NAD/NADH检测试剂盒 货号: N6035S/N6035 规格: 20T/100T

NAD/NADH检测试剂盒

产品货号: N6035S/N6035

产品规格: 20T/100T

目录价(元):295/1228

大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

N6035S20T

N6035100T

A. NAD+/NADH提取液

10 mL

50 mL

B. 乙醇脱氢酶

44 μL

220 μL

C. 显色液

0.22 mL

1.1 mL

D. NADH

1 mg

5 mg

E. 10× NADH配制液

1 mL

5 mL

F. 反应缓冲液

1.1 mL*2

11 mL


储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。

产品介绍
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD)是所有细胞中都存在的一种辅酶,包括NAD+(氧化型)和NADH(还原型)两种形式。NAD+既是氧化还原反应过程中传递电子的辅酶,又可以作为很多酶的底物来参与细胞内反应。NAD+在细胞和体内发挥着重要的功能,其合成和降解及其产物参与细胞凋亡、代谢调控和基因表达的调控等,并且NAD+的减少是细胞死亡的主要因素之一。NAD+在调节细胞氧化还原状态方面的重要性以及调控信号通路及转录方面的功能,使得NAD+及其合成和消耗的酶成为多种疾病的潜在药物靶点。传统的NAD+/NADH和NADP+/NADPH测定是通过检测340 nm处的吸收来完成的,该方法灵敏度低且易受干扰。NAD/NADH检测试剂盒是一种基于WST-8的显色反应,通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中NAD+(氧化型辅酶Ⅰ)和NADH(还原型辅酶Ⅰ)各自的量、比值和总量的检测试剂盒。NAD/NADH检测试剂盒能特异性地检测NAD+和NADH,而不检测NADP+和NADPH,在反应过程中NAD+被还原为NADH,NADH将WST-8还原成橙黄色formazan(甲臜),在450 nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中NAD+或NADH的总量呈比例关系。本试剂盒可检测0.1 μM-10 μM NAD+或NADH。

注意事项
1. 建议NADH标准品溶解后小量分装保存,避免反复冻融。
2. NAD+/NADH提取液粘稠,使用过程中务必保证和待加入的体系充分混匀。
3. 加样和混匀过程中,应避免产生气泡影响最终的吸光度检测。
4. 由于NAD+/NADH不稳定,易降解,所以尽量使用新鲜样品进行检测。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

NAD/NADH检测试剂盒 货号:               N6035S/N6035  规格:               20T/100T N6035S/N6035    

SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒 货号: S6007S/S6007L 规格: 25T/100T

SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒

产品货号: S6007S/S6007L

产品规格: 25T/100T

目录价(元):680 /2300

推荐仪器:流式细胞仪、荧光显微镜、荧光酶标仪

大包装询价


产品概述:

产品内容:

组分

S6007S (25T)

S6007L (100T)

A. SuperView 488 Caspase-3 Substrate, 0.2 mM in DMSO

125 μL

500 μL

B. Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM in DMSO

20 μL

100 μL


储存条件
储存于4ºC,其中A组分需避光,有效期见外包装。

光谱特性
SuperView 488:Ex/Em = 500/530 nm (with DNA)

产品介绍

SuperView 488 Caspase-3活细胞分析试剂盒包含SuperView 488 Caspase-3底物和Ac-DEVD-CHO Caspase-3抑制剂。SuperView 488 Caspase-3 Substrate为基于Caspase-3活力检测细胞凋亡提供了有效的工具,适用于荧光显微术和流式细胞术。
相比其他基于(FLICA)分析的Caspase的荧光底物或荧光抑制剂,SuperView 488 Caspase-3 Substrate检测Caspase-3活性的同时不会抑制完整细胞的凋亡过程。
Substrate由耦合Caspase-3 DEVD识别序列的荧光DNA 染料组成。Substrate最初无荧光,穿过细胞膜进入细胞质。在凋亡细胞中,Caspase-3剪切Substrate,释放高亲和性的DNA染色,这种染料迁移到细胞核标记DNA并发出明亮的绿色荧光。因此,SuperView 488 Caspase-3 Substrate是双功能的,既可以检测Caspase-3活性,又可视化细胞核在细胞凋亡进行中的形态学变化。SuperView 488染色可以甲醛固定并兼容后续免疫染色实验。

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 细胞可以用终浓度为1 μM的Hoechst 33342染料共同染色,使细胞核产生蓝色荧光染色(Ex/Em = 346/460 nm)。
3. SuperView 488染色可以被甲醛固定,但与甲醇固定不兼容。
4. 甲醛固定的SuperView 488染色细胞可以用0.1% TritonX-100处理后进行后续染色,但处理后的染色的亮度可能会减弱。
5. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

SuperViewTM 488 Caspase-3 活细胞分析试剂盒 货号:               S6007S/S6007L  规格:               25T/100T S6007S/S6007L    
MSDS:

MSDS S6007 SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells

PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%) 货号: S6171S/S6171 规格: 10 gels/125 gels

PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)

产品货号: S6171S/S6171

产品规格: 10 gels/125 gels

目录价(元):36/375

大包装询价


产品概述:

储存条件
A-D组分4℃保存,E组分-20℃保存,有效期见外包装

产品组分

组分

规格

10 gels

125 gels

A. 上层胶溶液(

8 mL

80 mL

B. 彩色上层胶缓冲液(

8 mL

80 mL

C. 10%下层胶溶液(

30 mL

250 mL

D. 下层胶缓冲液(

30 mL

250 mL

E. 改良型促凝剂

1 mL

8 mL

产品介绍

PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)采用预混液形式的配方,制胶时只需加入改良型促凝剂即可,方便快捷。上层胶为彩色(紫色)凝胶,便于点样。本产品制备的凝胶也可用于非变性PAGE胶电泳实验。
本试剂盒配备改良型促凝剂,无TEMED刺激性气味,稳定性好、催化效果佳,制备一块或多块凝胶仅需二十分钟左右。为方便取用,已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少3个月。
制胶数量(125 gels):125块(0.75 mm);>90块(1.00 mm);>60块(1.50 mm)


注意事项

1. 本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应,类似于预制胶,与传统PAGE胶相比,蛋白条带分离效果更好,小分子蛋白(比如10 kDa)也可以清晰地分离开,且蛋白条带更窄更锐利。
2. 改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整,加入较多的促凝剂可以加速凝胶,反之亦然。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,温度过高时建议适当降低促凝剂的使用量。
3. 使用前胶溶液及缓冲液恢复至室温,可有效避免凝胶过程中气泡的产生。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

凝胶浓度及分离范围参考:

胶浓度

分离范围(kDa

最佳范围(kDa

7.5%

35-250

50-150

10%

20-180

30-100

12.5%

10-150

20-70

15%

8-100

10-50


说明书:

PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%) 货号:               S6171S/S6171  规格:               10 gels/125 gels S6171S/S6171    

Super ECL Prime(灵敏化学发光检测试剂盒) 货号: S6008S/S6008M/S6008L 规格: 10 mL/100 mL/500 mL

Super ECL Prime(灵敏化学发光检测试剂盒)

产品货号: S6008S/S6008M/S6008L

产品规格: 10 mL/100 mL/500 mL

目录价(元):88/486/1253

推荐仪器:凝胶成像仪

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃密封避光保存,短期可放置于室温。有效期见外包装。

组分

   规格

 S6008S10mL

 S6008M100mL

S6008L500mL

A

5 mL

50 mL

250 mL

B

5 mL

50 mL

250 mL

产品介绍
Super ECL Prime 免疫印迹底物是用于增强型化学发光 (ECL)的入门级过氧化物酶底物,性能可靠,但成本更低,性价比极高。
Super ECL Prime 免疫印迹底物适用于辣根过氧化物酶 (HRP)的检测,该底物采用了与其它品牌相同的鲁米诺和过氧化物酶底物配方,无需对检测条件或孵育方案进行优化,从而大大节约成本。
Super ECL Prime(灵敏)特点:
1. 简单易用;
2. 灵敏度更高:可检测较低表达的蛋白;
3. 价格更经济:相比其他品牌的类似产品,在具有高品质和高性能的同时,价格更低。

注意事项
1. 发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能有降低,操作时注意避光。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光会加深背景;蛋白过量,会使条带强弱变化失去线性关系;曝光不足,则条带模糊或较浅。
3. 如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 曝光。
4. 由于发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体稀释浓度为一抗 1:1000~1:4000,二抗 1:5000~1:10000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带。
5. 某些保鲜膜可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN3 会抑制 HRP 活性,回收二抗应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。

说明书:

Super ECL Prime(灵敏化学发光检测试剂盒) 货号:               S6008S/S6008M/S6008L  规格:               10 mL/100 mL/500 mL S6008S/S6008M/S6008L    
MSDS:

MSDS S6008 Super ECL Prime
使用本产品的文献:

Dihydrocapsaicin Inhibits Cell Proliferation and Metastasis in Melanoma via Down-regulating b-Catenin Pathway
Shaomin ShiChongyang LiYanli ZhangChaowei DengWei LiuJuan DuQian LiYacong JiLeiyang GuoLichao LiuHuanrong HuYaling LiuHongjuan Cui

Suggest a Research Topic

NO检测试剂盒(Nitric Oxide Assay Kit) 货号: N6025S/N6025L 规格: 200T/1000T

NO检测试剂盒(Nitric Oxide Assay Kit)

产品货号: N6025S/N6025L

产品规格: 200T/1000T

目录价(元):239/799

推荐仪器:酶标仪

大包装询价


产品概述:

储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。

组分

规格

N6025S200T

N6025L1000T

A. Griess Reagent I

10 mL

50 mL

B. Griess Reagent II

10 mL

50 mL

C. 1 M NaNO2

200 μL

1 mL

产品介绍
Griess 试剂可用于光度法检测亚硝酸盐。试剂含有两种化学物质,磺胺酸和 N-(1-萘基)乙二胺。在酸性条件下,磺胺酸被亚硝酸盐转化成重氮盐,可与 N-(1-萘基)乙二 胺形成高度着色的偶氮染料,可以在 548 nm 检测此染料:由于 NO 极其不稳定,被氧化生成亚硝酸盐和硝酸盐,Griess 通过检测亚硝酸盐的含量,间接反映出 NO 的含量。

注意事项
1. 在使用 Griess 试剂之前,将其恢复至室温,并检查溶液是否有沉淀。如果 Griess Reagent I 取出时含有沉淀,可将其置于 37℃水浴锅中,水浴直至沉淀溶解。
2. 本品有潜在危害性,避免长时间或反复接触。避免进入眼睛,皮肤或衣服上。请穿实验服并戴一次性手套操作。
说明书:

NO检测试剂盒(Nitric Oxide Assay Kit) 货号:               N6025S/N6025L  规格:               200T/1000T N6025S/N6025L    

Super ECL Star(特超敏化学发光检测试剂盒) 货号: S6010S/S6010L 规格: 10 mL/100 mL

Super ECL Star(特超敏化学发光检测试剂盒)

产品货号: S6010S/S6010L

产品规格: 10 mL/100 mL

目录价(元):175/884

推荐仪器:凝胶成像仪

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃密封避光保存,短期可放置于室温。有效期见外包装。

组分

规格

S6010S10mL

S6010L100mL

A

5 mL

50 mL

B

5 mL

50 mL

产品介绍
Super ECL Star 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度的增强型化学发光(ECL)底物,可通过辣根过氧化物酶 (HRP)实现极低表达或高价值蛋白的免疫印迹检测。Super ECL Star 特超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,Super ECL Star 超敏发光液是极度灵敏的荧光 ECL 检测试剂。
Super ECL Star(特超敏)特点:
1. 具有极高灵敏度和高信噪比,使用适当的一抗和二抗时,可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测极低表达或高价值蛋白的条带;
2. 明亮信号。通过胶片或成像系统曝光,易于捕获图像;
3. 价格经济:配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测。
• 10 ng-0.2 μg/mL 一 抗 ( 或 1 mg/mL 的 稀 释 1:5,000-1: 100,000)
• 2 ng-10 ng/mL 二 抗( 或 1 mg/mL 的 稀释 1:100,000-1: 500,000)

注意事项
1. 步骤 1~4 可在日光灯下操作,但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系,曝光不足则条带模糊。
3. 如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和曝光。
4. 由于特超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体稀释浓度为一抗 1:5000~1:100,000,二抗 1:100,000~ 1: 500,000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带。
5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN3 能抑制 HRP 活性,回收第二抗体应避免使用 NaN3,如必需使用勿超过 0.01%。
说明书:

Super ECL Star(特超敏化学发光检测试剂盒) 货号:               S6010S/S6010L  规格:               10 mL/100 mL S6010S/S6010L    
MSDS:

MSDS S6010 Super ECL Star
使用本产品的文献:

1.Porcine epidemic diarrhea virus-induced epidermal growth factor receptor activation impairs the antiviral activity of type I interferon
Lijun Yang, Jiayu Xu, Longjun Guo, Taijie Guo, Lu Zhang, Li Feng ,Hongyan Chen, YUE Wang
journal of virology (2018) DOI: 10.1128/JVI.02095-17

2.
Integrin β1 promotes peripheral entry by rabies virus
Lei Shuai, Jinliang Wang, Dandan Zhao, Zhiyuan Wen, Jinying Ge, Xijun He, Xijun Wang, Zhigao Bu
Journal of virology 

3.Poly(ADP‑ribosyl)ation enhances HuR oligomerization and contributes to pro‑inflammatory gene mRNA stabilization
YUEshuang Ke, XUEping Lv, XingyUE Fu, Jing Zhang, Ameer Ali Bohio, Xianlu Zeng, Wenjing Hao, Ruoxi Wang, Istvan Boldogh & XUEqing Ba
Cellular and Molecular Life Sciences

Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒 货号: T6068S/T6068L 规格: 20T/50T

Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒

产品货号: T6068S/T6068L

产品规格: 20T/50T

目录价(元):1105/2211

推荐仪器:荧光显微镜(主推)、流式细胞仪

大包装询价


产品概述:

储存条件
-20℃保存,组分A 、E 、F、G需避光,避免反复冻融。有效期见外包装

产品内容:

规格

组分                  

  T6068S (20T)

  T6068L (50T)

A. Biotin TUNEL Reaction Buffer

1 mL

2 × 1.25 mL

B. TdT Enzyme

20 μL

50 μL

C. Streptavidin-HRP

20 μL

50 μL

D. Streptavidin-HRP稀释液

1 mL

2 × 1.25 mL

E. DAB浓缩液(20×

50 μL

125 μL

F. DAB稀释液

1 mL

2 × 1.25 mL

G.显色增强剂(10×

100 μL

250 μL

H. Proteinase K (2 mg/mL)

40 μL

100 μL

I. DNase I (2 U/μL)

5 μL

13 μL

J. 10× DNase I Buffer

100 μL

260 μL

产品介绍
细胞发生凋亡时, 会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA,产生180 bp-200 bp的DNA 片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状Ladder图谱。基因组DNA双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性3′-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化作用下,与生物素(Biotin)- dUTP结合,从而通过光学显微镜直接进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3′-OH形成,很少能够被染色。Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。
本试剂盒应用范围广,可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的DNA链断裂的细胞。

注意事项
1.使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2.叠氮化钠对HRP有抑制作用,实验中请勿使用含有叠氮化钠的试剂。
3.组分A、E、F、G使用时请佩戴口罩、手套,如接触皮肤,请立即用大量水冲洗。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作 。


说明书:

Biotin TUNEL细胞凋亡试剂盒 货号:               T6068S/T6068L  规格:               20T/50T T6068S/T6068L    
MSDS:

MSDS T6068 Biotin TUNEL Apoptosis Kit
常见问题解答:

为什么出现了一些非特异标记?

1. 有些细胞或组织,比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平较高,使得DNA全部被切断,易导致假阳性。建议:取出细胞或组织后要立即固定并充分固定,以阻止这些酶的活性,同时设置阴性对照。
2. 内源性过氧化物酶影响,建议:对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织,适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度。
3. 固定液浓度过高或过低,导致组织中心部分固定效果不佳,而使得中心部细胞自溶、DNA链出现不规则断裂,产生假阳性。建议:推荐使用4%多聚甲醛。
4. TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液发生蒸发或渗漏,细胞或组织表面不能保持湿润。注意控制反应时间,并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。
5. 石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合,所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底。
6. 有些试剂或细胞存在自发荧光,选择染料时要避开自发荧光的颜色。

为什么没有染上荧光?
1. 固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛,现用现配。不建议使用乙醇,乙醇固定液对组织的渗透力较弱,影响TUNEL标记效率.
2. 细胞膜和核膜的通透不充分,TdT酶未能到达核内。细胞与冰冻切片,可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min,石蜡切片推荐使用蛋白酶K,37℃通透30 min;不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同,时间太长容易脱片,适当调整。
3. 延长标记时间至2h,并适当增加TdT酶及dUTP的用量。
4. 确定实验对象细胞有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照,验证TdT酶反应是否正确进行。

如何对细胞核进行复染?
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。

为什么荧光背景高?
1. 支原体污染:可以使用支原体染色检测试剂盒验证。
2. TdT 酶反应时间过长,可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作,稀释后的TdT酶仅供当日使用。
3. 处于高速分裂和增殖状态中的细胞,有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。建议:在非高增殖期取样检测;
4. 有些试剂或细胞存在自发荧光,选择染料时要避开自发荧光的颜色。
5. DAB 孵育时间过长,减少DAB 染色时间。
6. Biotin-X-dUTP 的非特异性结合,在TdT 酶反应之后,再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。

标记率低?
1. 乙醇、甲醇或甲醛(市面上购买的甲醛大多含有甲醇)固定的样品标记效率较低(因为在固定时染色质未能与蛋白质交联,而在操作中丢失),采用推荐的固定液。
2. 固定时间过长,导致交联程度过高,减少固定时间。
3. 贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡,会细胞皱缩,贴壁黏附力降低,导致凋亡细胞容易脱落。建议:在凋亡诱导结束后,可以对多孔板进行1000g离心5min,然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机,请注意操作轻缓,防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓。

在蛋白酶K中消化组织样品多久?
大部分组织样品需要充分消化15分钟。最佳的培养时间根据组织类型和厚度而不同。脑组织比其他组织需要更长的蛋白酶处理时间。 

实验的组织切片应该多厚?
老鼠肠、肾脏、肝脏、心脏和结肠厚度5–20 µm。


使用本产品的文献:

参考文献
1.Enhanced anti-tumor activity by the combination of TRAIL/Apo-2L and combretastatin A-4 against human colon cancer cells via induction of apoptosis in vitro and in vivo.
应用方向:检测结肠癌细胞的凋亡

2.Antiproliferation and cell apoptosis inducing bioactivities of constitUEnts from Dysosma versipellis in PC3 and Bcap-37 cell lines.
应用方向:检测人前列腺癌细胞株PC3、乳腺癌细胞株Bcap-37、胃癌细胞株BGC-823的凋亡

3.Caudatin-2,6-dideoxy-3-O-methy-β-D-cymaropyranoside 1 induced apoptosis through caspase 3-dependent pathway in human hepatoma cell line SMMC7721.
应用方向:检测人肝癌细胞系SMMC7721的凋亡

4.Chemical constitUEnts of the ethyl acetate extract of Belamcanda chinensis (L.) DC roots and their antitumor activities.
应用方向:检测PC3、MGC-803、Bcap-37和MCF-7细胞系的凋亡

5.Synthesis and cytotoxicity of novel ursolic acid derivatives containing an acyl piperazine moiety.
应用方向:检测胃癌细胞MGC-803和乳腺癌细胞Bcap-37的凋亡

YF®488 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG 货号: Y6085S/Y6085L 规格: 50 slides/200 slides

YF®488 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

产品货号: Y6085S/Y6085L

产品规格: 50 slides/200 slides

目录价(元):1490/4200

推荐仪器:荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品货号:

货号

产品名称

规格

Y6081S

YF®350酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6081L

200 slides

Y6082S

YF®350酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6082L

200 slides

Y6083S

YF®350酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6083L

200 slides

Y6084S

YF®488酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6084L

200 slides

Y6085S

YF®488酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6085L

200 slides

Y6086S

YF®488酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6086L

200 slides

Y6087S

YF®555酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6087L

200 slides

Y6088S

YF®555酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6088L

200 slides

Y6089S

YF®555酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6089L

200 slides

Y6090S

YF®594 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6090L

200 slides

Y6091S

YF®594 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6091L

200 slides

Y6092S

YF®594 酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6092L

200 slides

Y6093S

YF®640 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6093L

200 slides

Y6094S

YF®640 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6094L

200 slides

Y6095S

YF®640 酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6095L

200 slides

Y6096S

YF®680 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

Y6096L

200 slides

Y6097S

YF®680 酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

Y6097L

200 slides

Y6098S

YF®680 酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

Y6098L

200 slides

B6099S

生物素酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗鼠IgG

50 slides

B6099L

200 slides

B6100S

生物素酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG

50 slides

B6100L

200 slides

B6101S

生物素酪胺信号放大试剂盒,HRP-链霉亲和素

50 slides

B6101L

200 slides

产品内容:

表1: 组分名称、编号及体积

组分编号

组分名称

组分体积

50 slides

200 slides

见表2

Tyramide Stock Solution, 200×

25 µL

100 µL

见表2

HRP-conjugated

25 µL

100 µL

60011

BSA

0.5 g

2 g

60012

1× Tyramide Amplification Buffer

5 mL

20 mL

表2: 试剂盒组分编号

标记染料

Ex/Em

HRP-conjugated

YF®/Biotin Tyramide

Goat anti-mouse IgG

Goat anti-rabbit IgG

Streptavidin

YF®350

347/448

60008

60009

60010

60001

YF®488

490/515

60008

60009

60010

60002

YF®555

555/565

60008

60009

60010

60003

YF®594

590/617

60008

60009

60010

60004

YF®640

642/662

60008

60009

60010

60005

YF®680

681/698

60008

60009

60010

60006

Biotin(生物素)

~

60008

60009

60010

60007


储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。


产品介绍

酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)又称催化信号放大技术(Catalyzed Signal Amplification),是一类利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方法,其不但可以用于IF/IHC的信号放大,亦可用于Elisa、ISH等检测。
酪胺信号放大技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪胺的信号放大技术能够提供极强的灵敏度、检测极微量的目的抗原。酪胺信号放大技术极大的降低抗体的用量,节约抗体。酪胺信号放大试剂盒可与传统染色方法结合使用以多色成像,也可以顺序进行两个或更多个酪胺反应以标记一个样品上的不同靶标。


注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 1×Tyramide Amplification Buffer首次使用后,建议小量分装,-20℃保存,避免反复冻融。3. 与荧光二抗相比,Tyramide试剂盒显示出更高的灵敏度和更强的信号,因此,实验时一抗的使用浓度较低,建议梯度设置一抗浓度以找到最佳浓度。
4. 建议设置未孵育一抗的阴性对照,确保阴性对照在孵育和洗涤过程中没有被阳性样品中的试剂交叉污染。对于组织样品,建议对未染色的对照(不添加抗体或酪酰胺)进行成像,确定组织是否有自发荧光,排除对背景的影响。
5. 建议使用5 μg/mL的HRP结合物,降低浓度可能会影响信号强度和灵敏度。
6. 建议1:200稀释YF®/Biotin-Tyramide。较高的浓度可能会导致信号过强或背景高,建议从1:100到1:1000梯度稀释。
7. 可依次使用多个YF®/Biotin-Tyramide来标记同一样品的不同靶标,每次酪酰胺反应后需进行HRP淬灭或抗体剥离。
8. 多色标记时,依据抗原密度不同选择不同荧光素(低密度抗原选择强染料;高密度抗原选择较弱染料)。标记顺序对最终标记效果有一定影响,需自行摸索。


说明书:

YF®488  酪胺信号放大试剂盒,HRP-羊抗兔IgG 货号:               Y6085S/Y6085L  规格:               50 slides/200 slides Y6085S/Y6085L    
MSDS:

MSDS Y6081, Y6082, Y6083, Y6084, Y6085, Y6086, Y6087, Y6088, Y6089, Y6090, Y6091, Y6092, Y6093, Y6094, Y6095, B6099, B6100, B6101 TSA Kit
常见问题解答:

什么是TSA技术?

TSA技术,即酪酰胺信号放大技术(Tyramide signal amplification, TSA)是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。

TSA试剂盒有哪些组分?
试剂盒固定组分BSA、1×Tyramide Amplification Buffer,可变组分Tyramide Stock Solution, 200×、HRP-conjugated secondary antibody。Tyramide Stock Solution, 200×可根据需求选择不同波长的YF/Biotin染料。HRP-conjugated secondary antibody可根据一抗在Goat anti-mouse IgG、Goat anti-rabbit IgG、Streptavidin中进行三选一。

TSA试剂盒适用于哪些样本?
TSA试剂盒适用于细胞、石蜡切片、冰冻切片样本。

石蜡切片样本进行多色标记的步骤?
每一轮标记后执行微波处理(抗原修复步骤)以去除抗体,再接下一轮的标记,因此可选择同种属来源的一抗,二抗具有通用性。

细胞样本可以用TSA技术进行多色标记吗?
不推荐。若需要,建议使用细胞爬片或细胞涂片进行,并且抗体剥离及抗原修复推荐使用商业化的抗体剥离液,尽管如此,经过几轮染色清洗后,细胞流失仍会较多,可能不利于后续结果的分析,具体可根据需求尝试。

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L 规格: 10T/50T/100T

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

产品货号: Y6026S/Y6026M/Y6026L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):317/1194/1769

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

储存条件
4℃ 避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。 

组分                   

规格

 Y6026S10T

 Y6026M50T

 Y6026L100T

A. 1×Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. YF®647A-Annexin V

50 μL

250 μL

500 μL

C. PI

100 μL

500 μL

1 mL


储存条件
4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装。

光谱特性
YF®647A-Annexin V:Ex/Em = 650/665 nm
PI:Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

产品介绍

YF®647A-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法,通过标记早期凋亡细胞(远红)和坏死或晚期凋亡的细胞(红色),用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可于磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用远红荧光探针YF®647A标记的Annexin V,即YF®647A-Annexin V,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞,由于细胞完整性已经被破坏,YF®647A-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合,从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合染料,它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488,532或546 nm的激光激发,呈现红色荧光。

注意事项
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min。
3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI 摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®647A-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA,EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。
6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T Y6026S/Y6026M/Y6026L    
MSDS:

MSDS Y6026 YF®647A-Annexin V and PI Apoptosis Kit
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
YF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100TYF®647A-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号:               Y6026S/Y6026M/Y6026L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号: A6079S/A6079M/A6079L 规格: 10T/50T/100T

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒

产品货号: A6079S/A6079M/A6079L

产品规格: 10T/50T/100T

目录价(元):317/1194/1769

推荐仪器:流式细胞仪(主推)、荧光显微镜

大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

A6079S (10T)

A6079M (50T)

A6079L (100T)

A. 1× Annexin V 结合缓冲液

10 mL

50 mL

50 mL×2

B. Annexin V-PE

50 μL

250 μL

500 μL

C. RedNucleus II   

100 μL

500 μL

1 mL

 

储存条件

4℃避光冷藏,请勿冻存。有效期见外包装

Annexin V-PE 储存于50 mM Tris, 100 mM NaCl, 1% BSA, 0.02% NaN3, pH 7.4 的溶液中。

 

光谱特性

Annexin V-PEEx/Em=488/578 nm

RedNucleus IIEx/Em=635/695 nm

 

产品介绍

Annexin V(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 KD Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,可与磷脂酰丝氨酸(PS)选择性结合。磷脂酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面,暴露在细胞外环境中。此时,使用荧光蛋白PE标记的 Annexin V,  Annexin V-PE,与外翻的磷脂酰丝氨酸(PS)结合,就可用流式细胞仪直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。正常细胞不会被Annexin V-PE所染色,发生凋亡或坏死的细胞会被Annexin V-PE所染色。Annexin V-PE可以与部分非渗透性的细胞核染料(7-AAD/PI)等联合使用,区分处于不同凋亡时期的细胞。

本试剂盒中提供的RedNucleus II是一种远红光染料,属于蒽醌类化合物,不能透过活细胞和早期凋亡细胞完整的细胞膜,是非渗透性的,但是可以快速染色死亡和透化细胞中的细胞核/dsDNARedNucleus II是一种理想的碘化丙啶(PI)和7-AAD的替代物,与Annexin V-PE联用,无需补偿调节,具有更好的光谱特性:不受紫外线的激发,也不与PE/PE同系物重叠发射,故可以和FITCPE及紫色荧光染料结合用于多色分析。与Annexin V-PE联用时,RedNucleus II被排除在活细胞和早期凋亡细胞外,而晚期凋亡细胞和死细胞则同时被Annexin V-PERedNucleus II结合染色呈现双阳性。

Annexin V-PE/RedNucleus II细胞凋亡检测试剂盒可用流式细胞仪及或其他荧光检测设备进行检测。

 

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。

2. 为降低细胞凋亡进程,孵育过程可在冰上操作,但孵育时间至少延长至30 min

3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后 1 h之内进行分析。

4. 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,RedNucleus II摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 Annexin V-PE的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTAEDTA 会影响 Annexin V  PS 的结合。

5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色,避免假阳性。

6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。

7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6079S/A6079M/A6079L  规格:               10T/50T/100T A6079S/A6079M/A6079L    
MSDS:

MSDS A6079 Annexin V-PE and RedNucleus Ⅱ Apoptosis Kit
常见问题解答:

为何染色结果显示细胞凋亡率过高?

1. 凋亡时间处理过长,使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件,使细胞处于不同的凋亡状态。
2. 对于贴壁细胞,胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜,使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合,导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后,让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟,以恢复其膜完整性。

实验结果使用什么仪器观察?
实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察,但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸(PS),只是凋亡细胞膜外更多,可以结合更多的Annexin V,流式细胞仪更灵敏,可以区分出微小差异,将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群,但如果用荧光显微镜,可能观察不到这一差别,尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡,推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

流式细胞仪检测细胞凋亡,结果图中的各个象限代表什么状态的细胞?
左上角:Annexin V-/PI+,机械损伤细胞;右上角: AnnexinV+/PI+,晚期凋亡细胞或坏死;右下角:AnnexinV+/PI-,早期凋亡细胞;左下角:AnnexinV-/PI-,正常细胞。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

各象限代表的细胞状态问题?
Q1:(AnnexinV-染料)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多,实验结果越不可信,建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
Q3:(AnnexinV-染料)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。
Q4:(AnnexinV-染料)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6079S/A6079M/A6079L  规格:               10T/50T/100T


假阳性问题?

1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+,而EDTA是Ca2+螯合剂,使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长,吹打细胞要轻柔,因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤,造成假阳性。细胞消化下来后,建议在培养箱中在孵育30min,使细胞膜恢复完整性,避免假阳性,或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
2. 如果样品来源于血液,必须去除血液中的血小板,因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,干扰实验结果。建议:可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板, 最后细胞多洗几遍,减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
3. 神经细胞膜容易破坏外翻,导致假阳性,所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡,因此通常不需要处理大于48小时以上,诱导时间过长会使营养物质耗尽,导致细胞状态差,假阳性结果偏高。

荧光染料选择的问题?
1. 实验样本是否带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光,GFP与YF488/FITC通道重叠,不能选择YF488/FITC标记的Annexin V,此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V,用7-AAD代替PI,若有633 nm激光管,可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管,首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V,因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
3. 处理因素是否带有荧光,本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光,对PI通道的检测造成严重干扰,而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

圈门问题?
1.要特别注意在FSC/SSC圈门时,所选细胞范围会对结果造成较大影响,所以在分析数据时,要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内,这样实验结果才会更可信。如图,使细胞群大概位于对角线上,并且细胞群较集中,群内细胞比例要在80%以上,如果细胞全部圈入,细胞比例才50%或者更低,说明细胞被压在了坐标轴上,这时要重新调节FSC和SSC。
2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测,通常分群不太规则,这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式:
Annexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6079S/A6079M/A6079L  规格:               10T/50T/100TAnnexin V-PE/RedNucleus Ⅱ 细胞凋亡试剂盒 货号:               A6079S/A6079M/A6079L  规格:               10T/50T/100T

免疫染色与凋亡染色顺序问题?

Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗?
可以,但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞,可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去,再在Binding buffer(含钙离子)中标记Annexin V。

这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗?
不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸,包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA,由于RNA的干扰,用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时,凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测,推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit(C6031)

固定、冷冻、切片或解离的组织,还可以做流式细胞分析吗?
不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个,活性好,这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响,因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡,同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片,不宜上流式检测,所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本,即取材后立即检测,效果最好。 液氮保存的组织块,可以将组织标本进行切片,然后做原位染色,观察组织细胞的凋亡。

Annexin V可以用在植物和细菌中吗?
Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡,具体实验步骤可参考相关文献。