胞溶液中，并将细胞在37°C，5％CO 2培养箱中孵育1 小时。
3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。
3.5用流式细胞仪，荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。
参考文献
Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulans
Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361
[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491
Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
Authors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.
Journal: Apoptosis (2000): 265
C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
Authors: Hashiramoto A, Sano H, Maekawa T, Kawahito Y, Kimura S, Kusaka Y, Wilder RL, Kato H, Kondo M, Nakajima H.
Journal: Arthritis Rheum (1999): 954
