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核酸外切酶 I（E. coli） 货 号 #M0293L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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核酸外切酶 I（E. coli） 货 号 #M0293L 核酸外切酶 I（E. coli） 货 号 #M0293L 核酸外切酶 I（E. coli） 货 号 #M0293L 核酸外切酶 I（E. coli） 货 号 #M0293L

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特性

 3´ →5´ 单链外切酶活性
 PCR 扩增后降解引物 

概述

具有从 3´ →5´ 方向水解单链 DNA 的外切酶活性。 

来源

重组 E. coli 菌株，其携带有从 E. coli NM554 克隆的 exo I 基因。 

反应条件

1X 核酸外切酶 I 反应缓冲液
[67 mM Glycine-KOH（pH 9.5 @ 25℃），6.7 mM MgCl2 ，10 mM 2-巯基乙醇]，37℃ 温育。
热失活：80℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸外切酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 37℃ 条件下，30 分钟内催化释放 10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。单位活性检测条件请联系我们。  

浓度

20,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

拓扑异构酶 I（E. coli） 货 号 #M0301L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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拓扑异构酶 I（E. coli）                              收藏

拓扑异构酶 I（E. coli） 货 号 #M0301L 拓扑异构酶 I（E. coli） 货 号 #M0301L 拓扑异构酶 I（E. coli） 货 号 #M0301L 拓扑异构酶 I（E. coli） 货 号 #M0301L

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特性

 识别错配 DNA
 催化负超螺旋 DNA 松弛 

概述

拓扑异构酶 I（E. coli）催化负超螺旋 DNA 的松弛。拓扑异构酶 I 也参与 DNA 螺旋化的形成和解旋以及将两条互补的单链 DNA 环耦合为双链 DNA 环。完整的全酶分子量为 97 kDa。 

来源

克隆有 topA 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X CutSmart 反应缓冲液
[50 mM KAc，20 mM Tris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，100 μg/ml BSA（pH 7.9 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活：65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

拓扑异构酶 I 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请联系我们。  

单位定义

1 单位指在 25 μl 反应体系，37℃ 条件下，15 分钟内能催化超过 95% 的 0.5 μg pUC19 RF I 型（负超螺旋）DNA 松弛所需要的酶量。DNA 超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。 

浓度

5,000 units/ml 和 15,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献，请联系我们。  

无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 磷酸酶 & 硫酸化酶

无机焦磷酸酶（E. coli）                              收藏

无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L 无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L 无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L

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特性

 反转录反应中提高 RNA 产量
 增强 DNA 复制 

概述

无机焦磷酸酶（E. coli）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。

P207–4 + H20 → 2HP04–2 

来源

无机焦磷酸酶（大肠杆菌）纯化自携带 E.coli 无机焦磷酸酶基因的重组 E. coli 菌株。
 
无机焦磷酸酶（酵母）纯化自重组 E. coli 菌株，携带有从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 内含肽的融合基因。由 Biohelix（现为 Quidel公司的全资子公司）研发，由 New England Biolabs生产。

质保声明

无机焦磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

单位定义

1 单位指标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量。 

浓度

100 units/ml。 

参考文献

 

无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

无机焦磷酸酶（E. coli）                              收藏

无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L 无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L 无机焦磷酸酶（E. coli） 货 号 #M0361L

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#M0361S
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特性

 反转录反应中提高 RNA 产量
 增强 DNA 复制 能力

概述

无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。
P207–4 + H20 → 2HP04–2 

 

来源

无机焦磷酸酶（E. coli）纯化自携带 E. coli 无机焦磷酸酶基因的重组 E. coli 菌株。
无机焦磷酸酶（酵母）纯化自重组 E. coli 菌株，携带有从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 内含肽的融合基因。由 Biohelix 公司（现在是Quidel 公司的全资子公司）研发，由 New England Biolabs 生产。

质保声明

无机焦磷酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

单位定义

1 单位指标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

浓度

100 units/ml。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。 

E. coli 核糖体 货 号 #P0763S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：无细胞表达

E. coli 核糖体                              收藏

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相关产品

PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒
PURExpress Δ Ribosome 试剂盒
PURExpress Δ (aa, tRNA) 试剂盒
PURExpress Δ RF123 试剂盒
PURExpress 二硫键增强剂
E. coli 核糖体
 

特性

 合成用于蛋白质特性研究的分析量级别的样品
 确定开放阅读框
 合成具有活性和功能域的截短蛋白
 在合成的蛋白质中掺入修饰的、非天然的或标记的氨基酸（NEB# E6840 ，#E6850）
 tRNA 结构与功能研究（NEB #E6840）
 核糖体结构与功能研究（NEB# E3313，NEB #P0763）
 释放因子功能研究/ 核糖体展示（NEB #E6850）
 绘制抗原表位图谱 

PURExpress 试剂盒采用 PURE 系统技术，该技术最早由东京大学 Takuya Ueda 博士发明，Biocomber（日本，东京）商业化为 PUResYsTeM®。 

概述

PURExpress® 体外蛋白合成试剂盒是新型无细胞转录/翻译系统，用于基因快速表达分析，是由大肠杆菌翻译所必需组份纯化而构成。PURExpress 系统无核酸酶和蛋白酶的污染，保护了模板 DNA 和 RNA，避免了蛋白的修饰及降解。转录和翻译过程仅需将两管试剂混合，一步反应即可完成，几个小时就可观察实验结果，PURExpress 系统大大地节省了宝贵的实验时间，特别适合于高通量技术。 

E. coli 核糖体 货 号 #P0763S 

使用 PURexpress 体外蛋白合成试剂盒表达蛋白质。25 μl 反应体系中加入 250 ng 模板 DNA 和 20 单位 RNase 抑制剂，37℃ 反应 2 小时。各取 2.5 μl 反应液，进行 10-20% Tris-甘氨酸 SDS-PAGE 电泳分析。红点处指示的为目的蛋白。Marker M 是蛋白质分子量标准（NEB #P7703）

优点

• 适用于环状或线型 DNA 模板
• 合成的蛋白经考马斯亮蓝染色可见
• 约 2 小时即可完成蛋白表达
• 转录/翻译的组份通过亲和层析即可去除   

PURexpress 二硫键增强剂

该专利产品的成分为蛋白质与缓冲液，当 PURExpress 系统合成或 E. coli S30 提取的目的蛋白具有较多二硫键时，能帮助其正确折叠。在合成反应开始时加入 PURExpress 二硫键增强剂，能够协助半胱氨酸硫醇的氧化，并纠正硫醇的错误氧化，从而提高可溶性蛋白及具有功能活性蛋白的产量。 

E. coli 核糖体 货 号 #P0763S 

PURexpress 二硫键增强剂。（PDBE）促进活性 vtPA 的正确折叠。反应按照 PURExpress 系统说明进行，以 vtPA  DNA 为模板。37℃ 下温育 2 小时后，取 5 μl 反应液进行活性检测，在 1 小时内监测发光底物的剪切反应。

PURexpress Δ Ribosome 试剂盒

此试剂盒中移除了核糖体，使得研究蛋白翻译的用户能够使用自己的修饰核糖体。试剂盒还提供单独一管的对照核糖体（2 次反应用量）。   

PURexpress Δ RF123 试剂盒

释放因子通过识别 mRNA 序列上的终止密码子参与蛋白翻译的终止过程。采用 PURExpress 进行核糖体展示实验时，缺乏释放因子能够稳定 mRNA-核糖体-新生肽链形成的三元复合体。因此 cDNA 的回收率会更高。该试剂盒单独提供三种释放因子，用户能够自行选择在有或无释放因子的条件下进行蛋白质体外合成或核糖体展示。   

PURexpress Δ (aa, tRNA) 试剂盒

该试剂盒单独提供 tRNA 与氨基酸，用户能够向反应体系中加入修饰过的氨基酸与 tRNA 混合液进行蛋白质合成反应。   

E. coli 核糖体

大肠杆菌的 70S 核糖体由一个小亚基（30S）与一个大亚基（50S）组成。该核糖体试剂在 NEB 的 PURExpress体外蛋白合成试剂盒（NEB #E6800）中活性很高，在核糖体结构与功能研究中，能够用于药物筛选的靶标以及分离天然核糖体 RNA（5S、16S、23S）的起始材料。该产品溶液浓度为 33.3 mg/ml。   

PURexpress 试剂盒组分

E. coli 核糖体 货 号 #P0763S 

E.coli HB101 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli HB101 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9051 E.coli HB101 Competent Cells 100 μl × 10 ￥413 E.coli HB101 Competent Cells E.coli HB101 Competent Cells E.coli HB101 Competent Cells
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■ 制品内容
E.coli HB101 Competent Cells 100 μl × 10
pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:         2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
  10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出Competent Cells，当1 ng pBR322转化100 μl 细胞时，转化效率>1×108 cfu/μg。
E.coli HB101 Competent Cells 可用来制作DNA文库或重组质粒的亚克隆。
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HB101:
F-, hsd S 20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20 (str), xyl-5, mtl-1,supE44, leuB6, thi-1.
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pBR332对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
转入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 cfu/μg pBR322
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 对于转化，可以使用1.5 ml微量离心管代替14 ml圆底管（BD Code：352059或352057等），
   但转化效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yyeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth : Ingredient per liter water  
  Ttryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
6. 稀释转化混合物时，使用“使用方法”中步骤7中添加的培养基。
7. 一旦感受态细胞解冻，不建议重新冷冻储存。 如果不可避免，应用干冰/乙醇快速冷冻细胞，
   并在-80℃下迅速保存。但是，转化效率将会降低 。
 

E.coli JM109 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli JM109 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9052 E.coli JM109 Competent Cells 100 μl × 10 ￥300 E.coli JM109 Competent Cells E.coli JM109 Competent Cells E.coli JM109 Competent Cells
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Coli – 修饰性PEG

 
 
E.coli JM109 Competent Cells → E.coli JM109 Competent Cells → E.coli JM109 Competent Cells → E.coli JM109 Competent Cells → E.coli JM109 Competent Cells
 
E.coli JM109 Competent Cells
E.coli JM109 Competent Cells  
E.coli JM109 Competent Cells
 
 
■ 制品内容E.coli JM109 Competent Cells
E.coli JM109 Competent Cells 100 μl × 10
pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
  10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli JM109 Competent Cells。
由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 质粒，可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞，也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时，重组体可以利用感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性，通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli JM109： recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15]
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pBR332 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
转入1 ng 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圆底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒，而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。
6. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Tryptone 0.8 g  
  Yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6，添加agar至浓度为0.6%，并高压灭菌。
7. 制备宿主细胞。
8. L-plate: Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5，加入agar至浓度为1.5%，并高压灭菌。
9. 当加入X-Gal或IPTG时，按照以下方法操作：
   ·将100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中，若使用soft agar，比例为 25 μl/3 ml。
   ·将20 mg /ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中，若使用soft agar，比例为50 μl/3 ml。
10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

E.coli CJ236 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli CJ236 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9053 E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10 ￥502 E.coli CJ236 Competent Cells E.coli CJ236 Competent Cells E.coli CJ236 Competent Cells
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■ 制品内容E.coli CJ236 Competent Cells
E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl × 1
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E.coli CJ236 Competent Cells，当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时，转化效率可达1×107 cfu/μg。
E. coli CJ236 Competent Cells适用于制备含有dU的ssDNA。通过CJ236转化后富集的ssDNA，可用于Kunkel法进行定点突变。
 
■ 细胞浓度
1 – 2×109 Bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F’ camr)
 
■ 保存
-80℃。
注意：如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC119对照质粒来验证细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
转入1 ng 的pUC119，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (CORNING #352059或352057)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
   ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
   ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
6. 稀释时使用SOC培养基。
7. 建议在选择培养基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保证F’ 质粒稳定。
8. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Tryptone 0.8 g  
  Yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.6，加入agar至浓度为0.6%，并高压灭菌。
9. YT-plate: Ingredient per liter water  
  Tryptone 8 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5，加入agar至浓度为1.5%，并高压灭菌。
10. 制备感受态细胞。
11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

E.coli DH5α Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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E.coli DH5α Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9057 E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10 ￥300 E.coli DH5α Competent Cells E.coli DH5α Competent Cells E.coli DH5α Competent Cells
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Coli – 修饰性PEG

 
 
E.coli DH5α Competent Cells → E.coli DH5α Competent Cells → E.coli DH5α Competent Cells → E.coli DH5α Competent Cells → E.coli DH5α Competent Cells
 
E.coli DH5α Competent Cells
E.coli DH5α Competent Cells  
E.coli DH5α Competent Cells
 
 
■ 制品内容E.coli DH5α Competent Cells
E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
1 - 2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1
 
■ 保存
-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量控制
1. 转化效率
转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19
 
2. β-半乳糖苷酶的α-互补性
当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：
    ·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。
7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

E. coli MV1184 Competent Cells酶试剂盒Takara Clontech

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上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

E. coli MV1184 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9055 E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10 ￥530 E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells E. coli MV1184 Competent Cells
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■ 制品内容E. coli MV1184 Competent Cells
E. coli MV1184 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium      2%   tryptone
 0.5%   yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E.coli MV1184 Competent Cells，当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时，转化效率可达1×107 cfu/μg。
E.coli MV1184宿主具有琥珀突变抑制因子，只允许没有发生琥珀突变的载体进行复制，可以用作琥珀突变DNA的选择宿主。同时本宿主含有F’质粒，也可作为M13 phage载体DNA的宿主菌，制备单链DNA。此外，本宿主在使用pUC系列质粒载体或M13 phage载体进行转化或转染时，具有α-互补性，可以通过在培养基中加入X-Gal 和 IPTG进行蓝白筛选。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli MV1184：ara,△(lac-proAB),rpsL, thi (Φ80lacZ△M15), △(srl-recA) 306::Tn10 (tet r) / F’ [traD36, proAB+, lac Iq, lacZ△M15]
 
■ 保存
-80℃。
注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC119 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
按照“质粒载体转化”的使用方法，使用1 ng 的pUC119转化到100 μl E. coli MV1184 Competent Cells中，在含有氨苄青霉素的LB平板上筛选，转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119