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Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒 货号: C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL 规格: 100T/500T/3000T/10000T

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Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒

产品货号: C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL

产品规格: 100T/500T/3000T/10000T

目录价（元）:221/516/1886/5158

推荐仪器：酶标仪

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产品概述：

储存条件

4℃避光保存，长期储存置于-20℃，有效期见外包装。

 

产品介绍

Cell Counting Kit-8简称CCK8（或WST-8）试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）显色反应的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8工作原理：在电子耦合试剂存在的条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8、XTT和MTS产生的甲臜都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的甲臜比XTT和MTS产生的甲臜更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8与MTT、XTT相比线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK法广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等方面。

 

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 使用96孔进行细胞铺板，如果培养时间较长， 一定要注意蒸发问题。建议采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或者培养液。

3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

4. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书：

Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒 货号: C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL 规格: 100T/500T/3000T/10000T C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL    
MSDS：
MSDS C6005Cell Counting Kit-8（CCK-8）
客户使用反馈：


常见问题解答：

◆为什么测的吸光度值过低？

1.细胞数量过低，建议增加细胞待测数量；
2.染色难度大，建议增加CCK-8孵育时间

◆数据重复性差？
1.孔板最外圈试剂容易挥发，建议最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用；
2.CCK-8沾壁，建议加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀；
3.细胞数量过多或过少，建议预先在1000-100000个/孔范围内摸索条件；
4.孔内气泡干扰酶标仪检测，检测前需确保每个孔内无气泡

◆在做细胞的加药实验时,药物对CCK-8测定是否有影响?
1.注意如果药物具有还原性(如维生素C),会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度；
2.药物中的金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1mM的氯化亚铅、氧化铁、硫酸铜会抑制5%,15%, 90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响；
3.由于培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前,建议使用一个孔作一下检测,有必要先确认培养基和CCK-8是否反应，一般正常的OD值应该在0.4以下

◆可否采用CCK-8法进行药物的IC50检测？
可以,将细胞培养后按照不同浓度的药物处理一定时间后进行CCK-8检测,根据吸光度绘制曲线,计算该药物抑制细胞数量一半时的浓度(IC50)

◆CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样？
不一样,悬浮细胞较贴壁细胞难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决

◆若是暂不检测OD值，该如何处理?
若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 小时内测定，吸光度不会发生变化

◆用CCK-8测细胞活力时每次都要做标准曲线吗？
建议每次做，虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线


使用本产品的文献：

1.Oncogene miR-187-5p is associated with cellular proliferation, migration,invasion, apoptosis and an increased risk of recurrence in bladder cancer
ZuweiLi ,CanbinLin,LiwenZhao,LiangZhou,XiangPan,JingQuan,XiqiPeng,WeiqingLi,HangLi,JinlingXu,WeijieXu,XinGuan,YunChen
Biomedicine & Pharmacotherapy(2018)
应用方向：细胞活性检测：膀胱癌细胞（BC） 

2.MicroRNA‑572 functions as an oncogene and a potential biomarker for renal cell carcinoma prognosis

  • Xiang Pan, Zuwei Li , Liwen Zhao, Jing Quan,  Liang Zhou,  Jinling Xu,  Weiji Xu, Xin Guan,  Hang Li ,  Shangqi Yang,  Yaoting Gui
    Oncology Reports(2018) 3092-3101
    应用方向：细胞活性检测：肾细胞（RCC）


    • 3.    Oncogene miR-154-5p regulates cellular function and acts as a molecular marker with poor prognosis in renal cell carcinoma
    Lin Canbin, Li Zuwei, Chen Peijie, Quan Jing , Pan Xiang,  Zhao Liwen, Zhou Liang, Lai Yulin, He Tao,Xu Weijie,Xu Jinling,Guan Xin,Li Hang, Yang Shangqi,Hu Yimin 
    Life Sciences(2018)
    应用方向：细胞活性检测：膀胱癌细胞（BC）

    4.外泌体介导乳腺癌 MCF-7 细胞对多柔比星耐药性的机制
    张如月； 李朵璐； 杨哲； 郭金秀； 周玉冰；
    药学学报(2019)
    应用方向：细胞活性检测：MCF-7、MCF-7/Exo、MCF-7/Dox细胞

    5.MS-275联合顺铂对食管鳞状细胞癌9706细胞氧化损伤和凋亡的影响
    刘腾飞,王亚苹,李亚,张振坤,李喆,周馨魁,张璐玉,王文杰,刘红涛,张彦婷,关方霞,马珊珊
    郑州大学生命科学学院
    应用方向：细胞的存活率检测：食管鳞状细胞癌(鳞癌) EC9706细胞

    6.A dual-enzymatically cross-linked injectable gelatin hydrogel loaded with BMSC improves neurological function recovery of traumatic brain injury in rats
    Minghao Yao, Feng Gao, Ru Xu,  Junni Zhang,  Yihao Chena , Fangxia Guan
    Biomaterials Science
    应用方向：细胞活性检测：BMSC

    7.重组人MG53蛋白激活Akt/GSK-3β通路降低LPS诱导的hUC-MSCs氧化损伤
    王亚苹 张振坤 李喆 刘腾飞 黄团结 周馨魁 麻建杰 关方霞 马珊珊
    郑州大学学报（医学版）
    应用方向：细胞活力检测：人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)

    8.Inonotus Obliquus Polysaccharides Induces Apoptosis of Lung Cancer Cells and Alters Energy Metabolism via the LKB1/AMPK Axis
    Shuping Jiang，Fuli Shi，Hui Lin，Ying Ying，Lingyu Luo，Deqiang Huang，Zhijun Luo
    International Journal of Biological Macromolecules Volume 151, 15 May 2020, Pages 1277-1286

    9.A chitosan-based thermosensitive scaffold loaded with bone marrow-derived mesenchymal stem cells promotes motor function recovery in spinal cord injured mice
    Junni Zhang,Tian Cheng,Yihao Chen,Feng Gao,Fangxia Guan,Minghao Yao
    Biomedical materials

    10.Structure analysis of polysaccharides purified from Cyclocarya paliurus with DEAE-Cellulose and its antioxidant activity in RAW264.7 cells
    QiAn，XimeiYe，YiHan，MengZhao，SiChen，XinLiu，XiangLi，ZitongZhao，YangZhang，KehuiOuyang，WenjunWang
    International Journal of Biological Macromolecules(Available online 28 November 2019)

    11.Dual-enzymatically crosslinked hyaluronic acid hydrogel as a longtime 3D stem cell culture system
    Feng Gao,Jinrui Li,Luyu Wang,Dan Zhang,Junni Zhang,Fangxia Guan，Minghao Yao
    Biomedical Materials

    12.Enhanced effect of nano-monetite hydrosol on dentin remineralization and tubule occlusion
    Shenglong Tan，Shangsi Chen，Yifan Wang，Feige Wu，Yufei Shi，Jianglin Wang，Yinyin Du，Shengmin Zhang
    Dental Materials（Volume 36, Issue 6, June 2020, Pages 816-825）

    13.Control the fate of human umbilical cord mesenchymal stem cells with dual-enzymatically cross-linked gelatin hydrogels for potential applications in nerve regeneration
    JinruiLi，FengGao，ShanshanMa，YantingZhang，JunniZhang，FangxiaGuan，MinghaoYao
    Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine

    14.MG53 Protects hUC-MSCs against Inflammatory Damage and Synergistically Enhances Their Efficacy in Neuroinflammation Injured Brain through Inhibiting NLRP3/Caspase-1/IL-1β Axis
    Shanshan Ma,Yaping Wang,Xinkui Zhou,Zhe Li,Zhenkun Zhang,Yingying Wang,Tuanjie Huang,Yanting Zhang,Jijing Shi,Fangxia Guan
    ACS Chem. Neurosci. 2020, 11, 17, 2590–2601

    15.Sodium alginate/collagen hydrogel loaded with human umbilical cord mesenchymal stem cells promotes wound healing and skin remodeling
    Zhenkun Zhang, Zhe Li, Ya Li, Yingying Wang, Minghao Yao, Kun Zhang, Zhenyu Chen, Han Yue, Jijing Shi, Fangxia Guan & Shanshan Ma 
    Cell and Tissue Research

    16.Reshaping the Immune Microenvironment by Oncolytic Herpes Simplex Virus in Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma
    Liming Zhang，Wei Wang，Ruikun Wang，Jie Yin，Hongkai Zhang，Youjia Cao
    Molecular Therapy（VOLUME 29, ISSUE 2, P744-761, FEBRUARY 03, 2021）

    17.Selective extracellular arginine deprivation by a single injection of cellular non-uptake arginine deiminase nanocapsules for sustained tumor inhibition
    Hongzhao Qi,Yin Wang,Xubo Yuan,Peifeng Lia，Lijun Yang
    Nanoscale

    18.Inducing Apoptosis and Suppressing Inflammatory Reactions in Synovial Fibroblasts are Two Important Ways for Guizhi-Shaoyao-Zhimu Decoction Against Rheumatoid Arthritis
    Zhang Q, Duan HX, Li RL, Sun JY, Liu J, Peng W, Wu CJ, Gao YX
    Journal of Inflammation Research（26 January 2021 Volume 2021:14 Pages 217—236）

    19.Injectable bone cement with magnesium-containing microspheres enhances osteogenesis via anti-inflammatory immunoregulation
    Shenglong Tan，Yifan Wang，Yingying Du，Yin Xiao，Shengmin Zhang
    Bioactive Materials Volume 6, Issue 10, October 2021, Pages 3411-3423

    20.Propionate and butyrate produced by gut microbiota after probiotic supplementation attenuate lung metastasis of melanoma cells in mice
    Lili Chen,Xinyu Zhou,Yawei Wang,Dake Wang,Yueshuang Ke,Xianlu Zeng
    Molecular Nutrition & Food Research

    21.Regulating the Anticancer Efficacy of Sgc8-Combretastatin A4 Conjugates: A Case of Recognizing the Significance of Linker Chemistry for the Design ofAptamer-Based Targeted Drug Delivery Strategies
    Zhiyong Huang,Dan Wang,Cheng-Yu Long,Shen-Huan Li,Xue-Qiang Wang,Weihong Tan
    Journal of American Chemical Society


    22.Biomimetic Nanoparticles Carrying Repolarization Agent of Tumor-Associated Macrophages for Remodeling of the Inflammatory Microenvironment Following Photothermal Therapy
    Yale Yue , Fenfen Li, Yao Li, Yazhou Wang, Xinjing Guo, Zhaoxia Cheng, Nan Li, Xiaotu Ma , Guangjun Nie, Xiao Zhao
    ACS Nano


    23.Taxifolin, an Inhibitor of Sortase A, Interferes With the Adhesion of Methicillin-Resistant Staphylococcal aureus
    Li Wang, Guangming Wang, Han Qu, Kai Wang, Shisong Jing, Shuhan Guan, Liyan Su, Qianxue Li, Dacheng Wang 
    Suggest a Research Topic

    24.Targeted Mitochondrial Fluorescence Imaging-Guided TumorAntimetabolic Therapy with the Imprinted Polymer NanomedicineCapable of Specifically Recognizing Dihydrofolate Reductase 

    Ya-Ting Qin, Yao-Jia Ma , Yu-Sheng Feng , Xi-Wen He, Wen-You Li, Yu-Kui Zhang

    ACS Applied Materials & Interfaces

    25.PDGF-BB/SA/Dex injectable hydrogels accelerate BMSC-mediated functional full thickness skin wound repair by promoting angiogenesis
    Zhenkun Zhang, Zhe Li, Yingying Wang, Qianqian Wang, Minghao Yao, Liang Zhao, Jijing Shi, Fangxia Guan, Shanshan Ma
    Joural of Materials Chemistory B

    26.Molecular subtypes based on CNVs related gene signatures identify candidate prognostic biomarkers in lung adenocarcinoma
    Baihui Li, Ziqi Huang, Wenwen Yu, Shaochuan Liu, Jian Zhang, Qingqing Wang, Lei Wu, Fan Kou, Lili Yang
    Neoplasia Volume23,Issue 7,July 2021,Page 704-717

    27.Injectable bone cement with magnesium-containing microspheres enhances osteogenesis via anti-inflammatory immunoregulation
    Shenglong Tan, Yifan Wang, Yingying Du, Yin Xiao, Shengmin Zhang
    Bioactive Materials Volume 6, Issue 10, October 2021, Pages 3411-3423

    28.Antiepileptic Effects of Cicadae Periostracum on Mice and Its Antiapoptotic Effects in H2O2-Stimulated PC12 Cells via Regulation of PI3K/Akt/Nrf2 Signaling Pathways

    Qing Zhang, Ruo-Lan Li, Ting Tao, Jia-Yi Sun, Jia Liu, Ting Zhang, Wei Peng, Chun-Jie Wu
    Volume 2021

    29.AGT serves as a potential biomarker and drives tumor progression in colorectal carcinoma
    Wei Chen, Yihuan Chen, Kai Zhang, Wanjing Yang, Xiang Li, Jun Zhao, Kangdong Liu, Ziming Dong, Jing Lu
    International Immunopharmacology

    30.Superlow Dosage of Intrinsically Bioactive Zinc Metal–Organic Frameworks to Modulate Endothelial Cell Morphogenesis and Significantly Rescue Ischemic Disease
    Bin Gao, Xiaoyu Wang, Meiyu Wang, Kexin You, Gasim Sebit Ahmed Suleiman, Xiang-Kui Ren, Jintang Guo , Shihai Xia, Wencheng Zhang, Yakai Feng
    ACS Nano

    31.Administration of serotonin and norepinephrine reuptake inhibitors tendsto have less ocular surface damage in a chronic stress-induced rat model ofdepression than selective serotonin reuptake inhibitors
    Han Zhao , Yue Yin , Tong Lin , Wushuang Wang , Lan Gong 
    Experimental Eye Research

    32.Identification of a novel immune-related gene signature for prognosis and the tumor microenvironment in patients with uveal melanoma combining single-cell and bulk sequencing data
    Wanpeng Wang , Han Zhao, Sha Wang
    Frontiers in Immunology

    33.Enhancing the inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis in H22 hepatoma cells through biotransformation of notoginsenoside R1 by Lactiplantibacillus plantarum S165 into 20(S/R)-notoginsenoside R2

    Penghui Wang, Yansong Gao, Ge Yang, Yujuan Zhao, Zijian Zhao, Ge Gao, Lei Zhao and Shengyu Li

    RSC Advance

    34.Comprehensive analysis of the overexpressed cytochrome P450-based insecticide resistance mechanism in Spodoptera litura

    Wenlin Li , Wen Yang , Yao Shi, Xiyu Yang, Shuangqing Liu, Xiaolan Liao, Li Shi

    Journal of Hazardous Materials

    35.Functional analysis of UDP-glycosyltransferase genes conferring indoxacarb resistance in Spodoptera litura

    Pesticide Biochemistry and Physiology

    Xi-Yu Yang 1, Wen Yang 1, Hui Zhao, Bing-Jie Wang, Yao Shi, Meng-Yu Wang, Shuang-Qing Liu, Xiao-Lan Liao, Li Shi

    参考文献
    1.Near-infrared upconversion–activated CRISPR-Cas9 system: A remote-controlled gene editing platform 

    应用方向：细胞活力检测：A549细胞

    YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T

    发表于由

    YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

    产品货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L

    产品规格: 10T/50T/100T

    目录价（元）:281/1061/1591

    推荐仪器：流式细胞仪（主推）、荧光显微镜

    大包装询价


    产品概述：

    产品内容：

                规格

    组分                  

      Y6002S（10T）

     Y6002M（50T）

     Y6002L（100T）

      A. 1× Annexin V 结合缓冲液

      10 mL

      50 mL

      50 mL×2

    B. YF®488-Annexin V

      50 μL

      250 μL

      500 μL

    C. PI

      100 μL

      500 μL

      1 mL


    储存条件
    4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

    光谱特性
    YF®488-Annexin V: Ex/Em = 490/515 nm
    PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

    产品介绍

    YF®488-Annexin V和PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法，通过标记早期凋亡细胞（绿色）和坏死或晚期凋亡的细胞（红色），用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
    Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为 35-36KD的 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可于磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用绿色荧光探针 YF®488 标记的 Annexin V，即 YF®488-Annexin V，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞，由于细胞完整性已经被破坏，YF®488-Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的 PS 结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
    碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种 DNA 结合染料，它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488，532或546 nm的激光激发，呈现红色荧光。

    注意事项
    1.使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
    2.为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。
    3.由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
    4.对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 YF®488-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
    5.贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。
    6.为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
    7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
    8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
    9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T Y6002S/Y6002M/Y6002L    
    MSDS：
    MSDS Y6002 YF®488-Annexin V&PI
    客户使用反馈：


    常见问题解答：

    ◆为何染色结果显示细胞凋亡率过高？

    1. 凋亡时间处理过长，使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件，使细胞处于不同的凋亡状态。
    2. 对于贴壁细胞，胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜，使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合，导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后，让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟，以恢复其膜完整性。

    ◆实验结果使用什么仪器观察？
    实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察，但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸（PS），只是凋亡细胞膜外更多，可以结合更多的Annexin V，流式细胞仪更灵敏，可以区分出微小差异，将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群，但如果用荧光显微镜，可能观察不到这一差别，尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡，推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

    ◆流式细胞仪检测细胞凋亡，结果图中的各个象限代表什么状态的细胞？
    左上角：Annexin V-/PI+，机械损伤细胞；右上角: AnnexinV+/PI+，晚期凋亡细胞或坏死；右下角：AnnexinV+/PI-，早期凋亡细胞；左下角：AnnexinV-/PI-，正常细胞。

    ◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
    不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

    ◆各象限代表的细胞状态问题？
    Q1：(AnnexinV-染料)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多，实验结果越不可信，建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
    Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
    Q3：(AnnexinV-染料)+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。
    Q4：(AnnexinV-染料)-/PI-，此区域的细胞为活细胞。

    YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T

    ◆假阳性问题？
    1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合剂，使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长，吹打细胞要轻柔，因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤，造成假阳性。细胞消化下来后，建议在培养箱中在孵育30min，使细胞膜恢复完整性，避免假阳性，或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
    2. 如果样品来源于血液，必须去除血液中的血小板，因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，干扰实验结果。建议：可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板， 最后细胞多洗几遍，减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
    3. 神经细胞膜容易破坏外翻，导致假阳性，所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
    4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡，因此通常不需要处理大于48小时以上，诱导时间过长会使营养物质耗尽，导致细胞状态差，假阳性结果偏高。

    ◆荧光染料选择的问题？
    1. 实验样本是否带荧光，因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光，GFP与YF488/FITC通道重叠，不能选择YF488/FITC标记的Annexin V，此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V，用7-AAD代替PI，若有633 nm激光管，可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
    2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管，首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V，因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题，可以减少调节补偿的烦恼，如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
    3. 处理因素是否带有荧光，本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光，对PI通道的检测造成严重干扰，而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

    ◆ 圈门问题？
    1.要特别注意在FSC/SSC圈门时，所选细胞范围会对结果造成较大影响，所以在分析数据时，要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内，这样实验结果才会更可信。如图，使细胞群大概位于对角线上，并且细胞群较集中，群内细胞比例要在80%以上，如果细胞全部圈入，细胞比例才50%或者更低，说明细胞被压在了坐标轴上，这时要重新调节FSC和SSC。
    2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测，通常分群不太规则，这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式：
    YF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100TYF®488-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: Y6002S/Y6002M/Y6002L 规格: 10T/50T/100T

    ◆    免疫染色与凋亡染色顺序问题?
    Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗？
    可以，但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞，可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去，再在Binding buffer（含钙离子）中标记Annexin V。

    ◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
    不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

    ◆固定、冷冻、切片或解离的组织，还可以做流式细胞分析吗？
    不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个，活性好，这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响，因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡，同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片，不宜上流式检测，所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本，即取材后立即检测，效果最好。 液氮保存的◆组织块，可以将组织标本进行切片，然后做原位染色，观察组织细胞的凋亡。

    ◆Annexin V可以用在植物和细菌中吗？
    Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡，具体实验步骤可参考相关文献。


    使用本产品的文献：

    1.Iron Accumulation Leads to Bone Loss by Inducing Mesenchymal Stem Cell Apoptosis Through the Activation of Caspase3
    Ye YuanFei XuYan CaoLi XuChen YuFan YangPeng ZhangLiang WangGuangsi ShenJianrong WangYoujia Xu
    Biological Trace Element Research(2018) 434–441
    应用方向：流式细胞仪检测：骨髓间充质干细胞的凋亡

    2.    铁蓄积诱导间充质干细胞凋亡并抑制成骨活性的研究
    袁晔, 张鹏王亮, 徐非, 俞晨, 杨帆, 张辉, 易剑桥, 徐又佳
    中华实验外科杂志 (2017) 1839-1842 
    应用方向：流式细胞仪检测：骨髓间充质干细胞(BMSCs)的凋亡

    3.Near-infrared upconversion–activated CRISPR-Cas9 system: A remote-controlled gene editing platform
    Yongchun Pan, Jingjing Yang, Xiaowei Luan, Xinli Liu, XUEqing Li, Jian Yang, Ting Huang, Lu Sun, Yuzhen Wang.
    Science Advances(2019)
    应用方向：流式细胞仪检测：A549细胞的凋亡

    4.外泌体介导乳腺癌 MCF-7 细胞对多柔比星耐药性的机制
    张如月； 李朵璐； 杨哲； 郭金秀； 周玉冰
    药学学报(2019)
    应用方向：荧光显微镜凋亡检测：MCF-7、MCF-7/Exo、MCF-7/Dox细胞的凋亡

    5.MS-275联合顺铂对食管鳞状细胞癌9706细胞氧化损伤和凋亡的影响
    刘腾飞,王亚苹,李亚,张振坤,李喆,周馨魁,张璐玉,王文杰,刘红涛,张彦婷,关方霞,马珊珊
    郑州大学生命科学学院
    应用方向：流式细胞仪检测：食管鳞状细胞癌(鳞癌) EC9706细胞的凋亡

    6.MS-275 combined with cisplatin exerts synergistic antitumor effects in human esophageal squamous cell carcinoma cells
    Tengfei Liu，Fangxia Guan，Yaping Wang，Zhenkun Zhang，Ya Li，Yuanbo Cui，Zhe Li，Hongtao Liu，Yanting Zhang，Yuming Wang，Shanshan Ma
    Toxicology and Applied Pharmacology Volume 395, 15 May 2020, 114971

    7.Deformable liposomal codelivery of vorinostat and simvastatin promotes antitumor responses through remodeling tumor microenvironment
    Bin Tu,Yang He,Binfan Chen,Yonghui Wang,Yanrong Gao,Mingjie Shi,Tuanbing Liu,Akmal M. Asrorov，Yongzhuo Huang
    Biomaterials Science

    8.Effective Genome Editing Using CRISPR-Cas9 Nanoflowers
    Chen Zhang , He Ren , Gengqi Liu , Jiexin Li , Xiaojie Wang , Yumiao Zhang 
    Advanced Healthcare Materials

    Dualucif® Firefly & Renilla Assay Kit（双萤光素酶报告基因检测试剂盒） 货号: F6075S/F6075M/F6075L 规格: 20T/100T/10×100T

    发表于由

    Dualucif® Firefly & Renilla Assay Kit（双萤光素酶报告基因检测试剂盒）

    产品货号: F6075S/F6075M/F6075L

    产品规格: 20T/100T/10×100T

    目录价（元）:343/1326/7427

    推荐仪器：化学发光仪、酶标仪或液闪测定仪

    大包装询价


    产品概述：

    储存条件：-20℃保存，有效期见外包装

    应用范围：真核基因表达调控研究

     产品特点

    1. 快速：细胞裂解在10-15 min内完成。

    2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

    3. 灵敏：能够检测最低10-20 mol的萤光素酶。

    4. 酶的浓度线性范围可达8个数量级。

     

    产品组分

    组分

    F6075S（20T）

    F6075M（100T）

    F6075L（10×100T）

    A. 5× Passive Luciferase Lysis Buffer

    2 × 1 mL

    10 mL

    10×10 mL

    B. Firefly Luciferase Assay Buffer

    2 × 1 mL

    10 mL

    10×10 mL

    C. D-Luciferin

    0.4 mg

    2 mg

    10×2 mg

    D. Renilla Luciferase Assay Buffer

    2 × 1 mL

    10 mL

    10×10 mL

    E. 50× Coelenterazine

    40 µL

    200 µL

    10×200 µL

    产品介绍

    真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低10-20 mol的萤光素酶，在10-14至10-20 mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。

     

    注意事项

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

    2. 为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制一致；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。

    3. 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm，海肾萤光素酶催化的生物发光的最强波长为480 nm。

    4. 为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

    5. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行测定。

    6.为了你的健康和安全，操作过程中务必穿戴实验服和一次性手套。


    说明书：

    Dualucif® Firefly & Renilla Assay Kit（双萤光素酶报告基因检测试剂盒） 货号: F6075S/F6075M/F6075L 规格: 20T/100T/10×100T F6075S/F6075M/F6075L    
    MSDS：
    MSDS F6075 Dual Luciferase Assay Kit
    常见问题解答：

    ◆双萤光素酶报告基因最适反应温度？

    室温（20-22℃）。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温。此两种萤光素酶的反应速率是受温度影响的，为了保证实验的一致性，我们推荐此两种工作液在检测时都孵育至室温。

    ◆双萤光素酶报告基因载体该如何选择？
    （1）萤火虫报告基因质粒原则上含有luc基因就可以，但是不同实验所需的载体有一定差异，如果您要自己构建载体，要注意有些载体没有启动子，需要自行插入启动子，如pGL3 Basic。
    （2）海肾报告基因质粒尽量选择中等强度的启动子，如TK启动子等，不要选择强启动子CMV、SV40等。海肾基因的表达活性应显著高于背景组，同时不干扰萤火虫萤光素酶报告基因的表达。。

    ◆检测的萤光数值很低怎么办？
    （1）可能为转染效率低
    a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；
    b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
    c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。
    （2）可能为启动子活性低或诱导失败
    a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
    b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
    c.更换强启动子（如SV40、CMV）。
    注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。
    （3）样品裂解效率低
    a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
    b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。
    （4）检测过程操作不规范
    a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
    b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
    c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
    d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。
    （5）底物氧化失效
    a.底物避光密封保存，萤火虫萤光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
    b.反应工作液建议现用现配。


    使用本产品的文献：

    1.The Hippo-YAP signaling pathway drives CD24-mediated immune evasion in esophageal squamous cell carcinoma via macrophage phagocytosis 

    Xiaofeng Zhou, Ziyi Yan1, Jinghan Hou, Lichen Zhang , Zhen Chen, Can Gao, Nor Hazwani Ahmad ,Mingzhou Guo, Weilong Wang, Tao Han , Tingmin Chang, Xiaohong Kang , Lidong Wang , Yinming Liang and  Xiumin Li  

    应用方向：基因转录调控检测

    参考文献

    1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.
    应用方向：基因转录调控检测

    2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.
    应用方向：基因转录调控检测

    3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.
    应用方向：基因转录调控检测

    4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.

    应用方向：基因转录调控检测

    5.Large-Scale Screening of Natural Products Transactivating Peroxisome Proliferator-Activated Receptor α Identifies 9S-Hydroxy-10E,12Z,15Z-Octadecatrienoic Acid and Cymarin as Potential Compounds Capable of Increasing Apolipoprotein A-I Transcription in Human Liver Cells.

    应用方向：基因转录调控检测


    Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） 货号: S6009S/S6009M/S6009L 规格: 10 mL/100 mL/500 mL

    发表于由

    Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒）

    产品货号: S6009S/S6009M/S6009L

    产品规格: 10 mL/100 mL/500 mL

    目录价（元）:113/566/1621

    推荐仪器：凝胶成像仪

    大包装询价


    产品概述：
    储存条件
    4℃密封避光保存，短期可放置于室温。有效期见外包装。

    组分

    规格

    S6009S（10mL）

    S6009M（100mL）

    S6009L（500mL）

    A液

    5 mL

    50 mL

    250 mL

    B液

    5 mL

    50 mL

    250 mL

    产品介绍
    Super ECL Plus 免疫印迹底物是增强型化学发光（ECL）过氧化物酶的底物，可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现低表达或高价值蛋白的检测。
    Super ECL Plus 底物可为使用辣根过氧化物酶（HRP）偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号，对低表达或高价值蛋白检测灵敏度很高。该 ECL 底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。
    Super ECL Plus（超敏）特点：
    1. 具有极高灵敏度：检测硝化纤维素膜或 PVDF 膜上低表达或高价值的蛋白条带；
    2. 长信号持续时间：条件优化的情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出 6 至 8 h 的可检测光信号；
    3. 价格经济：配方经过优化，适用于浓度极低的抗体检测。• 0.2-1 μg/mL 一抗（或 1 mg/mL 的稀释 1:1,000-1:5,000） • 10-50 ng/mL 二抗（或 1 mg/mL 的稀释 1:20,000-1:100,000）

    注意事项
    1. 发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能有降低，操作时注意避光。戴手套可以避免在膜上留下手印。
    2. 长时间曝光会加深背景；蛋白过量，会使条带强弱变化    失去线性关系；曝光不足，则条带模糊或较浅。
    3. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 曝光。
    4. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
    5. NaN3 会抑制 HRP 活性，回收二抗应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。
    说明书：

    Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） 货号: S6009S/S6009M/S6009L 规格: 10 mL/100 mL/500 mL S6009S/S6009M/S6009L    
    MSDS：
    MSDS S6009 Super ECL Plus
    使用本产品的文献：

    1.CtIP promotes G2/M arrest in etoposide‐treated HCT116 cells in a p53‐independent manner
    Hongyu Chen，Jin Shan，Dandan Chen，Ruoxi Wang，Wenjing Qi，Hailong Wang，YUEshuang Ke，Wenguang Liu，Xianlu Zeng
    Journal of cellular physiology(2018)

    2.Meningitic Escherichia coli-induced upregulation of PDGF-B and ICAM-1 aggravates blood-brain barrier disruption and neuroinflammatory response
    Rui-Cheng Yang,Xin-Yi Qu,Si-Yu Xiao,Liang Li,Bo-Jie Xu,Ji-Yang Fu,Yu-Jin Lv,Nouman Amjad,Chen Tan,Kwang Sik Kim,Huan-Chun Chen andXiang-Ru WangJournal of Neuroinflammation（2019 16：101）

    3.Melatonin enhances thrombopoiesis through ERK and Akt activation orchestrated by dual adaptor for phosphotyrosine and 3‐phosphoinositides
    Shilei Chen，Yan Qi，Song Wang，Yang Xu，Mingqiang Shen，Mengjia Hu，Changhong Du，Fang Chen，Mo Chen，Yukai Lu，Zihao Zhang，Yong Quan，Cheng Wang，Fengchao Wang，Junping Wang
    J Pineal Res

    4.LncRNAs activate longevity regulation pathway due to aging of Leydig cells caused by DEHP exposure: A transcriptome-based study
    Yuhao Wu，Junke Wang，Tianxin Zhao，Yuexin Wei，Lindong Han，Lianju Shen，Chunlan Long，Shengde Wu，Guanghui Wei
    Ecotoxicology and Environmental Safety

    5.Propionate and butyrate produced by gut microbiota after probiotic supplementation attenuate lung metastasis of melanoma cells in mice
    Lili Chen,Xinyu Zhou,Yawei Wang,Dake Wang,Yueshuang Ke,Xianlu Zeng
    Molecular Nutrition & Food Research

    6.Orientin mediates protection against MRSA-induced pneumonia by inhibiting Sortase A

    Li Wang , Shisong Jing, Han Qu, Kai Wang, Yajing Jin, Ying Ding, Lin Yang, Hangqian Yu , Yan Shi , Qianxue Li , Dacheng Wang
    Virlence Volime 12

    7.Single-Base Resolution Mapping Reveals Distinct 5-Formylcytidine in Saccharomyces cerevisiae mRNAs
    Yafen Wang, Zonggui Chen, Xiong Zhang, Xiaocheng Weng, Jikai Deng, Wei Yang, Fan Wu, Shaoqing Han, Chao Xia, Yu Zhou, Yu Chen, Xiang Zhou
    ACS Chemical Biology

    YF®488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光） 货号: T6013S/T6013L 规格: 20T/50T

    发表于由

    YF®488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）

    产品货号: T6013S/T6013L

    产品规格: 20T/50T

    目录价（元）:1105/2211

    推荐仪器：荧光显微镜（主推）、流式细胞仪

    大包装询价


    产品概述：

    产品货号：

    产品货号

    产品名称

    Ex/Em (nm)

    产品规格

    T6013S

    YF®488 TUNEL细胞凋亡试剂盒

    （绿色荧光）

    490/515

    20T

    T6013L

    50T

    T6039S

    YF®555 TUNEL细胞凋亡试剂盒

    （橙红色荧光）

    555/565

    20T

    T6039L

    50T

    T6014S

    YF®594 TUNEL细胞凋亡试剂盒

    （红色荧光）

    590/617

    20T

    T6014L

    50T

    T6063S

    YF®640 TUNEL细胞凋亡试剂盒

    （远红荧光）

    642/662

    20T

    T6063L

    50T

    产品规格：

    规格

    组分

    20T

    50T

    A.YF®488/555/594/640 TUNEL Reaction Buffer

    1 mL

    2 × 1.25 mL

    B. TdT Enzyme

    20 μL

    50 μL

    C. Proteinase K (2 mg/mL)

    40 μL

    100 μL

    D. DNase I (2 U/μL)

    5 μL

    13 μL

    E. 10 × DNase I Buffer

    100 μL

    260 μL

     

    储存条件：-20℃保存，组分A需避光，避免反复冻融。有效期见外包装

    产品介绍

    细胞发生凋亡时, 会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA，产生180 bp-200 bp的 DNA 片段，表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状Ladder图谱。基因组DNA双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性3′-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的催化作用下，与YF® -dUTP结合，从而通过荧光显微镜或流式细胞仪直接进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal – deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3′-OH形成,很少能够被染色。Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，可检测出极少量的凋亡细胞，因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。

    本试剂盒应用范围广，可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞，而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。本试剂盒检测细胞凋亡，耗时短，只需一步染色反应，洗涤后即可检测。

            

    注意事项

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

    2. 染色背景较重或非特异性着色明显时可适当减少染色时间。

    3. 实验时建议增加阴性对照和阳性对照组。

    4. 组分A使用时请佩戴口罩、手套，如接触皮肤，请立即用大量水冲洗。

    5. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

    6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    YF®488 TUNEL 细胞凋亡试剂盒（绿色荧光） 货号: T6013S/T6013L 规格: 20T/50T T6013S/T6013L    
    MSDS：
    MSDS T6013 6039 6014 6063 YF®488 555 594 640 TUNEL Apoptosis Kit
    常见问题解答：

    ◆为什么出现了一些非特异标记？

    1. 有些细胞或组织，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平较高，使得DNA全部被切断，易导致假阳性。建议：取出细胞或组织后要立即固定并充分固定，以阻止这些酶的活性，同时设置阴性对照。
    2. 内源性过氧化物酶影响，建议：对于肝脏、肾脏等血细胞含量多的组织，适当延长封闭时间和升高过氧化氢的浓度。
    3. 固定液浓度过高或过低，导致组织中心部分固定效果不佳，而使得中心部细胞自溶、DNA链出现不规则断裂，产生假阳性。建议：推荐使用4%多聚甲醛。
    4. TdT 酶反应时间过长或Tunel反应过程中反应液发生蒸发或渗漏，细胞或组织表面不能保持湿润。注意控制反应时间，并确保TdT 酶反应液能很好地覆盖样品。
    5. 石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合，所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底。
    6. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。

    ◆为什么没有染上荧光？
    1. 固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛，现用现配。不建议使用乙醇，乙醇固定液对组织的渗透力较弱，影响TUNEL标记效率.
    2. 细胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到达核内。细胞与冰冻切片，可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，石蜡切片推荐使用蛋白酶K，37℃通透30 min；不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同，时间太长容易脱片，适当调整。
    3. 延长标记时间至2h，并适当增加TdT酶及dUTP的用量。
    4. 确定实验对象细胞有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照，验证TdT酶反应是否正确进行。

    ◆如何对细胞核进行复染？
    可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。

    ◆为什么荧光背景高？
    1. 支原体污染：可以使用支原体染色检测试剂盒验证。
    2. TdT 酶反应时间过长，可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作，稀释后的TdT酶仅供当日使用。
    3. 处于高速分裂和增殖状态中的细胞，有时也会出现细胞核中的DNA 断裂。建议：在非高增殖期取样检测；
    4. 有些试剂或细胞存在自发荧光，选择染料时要避开自发荧光的颜色。
    5. DAB 孵育时间过长，减少DAB 染色时间。
    6. Biotin-X-dUTP 的非特异性结合，在TdT 酶反应之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。

    ◆标记率低？
    1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上购买的甲醛大多含有甲醇）固定的样品标记效率较低（因为在固定时染色质未能与蛋白质交联，而在操作中丢失），采用推荐的固定液。
    2. 固定时间过长，导致交联程度过高，减少固定时间。
    3. 贴壁细胞如果使用药物诱导凋亡，会细胞皱缩，贴壁黏附力降低，导致凋亡细胞容易脱落。建议：在凋亡诱导结束后，可以对多孔板进行1000g离心5min，然后再吸出培养基并用PBS洗涤。如果没有适合的离心机，请注意操作轻缓，防止发生凋亡的细胞在洗涤时被洗去。后续整个操作也需要轻缓。

    ◆在蛋白酶K中消化组织样品多久？
    大部分组织样品需要充分消化15分钟。最佳的培养时间根据组织类型和厚度而不同。脑组织比其他组织需要更长的蛋白酶处理时间。 

    ◆实验的组织切片应该多厚？
    老鼠肠、肾脏、肝脏、心脏和结肠厚度5–20 µm。


    使用本产品的文献：

    1.Caffeine Targets SIRT3 to Enhance SOD2 Activity in Mitochondria
    Huanhuan Xu, Chunxia Gan, Ziqi Gao, Yewei Huang, Simin Wu, Dongying Zhang, Xuanjun Wang，Jun Sheng
    Frontiers in Cell and Developmental Biology

    2.Exposure to Automobile Exhaust-Derived PM2.5 Induces Spermatogenesis Dysfunction by Damaging UPRmtof Prepubertal Rats
    Cao Wang, Xiang Liu, Zhen Shu, Jia Yin, Mingchen Xiao, Yaya Ai, Peng Zhao, Zhen Luo, Bin Liu

    Ecotoxicology and invironmental safety

    3.Protective effect and mechanism of Qingfei Paidu decoction on myocardial damage mediated by influenza viruses

    Lijuan Du, Jing Zhao, Nanxi Xie4, Huangze Xie, Jiating Xu, Xiaoming Bao, Yingsong Zhou, Hui Liu, Xiao Wu, Xin Hu, Tianyi He, Shujun Xu1, Yuejuan Zheng

    Frontiers in Pharmacology

    参考文献:
    1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage
    应用方向：细胞凋亡染色&流式分析

    2.Notch gain of function in mouse periocular mesenchyme downregulates FoxL2 and impairs eyelid levator muscle formation, leading to congenital blepharophimosis
    应用方向：切片染色

    细菌活力/毒性检测试剂盒 货号: L6060S/L6060L 规格: 20T/100T

    发表于由

    细菌活力/毒性检测试剂盒

    产品货号: L6060S/L6060L

    产品规格: 20T/100T

    目录价（元）:500/1916

    推荐仪器：荧光显微镜、流式细胞仪

    大包装询价


    产品概述：

    产品内容

    组分

    L6060S (20T)

    L6060L (100T)

    A. NucGreen

    20 μL

    100 μL

    B. EthD-III

    40 μL

    200 μL

    注：本试剂盒次数是按照1 mL菌液加10 μL的染色工作液规定的。


    光谱信息：NucGreen: Ex/Em = 503/530 nm (结合 DNA)；EthD-III: Ex/Em = 530/620 nm (结合 DNA)。

     

    储存条件

    -20℃ 避光保存，有效期见外包装。

     

    产品介绍

    细菌活力/毒性检测试剂盒包含两种荧光染料，NucGreen 是绿色核酸染料，可染色活细菌和死细菌；EthD-III 是红色核酸染料，仅染色细胞膜受损的死细菌。将 NucGreen 和 EthD-III 适当混用，具有完整细胞膜的细菌呈现绿色，而具有受损细胞膜的细菌在不同通道下可分别呈现绿色和红色。

    细菌活力的常见标准是在合适的营养培养基中繁殖的能力，称为生长测定。本试剂盒通常与在液体或固体培养基中的生长测定结果有着很好的一致性。然而，在某些条件下，膜损伤的细菌可能会在营养培养基中恢复并繁殖，而这种细菌在本测定中会被认定死菌。相反，一些具有完整膜的细菌可能无法在营养培养基中繁殖，但在本测定中会被认认定活菌。因此，若本试剂盒检测结果和细菌生长测定之间有较大的差异，应考虑上述可能。

     

    注意事项

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

    2. 若使用孔板检测，可静置 10 min 后留少量菌液成像，能有效降低背景。

    3. 为更接近真实结果，Merge图片时建议保持红色荧光与绿色荧光亮度一致。

    4. 荧光染料均存在淬灭问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

    5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    细菌活力/毒性检测试剂盒 货号: L6060S/L6060L 规格: 20T/100T L6060S/L6060L    
    MSDS：
    MSDS L6060 DeadTM ViabilityCytotoxicity Assay Kit for Bacteria Cells
    常见问题解答：


    使用本产品的文献：

    1.Multifunctional MIL-101 nanoparticles with Fenton-like reactions to Co-deliver LL-37 peptide and Vancomycin for targeted NIR imaging and Drug-resistant bacteria treatment
    LuogenLai，WanqingZou，YanZhang，YuanbiaoTu，SimengLi，TongxuanXin，TianyueZhou，ShanXu，PengwuZheng，QingshanPan，WufuZhu
    Chemical Engineering Journal

    2.Iodinene Nanosheet-to-Iodine Molecule Allotropic Transformation for Antibiosis
    Yanling You, Ya-Xuan Zhu, Junjie Jiang, Zhixin Chen, Chenyao Wu, Zhimin Zhang , Han Lin, Jianlin Shi
    Journal of the American Chemical Society

    FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T

    发表于由

    FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒

    产品货号: F6012S/F6012M/F6012L

    产品规格: 10T/50T/100T

    目录价（元）:220/737/1244

    推荐仪器：流式细胞仪（主推）、荧光显微镜

    大包装询价


    产品概述：

    产品内容：

    组分

      F6012S（10T）

      F6012M（50T）

      F6012L（100T）

       A. 1× Annexin V 结合缓冲液

    10 mL

    50 mL

    50 mL×2

    B. FITC-Annexin V

    50 μL

    250 μL

    500 μL

    C. PI

    100 μL

    500 μL

    1 mL

    储存条件
    4℃避光冷藏，请勿冻存。有效期见外包装。

    光谱特性
    FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm
    PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

    产品介绍

    FITC-Annexin V/PI凋亡试剂盒提供了一种快速简便的方法，通过标记早期凋亡细胞（绿色）和坏死或晚期凋亡的细胞（红色）检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
    Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，可于磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用绿色荧光探针FITC标记的Annexin V，即FITC – Annexin V，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞，由于细胞完整性已经被破坏，FITC – Annexin V则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
    碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA结合染料，它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488、532或546 nm的激光激发，呈现红色荧光。

    注意事项
    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。
    2. 为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30 min。
    3. 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后 1 h之内进行分析。
    4. 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI 摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 FITC-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA 会影响 Annexin V 与 PS 的结合。
    5. 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30 min后染色，避免假阳性。
    6. 为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的 Tip 头套上小的 Tip 头吸液。
    7. 染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。
    8. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
    9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T F6012S/F6012M/F6012L    
    MSDS：
    MSDS F6012 FITC-Annexin V&PI
    常见问题解答：

    ◆为何染色结果显示细胞凋亡率过高？

    1. 凋亡时间处理过长，使细胞全部死亡。建议重新摸索细胞凋亡条件，使细胞处于不同的凋亡状态。
    2. 对于贴壁细胞，胰蛋白酶消化时间过长或机械刮擦细胞会暂时破坏质膜，使Annexin V能够与细胞膜胞内面上的磷脂酰丝氨酸结合，导致假阳性染色。建议在胰蛋白酶消化或机械刮擦细胞后，让细胞在最佳细胞培养条件和培养基中培养约30分钟，以恢复其膜完整性。

    ◆实验结果使用什么仪器观察？
    实验结果可以通过流式细胞仪和荧光显微镜进行观察，但更推荐使用流式细胞仪。因为正常的细胞和凋亡的细胞膜上都有磷脂酰丝氨酸（PS），只是凋亡细胞膜外更多，可以结合更多的Annexin V，流式细胞仪更灵敏，可以区分出微小差异，将正常细胞与凋亡细胞分成不同的两群，但如果用荧光显微镜，可能观察不到这一差别，尤其是贴壁细胞。若要在成像测定中检测细胞凋亡，推荐使用SuperView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。

    ◆流式细胞仪检测细胞凋亡，结果图中的各个象限代表什么状态的细胞？
    左上角：Annexin V-/PI+，机械损伤细胞；右上角: AnnexinV+/PI+，晚期凋亡细胞或坏死；右下角：AnnexinV+/PI-，早期凋亡细胞；左下角：AnnexinV-/PI-，正常细胞。

    ◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
    不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 如果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

    ◆各象限代表的细胞状态问题？
    Q1：(AnnexinV-染料)-/PI+，此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中，甚至机械损伤的细胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多，实验结果越不可信，建议实验中尽量控制这一象限细胞比例。
    Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+，此区域的细胞为晚期凋亡细胞或坏死。
    Q3：(AnnexinV-染料)+/PI-，此区域的细胞为早期凋亡细胞。
    Q4：(AnnexinV-染料)-/PI-，此区域的细胞为活细胞。

    FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T


    ◆假阳性问题？

    1. 消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V和PS的结合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合剂，使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长，吹打细胞要轻柔，因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤，造成假阳性。细胞消化下来后，建议在培养箱中在孵育30min，使细胞膜恢复完整性，避免假阳性，或者将细胞报讯在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
    2. 如果样品来源于血液，必须去除血液中的血小板，因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，干扰实验结果。建议：可以含有EDTA的缓冲液200g离心去除血小板， 最后细胞多洗几遍，减小EDTA螯合钙离子产生的影响。
    3. 神经细胞膜容易破坏外翻，导致假阳性，所以Annexin V/PI 双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。
    4. 诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡，因此通常不需要处理大于48小时以上，诱导时间过长会使营养物质耗尽，导致细胞状态差，假阳性结果偏高。

    ◆荧光染料选择的问题？
    1. 实验样本是否带荧光，因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带GFP荧光，GFP与YF488/FITC通道重叠，不能选择YF488/FITC标记的Annexin V，此时如果只有488 nm一根激光管可以用PE标记Annexin V，用7-AAD代替PI，若有633 nm激光管，可以改用YF647 Annexin V代替YF488。
    2. 如果流式细胞仪带有488 nm和633 nm两个或以上激光管，首先考虑用APC或YF647标记 Annexin V，因为它和PI通道几乎不用考虑光重叠问题，可以减少调节补偿的烦恼，如果只有488 nm激光管则可选择YF488/FITC标记的Annexin V。
    3. 处理因素是否带有荧光，本实验室就碰到过一个促凋亡药物Doxorubicin本身发红色荧光，对PI通道的检测造成严重干扰，而且浓度越大干扰越明显。这时建议选用A6079或Y6102 。

    ◆圈门问题？
    1.要特别注意在FSC/SSC圈门时，所选细胞范围会对结果造成较大影响，所以在分析数据时，要把所有细胞都圈进FSC/SSC的门内，这样实验结果才会更可信。如图，使细胞群大概位于对角线上，并且细胞群较集中，群内细胞比例要在80%以上，如果细胞全部圈入，细胞比例才50%或者更低，说明细胞被压在了坐标轴上，这时要重新调节FSC和SSC。
    2.贴壁细胞做Annexin V凋亡检测，通常分群不太规则，这时我们可以根据不加药细胞来画不规则的十字门。如上面图形的设门方式：
    FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100TFITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒 货号: F6012S/F6012M/F6012L 规格: 10T/50T/100T

    ◆免疫染色与凋亡染色顺序问题?
    Annexin V凋亡染色可以和抗体一起对细胞进行染色吗？
    可以，但建议Annexin V和其它抗体分开染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同时标记淋巴细胞，可以先在PBS中标记CD3/CD8后洗去，再在Binding buffer（含钙离子）中标记Annexin V。

    ◆这款试剂盒可同时检测出凋亡率和细胞周期分布吗？
    不可以。检测细胞凋亡时PI结合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于检测细胞周期时需要只结合DNA，由于RNA的干扰，用细胞凋亡检测试剂盒测出来的细胞周期不准。同时，凋亡检测与周期检测时PI的工作浓度以及样本处理都不一样。 若果需要进行细胞周期检测，推荐Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）

    ◆固定、冷冻、切片或解离的组织，还可以做流式细胞分析吗？
    不建议做流式细胞分析。因为流式细胞分析要求细胞分散、单个，活性好，这些状态下的样本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影响，因此无法依赖膜的完整性区分健康细胞和凋亡细胞。组织在冻存、复温的过程中会有大量的细胞死亡，同时经过这一过程的组织在分离成单个细胞的时候会形成许多细胞碎片，不宜上流式检测，所以用于流式检测的标本最好是新鲜标本，即取材后立即检测，效果最好。 液氮保存的◆组织块，可以将组织标本进行切片，然后做原位染色，观察组织细胞的凋亡。

    ◆Annexin V可以用在植物和细菌中吗？
    Annexin V也可以用在植物和细菌中检测凋亡，具体实验步骤可参考相关文献。
    使用本产品的文献：

    1.MTP18 overexpression contributes to tumor growth and metastasis and associates with poor survival in hepatocellular carcinoma
    Zhang, Yu Li, Hui Chang, Hulin Du, LixUE  Hai, Jun Geng, Xilin Yan, Xiang
    cell death and disease(2018) 
    应用方向：流式细胞仪检测：SMMC7721和 HLF 细胞的凋亡

    2.    MS-275对食管鳞癌KYSE-70细胞存活、凋亡、细胞周期以及迁移的影响
    刘腾飞，周建康，黄团结，王亚苹，周馨魁，张　乐，张璐玉，陈一豪，刘红涛，关方霞，马珊珊
    郑州大学学报（医学版）(2018) 5 547-552
    应用方向：流式细胞仪检测：食管鳞癌KYSE-70细胞的凋亡

    3.    Histone deacetylases inhibitor MS‐275 suppresses human esophageal squamous cell carcinoma cell growth and progression via the PI3K/Akt/mTOR pathway
    Shanshan Ma  Tengfei Liu  Ling Xu  Yaping Wang  Jiankang Zhou  Tuanjie Huang  Peng Li  Hongtao Liu Yanting Zhang  Xinkui Zhou  Yuanbo Cui  Xingxing Zang  Yuming Wang  Fangxia Guan
    Journal of Cellular Physiology （23 May 2019）
    应用方向：细胞凋亡检测：食管鳞状癌细胞（ESCC）

    4.    SDHC-related deficiency of SDH complex activity promotes growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via ROS/NFκB signaling
    JibinLi，NingLiang，XiaoyuLong，JingZhao，JinYang，XiaohongDu，TaoYang，PengYuan，XiaojunHuang，JianshengZhang，XianliHe，JinliangXing
    Cancer Letters Volume 461, 1 October 2019, Pages 44-55
    应用方向：细胞凋亡检测:：肝细胞癌（HCC）

    5.    MTFP1 overexpression promotes the growth of oral squamous cell carcinoma by inducing ROS production
    Tingying Xiao，Jian Sun，Zhankui Xing，Fuqiang Xie，Lan Yang，Wenjuan Ding
    CELL BIOLOGY INTERNATIONAL
    应用方向：细胞凋亡检测：口腔鳞状细胞（OSCC）

    6.ALG-2 couples T cell activation and apoptosis by regulating proteasome activity and inflUEncing MCL1 stability
    Tian-Sheng He, Wangsheng Ji, Junqi Zhang, Jing Lu，Xinqi Liu 
    Cell Death & Disease（11, Article number: 5 (2020)）

    7.Over‐expression of TFB2M facilitates cell growth and metastasis via activating ROS‐Akt‐NF‐κB signaling in hepatocellular carcinoma
    Xilin Geng，Zhimin Gen，Hui Li，Yu Zhang，Jibin Li，Hulin Chang
    liver international

    8.CRIF1 overexpression facilitates tumor growth and metastasis through inducing ROS/NFκB pathway in hepatocellular carcinoma
    Hulin Chang,Juntang Li,Kai Qu,Yong Wan,Sinan Liu,Wei Zheng,Zhiyong Zhang，Chang Liu
     Cell Death & Disease volume 11, Article number: 332 (2020) 

    9.Caffeine Targets G6PDH to Disrupt Redox Homeostasis and Inhibit Renal Cell Carcinoma Proliferation
    Huanhuan Xu,Lihong Hu, Titi Liu1, Fei Chen, Jin Li, Jing Xu, Li Jiang, Zemin Xiang, Xuanjun Wang，Jun Sheng
    Frontiers in Cell and Developmental Biology

    10.A Network Pharmacology Approach to Investigate the Anticancer Mechanism and Potential Active Ingredients of Rheum palmatum L. Against Lung Cancer via Induction of Apoptosis
    Qing Zhang, Jia Liu, Ruolan Li, Rong Zhao, Mengmeng Zhang, Shujun Wei, Dong Ran, Wei Jin, Chunjie Wu
    Frontiers in Pharmacology

    11.MIEF2 over-expression promotes tumor growth and metastasis through reprogramming of glucose metabolism in ovarian cancer
    Shuhua Zhao, Xiaohong Zhang, Yuan Shi, Lu Cheng, Tingting Song, Bing Wu, Jia Li & Hong Yang
    Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

    12.Repurposing Erythrocytes as a “Photoactivatable Bomb”: A General Strategy for Site-Specific Drug Release in Blood Vessels
    Ya-Xuan Zhu,Hao-Ran Jia,Yuxin Guo,Xiaoyang Liu,Ningxuan Zhou,Peidang Liu,Fu-Gen Wu
    Small

    13.Multienzyme-like Reactivity Cooperatively Impairs Glutathione Peroxidase 4 and Ferroptosis Suppressor Protein 1 Pathways in Triple-Negative Breast Cancer for Sensitized Ferroptosis Therapy
    Ke Li, Chuanchuan Lin, Menghuan Li, Kun Xu, Ye He, Yulan Mao, Lu Lu, Wenbo Geng, Xuemin Li, Zhong Luo, Kaiyong Cai
    ACS Nano

    14.A multiple functional supramolecular system for synergetic treatments of hepatocellular carcinoma
    LijingSun, LiyuanChen, KeYang, Wei FengDai, YeYang, XiumingCui, BoYang, ChengxiaoWang
    International Journalof Pharmaceutics

    ROS活性氧检测试剂盒 货号: R6033 规格: 1000T

    发表于由

    ROS活性氧检测试剂盒

    产品货号: R6033

    产品规格: 1000T

    目录价（元）:395

    推荐仪器：流式细胞仪、荧光显微镜

    大包装询价


    产品概述：
    产品内容

    组分 规格
    A. DCFH-DA（10 mM） 0.1 mL
    B. 活性氧阳性对照（Rosup 100 mM） 1 mL

    产品参数
    Ex/Em：504/529 nm

    储存条件
    -20℃避光保存，有效期见外包装。

    产品介绍
    DCFH-DA（二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯）本身无荧光，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的酯酶水解，形成 DCFH，DCFH 无荧光且不能通透细胞膜，从而被细胞内的活性氧氧化生成有荧光的 DCF。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。Rosup 为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。

    注意事项
    1. 阳性对照 Rosup 一般使用浓度为 100 μM（推荐浓度 100-400 μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后 30 min-4 h 可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后 30 min 内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
    2. 实验过程中，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照 1:2000-1:5000 稀释 DCFH-DA，使 DCFH-DA 的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间也可以根据情况在 15-60 min 内适当进行调整。
    3. 活性氧阳性对照（Rosup）仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
    4. 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
    说明书：

    ROS活性氧检测试剂盒 货号: R6033 规格: 1000T R6033    
    使用本产品的文献：

    1.Identification of a new natural biflavonoids against breast cancer cells induced ferroptosis via the mitochondrial pathway 
    Yang Xie，Xi Zhou，Jing Li，Xiao-Chang Yao，Wan-Li Liu，Feng-Hua Kang，Zhen-Xing Zou，Kang-Ping Xu，Ping-Sheng Xu，Gui-Shan Tan

    Bioorganic Chemistry Volume 109, April 2021, 104744

    2. Transcriptional characteristics and functional validation of three monocyte subsets during aging.

    Chen Wang, Yating Cheng , Boyu Li , Xueping Qiu , Hui Hu , Xiaokang Zhang , Zhibing Lu and Fang Zheng

    Wang et al. Immunity & Ageing (2023) 20:50

    3. The immunomodulatory efects of metformin in LPS‑induced macrophages: an in vitro study.

    Zhiyong Wang , Min Wang , Mao Lin , Pei Wei

    Infammation Research

    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI) 货号: L6037S/L6037M/L6037L 规格: 30T/150T/300T

    发表于由

    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI)

    产品货号: L6037S/L6037M/L6037L

    产品规格: 30T/150T/300T

    目录价（元）:202/778/1139

    推荐仪器：荧光显微镜、流式细胞仪

    大包装询价


    产品概述：

    产品内容

    组分

    L6037S (30T)

    L6037M (150T)

    L6037L (300T)

    A.   4 mM Calcein AM（无水DMSO）

    10 μL

    50 μL

    100 μL

    B. 1.5 mM Propidium（PI in H2O）

    50 μL

    250 μL

    500 μL

    注：本试剂盒次数是按照流式细胞仪一个样品使用0.5 mL工作液规定的。


    光谱信息：Calcein AM：Ex/Em = 494/517 nm，PI：Ex/Em=535/617 nm（结合DNA）

     

    储存条件

    -20˚C避光保存。注意Calcein AM容易水解，需密封干燥保存，稀释工作液需当天配制。有效期见外包装。

     

    产品介绍

    Live & DeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI)是一种检测动物细胞死活的双荧光染色试剂盒。试剂盒内的两种探针可分别通过测定细胞内酯酶活性和质膜完整性从而反映细胞活力。本试剂盒可用于荧光显微镜、流式细胞仪、酶标仪以及其他荧光检测系统。

    本试剂盒可应用于大多数的真核哺乳动物细胞，包括贴壁细胞核的某些组织，但不适用于真菌和酵母。本试剂盒与相同用处的台盼蓝相比，更快捷安全且灵敏度更高。


    注意事项

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

    2. 酚红或血清对于本试剂盒的检测有一定的干扰。

    3. 荧光染料均存在淬灭问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

    4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    Live & DeadTM 动物细胞活力/毒性检测试剂盒 (Calcein AM, PI) 货号: L6037S/L6037M/L6037L 规格: 30T/150T/300T L6037S/L6037M/L6037L    
    MSDS：
    MSDS L6037 Live & DeadTM ViabilityCytotoxicity Assay Kit for Animal Cells (Calcein AM, PI)
    常见问题解答：

    ◆我如何为LIVE/DEAD细胞活力实验准备死细胞对照？

    有两种简单的方法。一种是通过60°C放置20分钟热灭活细胞。第二种是将细胞放入70%乙醇。乙醇固定的细胞可以在冰箱中无限期储存直到使用，可达好几年。
    步骤：
    a.离心细胞、使细胞沉淀并去除上清
    b.固定细胞：在15mL含有细胞团的试管中加入10 mL70%冰乙醇，先开始逐滴加入后震荡，混合均匀。
    c.在冰箱中储存直到使用。
    d.快使用时，水洗两次且在选择的缓冲液中重悬。

    ◆用该试剂盒染色后，可以进行后续固定步骤吗？
    染色后不可以进行固定步骤。PI作为膜非透性染料，固定后将转移到所有细胞，不再维持死细胞特异性染色。


    使用本产品的文献：

    1.Scutellarin potentiates vancomycin against lethal pneumonia caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus through dual inhibition of sortase A and caseinolytic peptidase P
    Author links open overlay panelXingyeWang, LinWei, LiWang, XiaoyuChen, XiangriKong, YanheLuan, JiyuGuan, XueruiGuo, YanShi, TiedongWang, BingmeiWang, WuSong, YichengZhao
    Biochemical Pharmacology

    参考文献
    1.Cooption of heat shock regulatory system for anhydrobiosis in the sleeping chironomid Polypedilum vanderplanki
    应用方向：死活细胞染色、细胞计数

    2.Connexin43 hemichannels contribute to cadmium-induced oxidative stress and cell injury
    应用方向：死活细胞染色、细胞活力

    3.An improved fluorescence assay for the determination of lymphocyte-mediated cytotoxicity using flow cytometry
    应用方向：细胞流式

    4.Visualization of keratocytes in the human cornea with fluorescence microscopy
    应用方向：组织切片染色

    Firefly Luciferase Assay Kit（萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒） 货号: F6024S/F6024M/F6024L 规格: 50T/200T/5×200T

    发表于由

    Firefly Luciferase Assay Kit（萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒）

    产品货号: F6024S/F6024M/F6024L

    产品规格: 50T/200T/5×200T

    目录价（元）:619/1415/5129

    推荐仪器：化学发光仪、酶标仪或液闪测定仪

    大包装询价


    产品概述：

    储存条件：-20℃保存，有效期见外包装


    应用范围：真核基因表达调控研究

    产品特点

    1. 快速：细胞裂解在10-15 min内完成。

    2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

    3. 灵敏：能够检测最低10-20 mol的萤光素酶。

    4. 酶的浓度线性范围可达8个数量级。

     

    产品组分

    组分

    F6024S（50T）

    F6024M（200T）

    F6024L（5×200T）

    A. 5×Firefly Luciferase Lysis Buffer

    5 mL

    20 mL

    5×20 mL

    B. Firefly Luciferase Assay Buffer

    5 mL

    20 mL

    5×20 mL

    C. D-Luciferin

    5 mg

    5 mg

    5×5 mg

    产品介绍

    真核基因表达调控研究常用的方法是进行报告基因的检测，生物发光法又是报告基因检测最常用的有效手段。萤光素酶能催化底物萤光素的转化，并发射出光子。该产品为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供快速、灵敏、稳定的检测方法。能够检测最低10-20 mol的萤光素酶，在10-14至10-20 mol的酶浓度范围内呈很好的线性关系。

      

    注意事项

    1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

    2. 温度会对酶的活性产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。

    3. 如果单管萤光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。

    4. 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm。

    5. 为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

    6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


    说明书：

    Firefly Luciferase Assay Kit（萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒） 货号: F6024S/F6024M/F6024L 规格: 50T/200T/5×200T F6024S/F6024M/F6024L    
    常见问题解答：

    ◆检测的萤光数值很低怎么办？

    (1）可能为转染效率低
    a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；
    b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
    c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。
    (2）可能为启动子活性低或诱导失败
    a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
    b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
    c.更换强启动子（如SV40、CMV）。
    注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。
    (3）样品裂解效率低
    a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
    b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。
    (4）检测过程操作不规范
    a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
    b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
    c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
    d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。
    (5）底物氧化失效
    a.底物避光密封保存，萤火虫荧光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
    b.反应工作液建议现用现配。

    ◆进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？
    （1） 减少质粒转染量。
    （2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。
    注：不建议通过减少底物量来降低荧光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。