Monarch RNA 纯化试剂盒(500 µg) 货 号 #T2050L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 核酸纯化 – RNA提取和纯化

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#T2050L
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Monarch RNA 纯化柱(10 µg)
Monarch RNA 纯化柱(50 µg)
Monarch RNA 纯化柱(500 µg)
Monarch 收集管II
Monarch RNA 纯化结合缓冲液
Monarch RNA 纯化洗涤缓冲液
无核酸酶水

特性

 3种结合力和洗脱体积可选

轻松快速地从体外转录反应(IVT)中纯化获得高产量和高质量的RNA

高效去除RNA样本中的游离核苷酸

适用于HiScribeTM试剂盒体外转录之后的RNA 纯化。

概述

该产品是 RNA 纯化浓缩试剂盒,采用了简单快速的硅胶膜离心技术,适用于酶学反应后 RNA,如:体外转录(IVT)、 DNaseI 处理、加帽和标记等;也适用于 RNA提取后的样本,如:苯酚/氯仿提取的 RNA。NEB 提供三种不同结合力的试剂盒:10 μg、50 μg 和500μg,每一款试剂盒所用纯化柱都是经过独特设计以确保无缓冲液、无残留污染、低洗脱体积,可获得高纯度RNA。按着标准说明书,适合纯化RNA ≥25 nt的片段。通过调整说明书,可将回收片段大小从 25 nt降低到 15 nt(包括miRNAs)。

应用

 RNA 纯化和浓缩(包括来源TRIzol提取的 RNA)

酶学反应纯化
体外转录纯化
胶回收RNA纯化
回收不同大小片段 RNA
 

Monarch RNA 纯化试剂盒组成

 Monarch RNA 纯化试剂盒组成:

– Monarch RNA 纯化柱(10、50或者500 µg)
– Monarch RNA 纯化结合缓冲液
– Monarch RNA 纯化洗涤缓冲液
– Monarch 收集管II
-无核酸酶水
 
Monarch RNA 纯化试剂盒(500 µg)            货   号                  #T2050L
Monarch RNA纯化试剂盒用不同洗脱体积回收RNA。rRNA (来自Sigma 大肠杆菌 16s和 23srRNA标准物各10μg、50μg或者 500 μg)用MonarchRNA 纯化试剂盒(10 μg,NEB #T2030)(50 μg,NEB #T2040) (500 μg,NEB #T2050)进行纯化。用无核酸酶水洗脱RNA。RNA回收率的百分比用Trinean® DropSense® 16测量的A260进行计算得到。当 MonarchRNA 纯化试剂盒(10 μg,NEB #T2030;50 μg,NEB #T2040;500 μg,NEB #T2050)的洗脱体积是6μl、20μl和 50 μl时,大约 80%的 RNA 可高效回收。

Monarch RNA 纯化柱(500 µg) 货 号 #T2057L-NEB酶试剂 New England Biolabs

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该产品是 RNA 纯化浓缩试剂盒,采用了简单快速的硅胶膜离心技术,适用于酶学反应后 RNA,如:体外转录(IVT)、 DNaseI 处理、加帽和标记等;也适用于 RNA提取后的样本,如:苯酚/氯仿提取的 RNA。NEB 提供三种不同结合力的试剂盒:10 μg、50 μg 和500μg,每一款试剂盒所用纯化柱都是经过独特设计以确保无缓冲液、无残留污染、低洗脱体积,可获得高纯度RNA。按着标准说明书,适合纯化RNA ≥25 nt的片段。通过调整说明书,可将回收片段大小从 25 nt降低到 15 nt(包括miRNAs)。

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NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统 货 号 #E8201S-NEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 蛋白表达和纯化技术 – 表达系统 :大肠杆菌

NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统                              收藏

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#E8201S
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产品特点

该产品可直接替换 NEB #E8200,pMAL™ 蛋白融合表达系统

NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统利用 Ptac 超强启动子和麦芽糖结合蛋白(MBP)的翻译起始信号来增强目标蛋白在大肠杆菌中的溶解度和表达水平。所得产物是 MBP 融合蛋白,后续可通过亲和反应进行纯化。
 

特性

·稳定可靠的大肠杆菌表达系统:蛋白产量高(可达 100 mg/L)
·目标蛋白与 MBP 融合表达可增强其在大肠杆菌中的溶解度(1)
·两步纯化:第一步:直链淀粉洗脱后使用 TEV 蛋白酶切割,第二步:经镍柱填料分离可获得高纯度的无标签的靶蛋白
·使用麦芽糖进行温和洗脱;无需洗涤剂或刺激性变性剂
 

概述

 在 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统中,pMAL-c6T 载体提供了一种将克隆基因或开放阅读框编码的蛋白质表达和纯化的方法。首先,将目标克隆基因插入大肠杆菌编码麦芽糖结合蛋白(MBP)的 malE 基因框架下游;这样构建的载体可表达 MBP 融合蛋白(2,3)。pMAL-c6T 载体表达 N 端标记六组氨酸的 malE 基因(缺少分泌信号序列,并且经改造可以与直链淀粉更紧密地结合),其后是 TEV 蛋白酶识别序列、多克隆酶切位点和三位终止密码子。pMAL-c6T 载体在细胞质中表达 MBP 融合蛋白。这种方法使用“tac”强启动子和 malE 翻译起始信号,从而能够使克隆序列进行高水平表达(4,5)。然后,利用 MBP 与麦芽糖的亲和特性,使用直链淀粉树脂对融合蛋白进行一步纯化(6)。


直链淀粉纯化后,可以使用 TEV 蛋白酶将 MBP 标签从目标蛋白上切下来,目标蛋白不残留任何载体衍生基团。MBP 标签和 TEV 蛋白酶均带有 His 标签,因此可轻松从反应中去除。将上述反应产物经 NEBExpress 镍柱填料(NEB#S1428)分离,可去除 MBP 标签和 TEV 蛋白酶,从而在收集管液中可获得目标蛋白。目标蛋白产量最高可达 100 mg/L,一般产量为 10–40 mg/L。

图 1:NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统的原理图
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统            货   号                  #E8201S
图 2:使用 NEBExpress® MBP 融合表达及纯化系统进行蛋白表达
NEBExpressTM MBP 融合表达及纯化系统            货   号                  #E8201S
亲和纯化的 MBP6-TEV-ParamyosinΔSal 蛋白使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。泳道 1:蛋白标准品。泳道 2:未处理的细胞。泳道 3:转入目标基因的细胞。泳道 4:使用麦芽糖从直链淀粉柱上洗脱下来的纯化融合蛋白。泳道 5:TEV 蛋白酶切割后的纯化蛋白。泳道 6:NEBExpress 镍柱填料收集管液分离的目标蛋白。
 

试剂盒组分

随产品提供如下试剂

 

名称

储存温度()

浓度

pMAL-c6T DNA

 

200 µg/ml

Amylose Resin

4

 

TEV Protease

-20

10,000 units/ml

TEV Protease Reaction Buffer

-20

10 X

Anti-MBP Monoclonal Antibody

-20

 

MBP6 Protein

-20

40 µg/ml

MBP6-TEV-Paramyosin ΔSal

-20

5 mg/ml

E. coli ER2523 (NEB Express) (Glycerol Stock)

-20

 

储存温度

 -20℃