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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 ：酵母
K. lactis 蛋白表达试剂盒 收藏
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特性
可克隆和表达对大肠杆菌有毒性的基因
可同时表达多个基因
无需昂贵的抗生素或甲醇
易操作的实验步骤，适用于无酵母表达经验者
有吸引力的商业授权
有吸引力的商业授权
pKLAC2 载体限制性酶切图谱请参见 385 页，序列信息请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com 查询。
概述
K. lactis 蛋白表达试剂盒提供了一种在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中表达目的基因的简便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合载体中，既可表达胞内蛋白，亦可表达分泌型蛋白。与其它酵母和细菌表达系统相比，K. lactis蛋白表达系统有着诸多优点。首先，乳酸克鲁维酵母具有高培养密度及整合多拷贝质粒的能力，使其可成功制备大量的高表达蛋白质；其次，pKLAC1 系列载体使用强 LAC4 启动子，该启动子经修饰，在大肠杆菌中无背景表达，因此，可用于对大肠杆菌有毒性的基因表达。另外，酵母转化子的筛选不需要昂贵的抗生素，培养基中也不需要甲醇。最后，K. lactis 细胞表达的蛋白质可以进行翻译后修饰，因而可成为细菌表达系统的有用替代。
pKLAC2 属于通用表达载体。利用这些载体既可使重组蛋白在细胞内表达，也能通过与 K. lactis α-mating factor(MF) 的融合实现分泌表达。pKLAC2的多克隆位点与 NEB 其它表达系统相兼容。
GG799 是 K. lactis 蛋白表达试剂盒中提供的基础菌株。其特点是细胞生长密度与异源蛋白表达效率极高，GG799 细胞未经遗传修饰。
蛋白质的分泌过程。在细胞核中，整合表达载体编码了一个含有 α-MF 结构域（蓝色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表达后，位于 α-MF 上的信号肽就会指导融合蛋白转运至内质网（ER），信号肽即被信号肽酶（SP）切除。融合蛋白质转运至高尔基体，Kex 蛋白酶在此将 α-MF 结构域切除。随后，目的蛋白质被分泌到细胞外。
K.lactis的蛋白表达。SDS-PAGE 电泳分离检测分泌性表达的重组麦芽糖结合蛋白（MBP），菌体生长在富含蛋白胨（peptone）的培养基中，直接上样检测。考马斯亮蓝染色鉴定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 细胞培养液（15 μl）；泳道 3：整合有大肠杆菌 malE 基因表达框的 K. lactis细胞培养液（15 μl）。
K. lactis 蛋白表达试剂盒包括
– pKLAC2 载体和 pKLAC1-malE 对照质粒
– SacII
– 整合测序引物套装
– K. lactis GG799 感受态细胞和转化试剂
– 酵母碳基础培养基与乙酰胺溶液
参考文献
关于这些产品特点与应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。
