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Annexin V-APC 偶联物 货号: A6080S/A6080L 规格: 0.1 mL/1 mL

发表于由

Annexin V-APC 偶联物

产品货号: A6080S/A6080L

产品规格: 0.1 mL/1 mL

目录价（元）:467/3536

推荐仪器：流式细胞仪

大包装询价


产品概述：

储存条件

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

 

光谱特性

Annexin V-APC：Ex/Em = 650/660 nm

 

产品介绍

Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用荧光蛋白APC标记的 Annexin V，即 Annexin V-APC，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。正常细胞不会被Annexin V-APC所染色，发生凋亡或坏死的细胞会被Annexin V-APC所染色。Annexin V-APC可以与部分非渗透性的细胞核染料 ( 7-AAD/PI ) 等联合使用，区分处于不同凋亡时期的细胞。

 

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。

3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h之内进行分析。

4. 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-APC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。

5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。

6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。

7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书：

Annexin V-APC 偶联物 货号: A6080S/A6080L 规格: 0.1 mL/1 mL A6080S/A6080L    
MSDS：
MSDS A6080 Annexin V-APC

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100T

发表于由

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒

产品货号: A6079S/A6079M/A6079L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价（元）:317/1194/1769

推荐仪器：流式细胞仪（主推）、荧光显微镜

大包装询价


产品概述：

产品内容：

组分

A6079S (10T)

A6079M (50T)

A6079L (100T)

A. 1× Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. Annexin V-PE

50 μL

250 μL

500 μL

C. RedNucleus II   

100 μL

500 μL

1 mL

 

储存条件

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

Annexin V-PE 储存于50 mM Tris, 100 mM NaCl, 1% BSA, 0.02% NaN3, pH 7.4 的溶液中。

 

光谱特性

Annexin V-PE：Ex/Em=488/578 nm

RedNucleus II：Ex/Em=635/695 nm

 

产品介绍

Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用荧光蛋白PE标记的 Annexin V, 即 Annexin V-PE，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，发生凋亡或坏死的细胞会被Annexin V-PE所染色。Annexin V-PE可以与部分非渗透性的细胞核染料（7-AAD/PI）等联合使用，区分处于不同凋亡时期的细胞。

本试剂盒中提供的RedNucleus II是一种远红光染料，属于蒽醌类化合物，不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜，是非渗透性的，但是可以快速染色死亡和透化细胞中的细胞核/dsDNA。RedNucleus II是一种理想的碘化丙啶（PI）和7-AAD的替代物，与Annexin V-PE联用，无需补偿调节，具有更好的光谱特性：不受紫外线的激发，也不与PE/PE同系物重叠发射，故可以和FITC，PE及紫色荧光染料结合用于多色分析。与Annexin V-PE联用时，RedNucleus II被排除在活细胞和早期凋亡细胞外，而晚期凋亡细胞和死细胞则同时被Annexin V-PE和RedNucleus II结合染色呈现双阳性。

Annexin V-PE/RedNucleus II细胞凋亡检测试剂盒可用流式细胞仪及或其他荧光检测设备进行检测。

 

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。

3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h之内进行分析。

4. 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，RedNucleus II摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-PE的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。

5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。

6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。

7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书：

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100T A6079S/A6079M/A6079L    
MSDS：
MSDS A6079 Annexin V-PE and RedNucleus Ⅱ Apoptosis Kit
常见问题解答：

◆为何染色结果显示细胞凋亡率过高？

1. 凋亡时间处理过长，使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件，使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞，胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜，使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合，导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后，让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟，以恢复其膜完整性。

◆实验结果使用什么仪器观察？
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察，但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸（PS），只是凋亡细胞膜外更多，可以结合更多的Annexin V，流式细胞仪更灵敏，可以区分出微小差异，将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群，但如果用荧光显微镜，可能观察不到这一差别，尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡，推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

◆流式细胞仪检测细胞凋亡，结果图中的各个象限代表什么状态的细胞？
左上角：Annexin V-/PI+，机械损伤细胞；右上角: AnnexinV+/PI+，晚期凋亡细胞或坏死；右下角：AnnexinV+/PI-，早期凋亡细胞；左下角：AnnexinV-/PI-，正常细胞。

◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

◆各象限代表的细胞状态问题？
Q1：(AnnexinV-染料)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多，实验结果越不可信，建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3：(AnnexinV-染料)+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4：(AnnexinV-染料)-/PI-，此区域的细胞为活细胞。

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100T


◆假阳性问题？

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合剂，使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长，吹打细胞要轻柔，因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤，造成假阳性。细胞消化下来后，建议在培养箱中在孵育30min，使细胞膜恢复完整性，避免假阳性，或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液，必须去除血液中的血小板，因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，干扰实验结果。建议：可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板， 最后细胞多洗几遍，减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻，导致假阳性，所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡，因此通常不需要处理大于48小时以上，诱导时间过长会使营养物质耗尽，导致细胞状态差，假阳性结果偏高。

◆荧光染料选择的问题？
1. 实验样本是否带荧光，因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光，GFP与YF488/FITC通道重叠，不能选择YF488/FITC标记的Annexin V，此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V，用7-AAD代替PI，若有633 nm激光管，可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管，首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V，因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题，可以减少调节补偿的烦恼，如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光，本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光，对PI通道的检测造成严重干扰，而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

◆圈门问题？
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时，所选细胞范围会对结果造成较大影响，所以在分析数据时，要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内，这样实验结果才会更可信。如图，使细胞群大概位于对角线上，并且细胞群较集中，群内细胞比例要在80%以上，如果细胞全部圈入，细胞比例才50%或者更低，说明细胞被压在了坐标轴上，这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测，通常分群不太规则，这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式：
Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100TAnnexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100T

◆免疫染色与凋亡染色顺序问题?
Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗？
可以，但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞，可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去，再在Binding buffer（含钙离子）中标记Annexin V。

◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

◆固定、冷冻、切片或解离的组织，还可以做流式细胞分析吗？
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个，活性好，这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响，因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡，同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片，不宜上流式检测，所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本，即取材后立即检测，效果最好。 液氮保存的◆组织块，可以将组织标本进行切片，然后做原位染色，观察组织细胞的凋亡。

◆Annexin V可以用在植物和细菌中吗？
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡，具体实验步骤可参考相关文献。

Annexin V-PE 偶联物 货号: A6065S/A6065L 规格: 0.1 mL/1 mL

发表于由

Annexin V-PE 偶联物

产品货号: A6065S/A6065L

产品规格: 0.1 mL/1 mL

目录价（元）:467/3536

推荐仪器：流式细胞仪

大包装询价


产品概述：

储存条件

4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

 

光谱特性

Annexin V-PE：Ex/Em = 488/578 nm

 

产品介绍

Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用荧光蛋白PE标记的Annexin V即Annexin V-PE,与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，发生凋亡或坏死的细胞会被Annexin V-PE所染色。Annexin V-PE可以与部分非渗透性的细胞核染料（7-AAD/PI）联合使用，区分处于不同凋亡时期的细胞。

 

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。

3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1 h之内进行分析。

4. 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-PE的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。

6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书：

Annexin V-PE 偶联物 货号: A6065S/A6065L 规格: 0.1 mL/1 mL A6065S/A6065L    
MSDS：
MSDS A6065 Annexin V-PE

Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns酶试剂盒

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

膜联蛋白（Annexin V）检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns ￥3,188 Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns
Clontech 630110 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 200 Rxns ￥9,280 Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns
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ApoAlert Annexin V-FITC 细胞凋亡试剂盒提供了一种简单有效的方法来检测活细胞中最早的细胞凋亡事件之一——磷脂酰丝氨酸 (PS) 的外翻。在诱导细胞凋亡后不久，PS 从质膜的内小叶转移到外小叶。该测定方法使用对 PS 具有强且特异性亲和力的膜联蛋白 V 来监测由于细胞凋亡而发生的 PS 易位。标记的膜联蛋白 V 提供了一种简单的染色分析，可通过流式细胞术或荧光显微镜监测细胞凋亡。
 
概述
易用性：非酶促测定，无需固定
操作简单：只需 10 分钟即可完成的一步法操作流程
通用性：适用于贴壁细胞和悬浮细胞
 
更多信息
应用
早期凋亡检测
通过流式细胞术或荧光显微镜监测磷脂酰丝氨酸易位
 
 
产品详情请点击：Clontech 630109 ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis Kit 50 Rxns
 
 

Annexin V, FITC标记 货号20030-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Annexin V, FITC标记

Annexin V, FITC标记

Annexin V, FITC标记 货号20030 货号 20030 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V, FITC标记是美国AAT Bioquest生产的膜联蛋白，膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白V是研究细胞凋亡的有用工具。它被用作探针以检测在细胞表面上表达磷脂酰丝氨酸的细胞，这是细胞凋亡中发现的特征以及其他形式的细胞死亡。有多种参数可用于监测细胞活力。膜联蛋白V-染料结合物广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的易位来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。该荧光FITC-膜联蛋白V缀合物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白V的细胞凋亡检测的微孔板检测，我们建议您使用我们的Cell Meter 试剂盒。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V, FITC标记探针。

点击查看光谱

产品说明书

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1     制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2     用测试化合物处理细胞一段时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3     离心细胞，得到1-5×10 5个细胞/管。

1.4     将细胞重悬于200μLAnnexin V缀合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5     在细胞中加入2μL膜联蛋白V缀合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于死细胞。

1.6     在室温下进行30至60分钟，避光。

1.7     在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8     使用流式细胞仪或荧光显微镜检测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当滤波器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试，因为在细胞分离过程中可能会发生特定膜损伤。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1    吸取步骤1.6中的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到载玻片上并盖上盖玻片。

注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上培养细胞。 与膜联蛋白V结合物孵育后（步骤1.6），用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片上。 将盖玻片倒在载玻片上并使细胞可视化。 与膜联蛋白V缀合物一起孵育后，也可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.2     在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。

 

参考文献

Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358–1361

 

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产品名称 货号
Annexin V, TRITC标记 Cat#20031

说明书
Annexin V, FITC标记.pdf

Annexin V, TRITC标记 货号20031-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V, TRITC标记

Annexin V, TRITC标记

Annexin V, TRITC标记 货号20031 货号 20031 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 544 Em (nm) 570
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V, TRITC标记是美国AAT Bioquest生产的膜联蛋白，膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白V是研究细胞凋亡的有价值的工具。它用作检测在细胞表面表达磷脂酰丝氨酸的细胞的探针，这是细胞凋亡以及其他形式的细胞死亡中发现的特征。有多种参数可用于监测细胞活力。Annexin V-dye共轭物被广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。这种荧光TRITC-Annexin V偶联物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白V的细胞凋亡检测的微孔板检测，我们建议您使用Cell Meter™试剂盒。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V, TRITC标记探针。

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产品说明书

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1     制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl 2，pH 7.4。

1.2     用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3     离心细胞，得到1-5×10 5个细胞/管。

1.4     将细胞重悬于200μLAnnexin V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5     在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6     余ncubate在室温下进行30至60分钟，避光。

1.7     在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μLAnnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8     使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V 结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1     移液器从步骤1.6，将细胞悬浮液冲洗1-2次用甲nnexin V-结合测定缓冲液（来自步骤1.1） ，然后与A重悬细胞 nnexin V-结合测定缓冲液（来自步骤1.1） 。将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V缀合物（步骤1.6）孵育后，用Nnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将A nnexin V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2     在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。

 

参考文献

Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358–1361

 

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Annexin V-Cy3标记 货号20065 货号 20065 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2604
Ex (nm) 555 Em (nm) 569
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-Cy3标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V-Cy3检测试剂。 

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概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟，避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1移取步骤1.6的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育（步骤1.6）后，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

数据分析

        下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

Annexin V-Cy3标记 货号20065

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

 

参考文献

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

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Annexin V-iFluor 633标记 货号20069-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-iFluor 633标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V-iFluor 633检测试剂。 

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1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟，避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1移取步骤1.6的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育（步骤1.6）后，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

数据分析

        下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

Annexin V-iFluor 633标记 货号20069

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

 

参考文献

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

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Annexin V-iFluor 350标记 货号20070-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-iFluor 350标记

Annexin V-iFluor 350标记 货号20070 货号 20070 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 345 Em (nm) 450
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-iFluor 350标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V-iFluor 350检测试剂。 

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适用仪器

流式细胞仪  
激发： 355nm激光
发射: 450/50nm滤波片
通道： Pacific Blue通道
荧光显微镜  
推荐孔板： 黑色透明
通道： Pacific Blue通道

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分析方案

概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟，避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1移取步骤1.6的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育（步骤1.6）后，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

数据分析

        下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

Annexin V-iFluor 350标记 货号20070

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

 

参考文献

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Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

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Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

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Annexin V-iFluor 594标记 货号20073-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-iFluor 594标记

Annexin V-iFluor 594标记

Annexin V-iFluor 594标记 货号20073 货号 20073 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 588 Em (nm) 604
分子量 ~36000 溶剂 Water
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Annexin V-iFluor 594标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具，旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合，它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此，我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用，以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Annexin V-iFluor 594检测试剂。 

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分析方案

概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞：

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选：在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭，用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟，避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）以增加体积（参见下面的步骤1.8）。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析：

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析：

3.1移取步骤1.6的细胞悬液，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育（步骤1.6）后，用膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）冲洗1-2次，并将膜联蛋白V结合测定缓冲液（来自步骤1.1）加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后，细胞也可以在2％甲醛中固定，并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

数据分析

        下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

Annexin V-iFluor 594标记 货号20073

图1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（蓝色）或用1μM星形孢菌素（红色）处理5小时，然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪，使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

 

参考文献

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

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