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Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit酶试剂盒

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Chaperone Plasmid Set
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit ￥1,602 Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit
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■ 制品内容
     Plasmid pG-KJE8 (10 ng/μl) 100 μl
     Plasmid pGro7 (10 ng/μl) 100 μl
     Plasmid pKJE7 (10 ng/μl) 100 μl
     Plasmid pG-Tf2 (10 ng/μl) 100 μl
     Plasmid pTf16 (10 ng/μl) 100 μl
   
【注意】本制品仅限用于科研目的，凡用于商业用途，须获得Takara公司授权许可。了解详细信息以及获取相关许可文件，请致电4006518761或邮件联络service。
 
■ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
 
■ 制品说明
蛋白质的结构和功能分析是后基因组学领域面临的挑战之一，现已受到广泛关注。表达的大量重组蛋白质需要对其结构和功能进行测定，为了满足这一需求，便开发了多种表达系统。
大肠杆菌由于系统简单，在表达系统的选择上范围广泛，因此通常被用作蛋白质表达的宿主菌。但是，外源蛋白质在E.coli中表达时，常常出现表达的蛋白质形成包涵体或被蛋白酶降解的情况，原因大多是表达的蛋白质没能进行正确的折叠，这不利于研究蛋白质功能。
已证实，分子伴侣 (Molecular Chaperones) 或称伴侣蛋白参与蛋白质的折叠过程。为探究蛋白质的体内折叠机理，已投入了大量的研究工作。HSP Research Institute, Inc.在分子伴侣研究领域做出了显著的贡献。 本Chaperone Plasmid Set含有五种类型的质粒，每一种质粒都能有效表达不同类型的伴侣蛋白组，各伴侣蛋白组协同作用、共同参与蛋白质折叠。据报道，目的蛋白质与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收率，而使用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的 (参见图1)。
Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit
图1. 伴侣蛋白对胞内蛋白质合成体系的作用
〈可使用大肠杆菌表达体系〉
伴侣蛋白质粒含有pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr基因)，通常应用在大肠杆菌表达体系中，与ColE1型、具有氨苄抗性 (Ampr) 筛选标记的表达载体共存。各伴侣蛋白质基因位于araB启动子或Pzt-1 (tet) 启动子下游，而目的基因处于lac或其它启动子的控制之下，目的蛋白质与伴侣蛋白可分别诱导表达。另外，质粒上也具备启动子必要的元件 (araC或tetR)。需注意的是该伴侣蛋白质粒不可以与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。例如，常用的pET系列载体等可以使用E.coli BL21 (DE3) 作为宿主，却不可以使用E.coli BL21 (DE3) pLysS和E.coli BL21 (DE3) pLysE，因为它们分别包含了带有Cmr基因、pACYC复制起点的pLysS或pLysE质粒。
此外，可以考虑使用的宿主还有E.coli JM109。
 
质粒 伴侣蛋白 启动子 诱导物 抗性标记
 pG-KJE8   dnaK-dnaJ-grpE araB  L-Arabinose Cm
  groES-groEL Pzt-1  Tetracyclin
 pGro7   groES-groEL araB  L-Arabinose Cm
 pKJE7   dnaK-dnaJ-grpE araB  L-Arabinose Cm
 pG-Tf2   groES-groEL-tig Pzt-1  Tetracyclin Cm
 pTf16   tig araB  L-Arabinose Cm
表1：各质粒编码的伴侣蛋白质种类及诱导物
 
■ 保存
-20℃。
 
■ Chaperone Plasmid载体图谱
Takara 3340 Chaperone Plasmid Set 1 Kit
 
 
 
 

Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set酶试剂盒

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Chaperone Competent Cell BL21 Series
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set ￥2,613 Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set
Takara 9121 Chaperone Competent Cell pG-KJE8/BL21 100 μl × 10 ￥764 Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set
Takara 9122 Chaperone Competent Cell pGro7/BL21 100 μl × 10 ￥535 Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set
Takara 9124 Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21 100 μl × 10 ￥1,106 Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set
Takara 9125 Chaperone Competent Cell pTf16/BL21 100 μl × 10 ￥1,232 Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set
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Chaperone – 修饰性PEG

 

 
■ 制品内容Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set（Code No.: 9120：100 μl × 3 × 6 种）
● Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code No.: 9120)
1. Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 3 × 100 μl
2. Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 3 × 100 μl
3. Chaperone Competent Cells pKJE7/BL21 3 × 100 μl
4. Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 3 × 100 μl
5. Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 3 × 100 μl
6. TaKaRa Competent Cell BL21 3 × 100 μl
7. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
8. SOC medium* 18 × 1 ml
   
● Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 (Code No.: 9121)
● Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 (Code No.: 9122)
● Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 (Code No.: 9124)
● Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 (Code No.: 9125)
1. Competent Cell 10 × 100 μl
2. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
3. SOC medium* 10 × 1 ml
*SOC medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
 10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
     
 
■ 制品说明
Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。
众所周知，分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的。
E.coli BL21来源于B株，为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。
当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时，通常需要三步：
1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli； 2. 用转化体制备感受态细胞；3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品，只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系，因为使用的E.coli BL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外，此感受态细胞有五种质粒，不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。
每种E.coli BL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒，非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为，宿主E.coli BL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。
注意：本产品不可用于电击法转化。
 
■ DNA序列
  pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件)
 
■ 保存
-80℃。
注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。此时，可在使用前用附带的pUC19做转化实验，确认转化效率。不能保存在液氮中。
 
■ 转化效率
Chaperone competent cells：转化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。
TaKaRa competent cell BL21：转化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上进行筛选。
转化效率≥1×106 cfu/μg pUC19
 
■ Genotype
E.coli BL21 : F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm
 
■ 注意事项
1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。
2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能会降低效率。
3. 使用100 μl感受态细胞转化时，高纯度DNA使用量不要超过10 ng，否则转化效率会降低。
4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等，需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时，请于42℃保温60秒)。
5. 除SOC培养基外，L-broth及φb-broth也可使用，但转化效率会有所下降。
6. 稀释时，使用SOC培养基。
7. L-broth plate : 成份 per liter  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1N NaOH调整到pH7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体，但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。
 

Chaperone Competent Cell BL21 Series酶试剂盒Takara Clontech

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Chaperone Competent Cell BL21 Series
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set ￥2,613 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9121 Chaperone Competent Cell pG-KJE8/BL21 100 μl × 10 ￥764 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9122 Chaperone Competent Cell pGro7/BL21 100 μl × 10 ￥535 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9124 Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21 100 μl × 10 ￥1,106 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
Takara 9125 Chaperone Competent Cell pTf16/BL21 100 μl × 10 ￥1,232 Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series Chaperone Competent Cell BL21 Series
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■ 制品内容Chaperone Competent Cell BL21 Series（Code No.: 9120：100 μl × 3 × 6 种）
● Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code No.: 9120)
1. Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 3 × 100 μl
2. Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 3 × 100 μl
3. Chaperone Competent Cells pKJE7/BL21 3 × 100 μl
4. Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 3 × 100 μl
5. Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 3 × 100 μl
6. TaKaRa Competent Cell BL21 3 × 100 μl
7. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
8. SOC medium* 18 × 1 ml
   
● Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 (Code No.: 9121)
● Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 (Code No.: 9122)
● Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 (Code No.: 9124)
● Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 (Code No.: 9125)
1. Competent Cell 10 × 100 μl
2. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
3. SOC medium* 10 × 1 ml
*SOC medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
 10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
     
 
■ 制品说明
Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。
众所周知，分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的。
E.coli BL21来源于B株，为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。
当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时，通常需要三步：
1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli； 2. 用转化体制备感受态细胞；3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品，只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系，因为使用的E.coli BL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外，此感受态细胞有五种质粒，不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。
每种E.coli BL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒，非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为，宿主E.coli BL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。
注意：本产品不可用于电击法转化。
 
■ DNA序列
  pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件)
 
■ 保存
-80℃。
注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。此时，可在使用前用附带的pUC19做转化实验，确认转化效率。不能保存在液氮中。
 
■ 转化效率
Chaperone competent cells：转化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。
TaKaRa competent cell BL21：转化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上进行筛选。
转化效率≥1×106 cfu/μg pUC19
 
■ Genotype
E.coli BL21 : F–, ompT, hsdSB (rB–mB–), gal, dcm
 
■ 注意事项
1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。
2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能会降低效率。
3. 使用100 μl感受态细胞转化时，高纯度DNA使用量不要超过10 ng，否则转化效率会降低。
4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等，需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时，请于42℃保温60秒)。
5. 除SOC培养基外，L-broth及φb-broth也可使用，但转化效率会有所下降。
6. 稀释时，使用SOC培养基。
7. L-broth plate : 成份 per liter  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1N NaOH调整到pH7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。
9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体，但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。