钙离子荧光探针Cal-590-Dextran Conjugate *MW 3,000*

	货号	20508	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3924
	Ex (nm)	563	Em (nm)	584
	分子量	~4000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：20508

产品名称：钙离子荧光探针Cal-590-Dextran Conjugate *MW 3,000*

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~4000

溶剂：水

激发波长(nm)：573

发射波长(nm)：588

产品介绍

钙离子荧光探针Cal-590-Dextran Conjugate *MW 3,000*是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。 荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。 使用贴片移液管或显微注射，可以使用这些葡聚糖缀合的钙指示剂的细胞不渗透盐形式物理地加载细胞。 使用荧光显微镜测量来自这些细胞的荧光信号。 与AM酯形式相比，我们的钙指示剂的葡聚糖形式显示出泄漏和区室化的显着减少。 在荧光钙指示剂葡聚糖缀合物中，Cal-590葡聚糖缀合物可能是比其他红色荧光dextrtan缀合物更好的选择，因为其更高的荧光量子产率和更大的钙荧光增强。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-590-Dextran Conjugate *MW 3,000*。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

参考文献

钙离子荧光探针Cal-630-Dextran Conjugate *MW 3,000*（停产）

	货号	20545	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	0
	Ex (nm)	609	Em (nm)	626
	分子量	~4000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-630-Dextran Conjugate *MW 3,000*是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca²⁺缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca²⁺水平。

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

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	货号	20546	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3924
	Ex (nm)	609	Em (nm)	626
	分子量	~11000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-630-Dextran Conjugate *MW 3,000*是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630提供最强大的均匀荧光测定工具，用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂（如Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Rhod-2 AM）相比，这些钙敏感染料明显更亮，并提供更高的信噪比，大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载可以穿过细胞膜的Calbryte 520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM。一旦进入细胞内，Cal520 AM，Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割，产生带负电荷的荧光Calbryte 染料，留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体表示细胞内钙的释放，这显着增加了Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630的荧光。高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性使Calbryte 520 AM， Calbryte 590 AM或Calbryte 630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外，Calbryte 520，Calbryte 590和Calbryte 630主要定位于细胞溶胶中，不像Rhod-2主要位于线粒体中。 此外，Calbryte 590和Calbryte 630的长Ex / Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂，可与绿色荧光蛋白（GFP）细胞系进行多色检测。 此外，Calbryte 520，Calbryte 590或Calbryte 630钙测定经过优化，可与大多数现有荧光仪器兼容。 Calbryte 520可在488 nm处激发，并与FITC滤光片组配合使用。 Calbryte 590经过优化，可在555 nm激发，并与TRITC / Cy3滤光片组配合使用。 Calbryte 630经过优化，可在594 nm激发，并与TexasRed®滤光片组配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca²⁺缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca²⁺水平。

参考文献

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Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
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Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

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钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW3000*

	货号	20600	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	2604
	Ex (nm)	493	Em (nm)	515
	分子量	~4000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：20600

产品名称：钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW3000*

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~1100

溶剂：水

激发波长(nm)：492

发射波长(nm)：514

产品介绍

钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW3000*是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。可以使用贴片移液器或显微注射将这些葡聚糖偶联的钙指示剂的细胞不渗透盐形式物理加载到细胞上。使用荧光显微镜测量来自这些细胞的荧光信号。与AM酯形式相比，我们的钙指示剂的右旋糖酐形式在泄漏和区室化方面均显着降低。在荧光钙指示剂葡聚糖缀合物中，Cal-520葡聚糖偶联物可能是最佳选择，因为它们具有高的荧光量子产率和钙的大量荧光增强作用。与俄勒冈州绿BAPTA-1葡聚糖相比，Cal-520葡聚糖表现出低得多的本底和大得多的钙诱导的荧光增强。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Cal-520-葡聚糖偶联物*MW3000*。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

参考文献

钙离子荧光探针Cal-520 , AM

	货号	21130	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10×50 ug	价格	2604
	Ex (nm)	493	Em (nm)	515
	分子量	1102.95	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Cal-520 , AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙在各种细胞中充当通用的第二信使。 生命的开始，受精行为，受Ca²⁺调节。 所有类型细胞的许多功能都被Ca²⁺或多或少地调节。 自20世纪20年代以来，科学家们一直试图测量Ca²⁺，但由于Ca²⁺探针的有限性，很少有人成功。 Ridgway和Ashley通过将发光蛋白水母发光蛋白注射到藤壶的巨大肌纤维中来进行Ca²⁺的首次可靠测量。 随后，在20世纪80年代，Tsien及其同事制作了各种荧光指示剂。 其中，基于荧光素的Ca²⁺试剂（如Fluo-3和Fluo-4）为测量Ca²⁺提供了值得信赖的方法。 自从这些Ca²⁺探针发展以来，对Ca²⁺相关的细胞内现象的研究已经飙升。

自从Fluo-3推出以来，Fluo-3成像及其类似物（如Fluo-4）揭示了Ca²⁺信号传导中许多基本过程的空间动力学。 Fluo-3和Fluo-4也已广泛用于流式细胞术和基于微孔板（如FLIPR）的钙检测。然而，对于染料提取物的弱信号和高剂量的丙磺舒需要限制了它们在一些细胞分析中的应用，特别是对于那些对丙磺舒敏感的GPCR和钙通道细胞系。我们开发了无色Cal-520系列钙检测试剂，以解决Fluo-3和Fluo-4的这些局限性。

Fluo-3和Fluo-4在细胞应用中最重要的特性是它们的吸收光谱与氩离子激光源在488nm激发相容，并且响应Ca2 +结合的荧光强度增加非常大。使用我们的Cal-520 Ca²⁺检测试剂保留了这两个有价值的特性。 Cal-520试剂的吸收和发射峰分别为490nm和514nm。它们可以用488nm的氩离子激光很好地激发，并且它们发射的荧光（波长514nm）随着Ca²⁺的增加而增加。确定Cal-520在与Ca²⁺结合后经历> 200倍的荧光增加。由于刺激后许多细胞中Ca²⁺的增加范围通常为5至10倍，因此Cal-520是在该区域中以高灵敏度使用的优异探针。 Cal-520的Kd估计为380nM（22℃，pH 7.0-7.5），但该值可能受pH，粘度和体内条件下结合蛋白的显着影响。

除了方便的488 nm激发波长和钙的大荧光增强外，与包括Fluo-3和Fluo-4在内的所有其他现有荧光钙指示剂相比，Cal-520具有更好的信号背景（S / B）比。此外，Cal-520对位于细胞膜中的有机阴离子转运蛋白具有更强的抵抗力，因此具有比Fluo-3和Flu-4更好的细胞保留特性。这一特性使Cal-520更适合HTS应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

将Cal-520®，AM加载到活细胞中的方案

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM 丙磺舒溶液

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520®，AM原液
a.Cal-520®，AM的用量：1毫克
b.所需浓度：2 mM
c.在合适的容器中，将1mg的Cal-520，AM与453.33μL的无水DMSO混合。

3.使用10μMCal-520®，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
a.最终孔内浓度为Cal-520®，AM：5μM
b.Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
c.最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
d.在合适的容器中混合16μL的Cal-520，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。

注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520®的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的丙磺舒。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
a.该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至：5μMCal-520®，AM，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育
a.将添加染料的培养基在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
b.将添加染料的培养基在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM 丙磺舒，准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）
a.在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。 接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM 丙磺舒。
a.首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
b.在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.实验观察
a.为您的样品添加所需的处理。
b.在Ex / Em = 492/514 nm进行观察。

附加信息

1 M NaOH配方：
1.在合适的容器中准备2 mL蒸馏水。
2.在混合下向溶液中缓慢加入100mg NaOH。
3.加入蒸馏水至体积为2.5 mL。
4.在室温下将溶液储存在塑料容器中。

注意：步骤2这是一个放热过程，应遵循适当的预防措施和指南。

10％Pluronic F-127配方：
1.将1克Pluronic®F-127（Cat#20050）溶解在10毫升蒸馏水中，制成10％（w / v）储备溶液。
2.在40至50℃的温度下加热10％Pluronic F-127储备溶液约30分钟。
3.根据其储存规格储存多余的10％Pluronic®F-127。

25 mM Probenecid配方：
1.在合适的容器中，将1小瓶（72mg）的丙磺舒（Cat＃20060）溶解在0.3mL的1M NaOH中。
2.加入HHBS或您选择的缓冲液，直至体积为10 mL。
3.根据其储存规格分装并储存任何未使用的25 mM 丙磺舒溶液。

重点提示：
1.可根据实验设置的需要和体积调整浓度。
2.Pluronic®F-127（PF-127）是一种非离子表面活性剂，对细胞无毒。 PF-127通常与染料一起使用AM酯改善其水溶性。
3.如果您的细胞含有有机体阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（0.5-1.0 mM）添加到染料工作溶液中减少脱酯化指标的泄漏。
4.细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。
5.如果孵育> 2小时，染料在一些细胞系上表现更好。

参考文献

In Neurobiology, Cal-520® AM has been used to study:
» Neuron single action potentials in neocortical neurons both in vitro and in vivo, and associated voltage-dependent calcium channels^[1]
» Superior colliculus in mice in conjunction with two-photon calcium imaging to visualize retinal ganglion cells in the superficial lamina^[2]
» Aldolase C compartments in mice, looking at complex spike synchrony and its relation to sensory processing in awake animals^[3]
» Neural circuits in brain slice and whole brain preparation, specifically looking at individual action potentials in vivo^[4]
» Ca2+ dependent cell signaling pathways using cultured human neuroblastoma SH-SY5Y cells and high-speed video-microscopy^[5]

In Cell Signaling, Cal-520® AM has been used to study:
» Intracellular calcium in sperm using the microplate reader platform as a means to quantitating parameters such as motility^[6]
» Calcium signaling pathways in meniscus fibrochondrocytes by way of visualizing calcium localization and concentration^[7]
» Ca2+ mediated cellular signaling in relation to inositol triphosphate and its flux through gap junctions^[8]
» Retinal wave-mediated formation of calcium transients in Müller glial cells with focus on expression of GCaMP3^[9]
» Ca2+ signaling pathways in zebrafish sperm, specifically looking at calcium flux resulting from cGMP-induced hyperpolarization^[10]

In Cardiology, Cal-520® AM has been used to study:
» Sarcoplasmic reticulum insofar as its role in cardiac excitation-contraction coupling and calcium spark events^[11]
» Optical mapping of calcium in cardiac tissue slices to develop a framework for future investigations into calcium transients^[12]
» Sodium-calcium exchanger functionality and mechanism with regards to burst pacemaker activity in knockout mice^[13]
» Pacemaker modulation in embryonic heart as a function of inositol-1,4,5-triphosphate receptors^[14]
» Calcium current and the role of potassium channel-interacting protein 2 (KChIP2) in mice with regards to heart failure^[15]

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