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E.coli HST16CR Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli HST16CR Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9131 E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl×10 ￥601 E.coli HST16CR Competent Cells E.coli HST16CR Competent Cells E.coli HST16CR Competent Cells
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■ 制品内容E.coli HST16CR Competent Cells
E.coli HST16CR Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC media* 1 ml × 10
*SOC Media:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
感受态细胞是具有摄取外源DNA能力的受体菌，可摄取基因重组质粒等，是转化时的重要工具。Takara在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出的E. coli HST16CR Competent Cells。
E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）为基础，获得的ColE1 ori的复制相关基因 pcnB缺失的具有高转化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能够降低pUC系列载体的拷贝数，可有效用于难以克隆的含跨膜结构域蛋白质等、克隆基因对大肠杆菌生长有抑制作用的高拷贝载体克隆。
因为是以E. coli HST08 Premium Competent Cells为基础，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr –mcrBC–hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因组文库构建和常规亚克隆。另外，使用pUC系列载体转化时，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选重组体。
X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi –1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA – argF ）U169 , Δ ( mrr – hsdRMS – mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ–
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
[1] 转化效率
转化质粒载体时，转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 plasmid时，确认含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 取出所需管数的感受态细胞后，搬运时请置于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。增加DNA量转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，需要研讨适当的反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，请42℃加热60秒。
5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
  ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。
  ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH调整pH到7.5，加水使终体积为1 L，高压灭菌。
  ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使终体积为1 L，高压灭菌。
6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：
将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。
7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

Competent Cell Preparation Kit酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

Competent Cell Preparation Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9139 Competent Cell Preparation Kit 200 Rxns ￥190 Competent Cell Preparation Kit Competent Cell Preparation Kit Competent Cell Preparation Kit
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■ 制品内容 (200 次量)
Solution A 20 ml
Solution B 20 ml
 
■ 制品说明
大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA (Plasmid DNA、Phage DNA等)，处于这种状态的细胞称为感受态细胞 (Competent Cell)。在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难 (超低温)；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于大多数常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71–18mutS等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上 (转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
 
■ 保存
4℃。
 
■ 注意事项
1. 制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低感受态细胞的转化效率，因此在洗刷完用于制作感受态细胞的专用玻璃器皿或塑料容器后，建议用去离子水浸泡一晚，然后再充分洗净。
2. 制作感受态细胞时使用的菌种，不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种，在LB/抗生素平板培养基上分级划线培养后，挑取单菌落。使用这种菌种制作的感受态细胞，能提高转化效率。
3. 培养感受态细胞制备用菌体时，OD600值的测定应随时进行，以使OD600值控制在0.35～0.5之间。如果OD600值超出此范围，可能降低感受态细胞的转化效率。
4. 用于感受态细胞制备的菌体培养停止后要立即处理，不要将培养液过长时间室温放置，在冰中放置时也不要时间过长。
5. 感受态细胞的制备操作过程中，离心后弃上清时要尽量弃尽，否则会降低感受态细胞的转化效率。
6. 使用Solution A、Solution B悬浮沉淀时要用手指轻轻弹动Microtube管壁，禁止剧烈振荡操作。
7. 为了有效确认感受态细胞的转化效率，建议制作一批高纯度的质粒DNA分装低温 (-20℃) 保存，用作阳性对照，以确认每批制作的感受态细胞的转化效率。