Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测

	货号	16350	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	552	Em (nm)	575
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样本实验方案

概述

在生长培养基中制备细胞

用测试化合物孵育细胞和Nitrixyte™橙色工作溶液

添加测定缓冲液II

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中以30,000至80,000个细胞/孔/90μL对96孔板进行平板培养过夜，或对于384孔板以8,00至20,000个细胞/孔/20μL进行平板培养。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，将细胞沉淀悬浮于125,000-250,000细胞/孔/90μL的培养基中，96孔poly-D赖氨酸平板或30,000-60,000细胞/孔 /20μL，用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

2.准备工作解决方案：

2.1使用前将所有试剂盒组分置于室温下。

2.2为一个细胞板制备Nitrixyte™橙色工作溶液：将20μLNitrixyte™橙色储备溶液（组分A）加入10 mL分析缓冲液I（组分B）中，并充分混合。工作溶液在室温下稳定至少2小时。

注意：20μL的Nitrixyte™Orange原液足以用于一个平板。 在<-20℃下等分并储存未使用的Nitrixyte™Orange原液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

3.运行NO测定：

3.1为刺激内源性NO，在细胞培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。 然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。 在抽吸后加入90μL/孔（96孔板）和20μL/孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。 或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

3.2在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Nitrixyte™Orange工作溶液（来自步骤2.2）。将细胞与测试化合物和Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下共孵育一段所需的时间，避光。

注意1：不要去除测试化合物。

注意2：对于NONOate阳性对照处理：将细胞与Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下孵育30分钟。除去工作溶液，将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。详细信息请参见说明书的图1。

注意3：我们使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte™Orange，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）在37℃的细胞培养基中孵育16小时。

3.3在每口井中取出溶液。添加测定缓冲液II（组分C）100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

注意：在添加Assay Buffer II之前，请勿清洗细胞。

3.4使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪观察荧光增加，或者使用具有TRITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 µL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Ni​​trixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.添加1 µL 500X Nitrixyte 红色
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间
4.使用FL4通道的流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照治疗储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照治疗原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的最佳细胞密度。

2.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte Red（组分A）。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Red孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37℃的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与Nitrixyte Red工作溶液，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.降低已经用Ni​​trixyte Red预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测FL4通道（Ex / Em = 630/660 nm）处的荧光强度。

参考文献

MAGI1 Mediates eNOS Activation and NO Production in Endothelial Cells in Response to Fluid Shear Stress
Authors: Kedar Ghimire, Jelena Zaric, Begona Alday-Parejo, Jochen Seebach, Mélanie Bousquenaud, Jimmy Stalin, Grégory Bieler, Hans-Joachim Schnittler, Curzio Rüegg
Journal: Cells (2019): 388

Functions of transcription factors NF-$kappa$B and Nrf2 in the inhibition of LPS-stimulated cytokine release by the resin monomer HEMA
Authors: Helmut Schweikl, Marialucia Gallorini, Gerd Pöschl, Vera Urmann, Christine Petzel, Carola Bolay, Karl-Anton Hiller, Amelia Cataldi, Wolfgang Buchalla
Journal: Dental Materials (2018)

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
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	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液I（组分B）中，并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

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样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO，请在细胞培养基或所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和20 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间，并避光。注意：请勿去除测试化合物。注意：对于NONOate阳性对照治疗：将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液，并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息，请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。有关详细信息，请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II（组分C），对于96孔板是100 µL /孔，对于384孔板是25 µL /孔。注意：在添加测定缓冲液II之前，请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于流式细胞仪近红外检测

	货号	16360	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	650	Em (nm)	680
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间
4.使用APC通道通过流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照治疗储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照治疗原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的最佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Nitrixyte NIR（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中将Raw 264.7细胞与Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.旋转已用Nitrixyte NIR预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的荧光强度。

参考文献

The Selective Acetamidine-Based iNOS Inhibitor CM544 Reduces Glioma Cell Proliferation by Enhancing PARP-1 Cleavage In Vitro
Authors: Marialucia Gallorini, Cristina Maccallini, Alessandra Ammazzalorso, Pasquale Amoia, Barbara De Filippis, Marialuigia Fantacuzzi, Letizia Giampietro, Amelia Cataldi, Rosa Amoroso
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2019): 495

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
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	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒提供了基于荧光的测定法，用于使用流式细胞仪检测细胞内钙动员。它可以用于动力学读数或终点读数。将Calbryte 520 AM染料加载到细胞中后，只需洗涤细胞并添加钙通量激动剂，即可通过流式细胞仪使用动力学读取模式或终点读取模式读取样品。 Calbryte 520 AM可以通过扩散被动地穿过细胞膜。一旦进入细胞内部，Calbryte 520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激表达目的GPCR的细胞时，受体会发出释放细胞内钙的信号，这会明显增加Calbryte 520的荧光。Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒也可用于检测细胞钙通量作为细胞分选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在测定缓冲液中准备细胞
2. 添加Calbryte 520 AM染料加载溶液（1 µL）
3. 在37°C孵育30分钟
4. 清洗细胞
5. 添加钙通量激动剂
6. 在530/30 nm滤光片（FITC通道）使用流式细胞仪检测荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

Calbryte 520 AM储备溶液（500X）：在Calbryte 520 AM储备溶液（组分A）的小瓶中加入100 µL DMSO（未提供），并充分混合。 注意：100 µL Calbryte 520 AM储备溶液足以进行100次测定。 如果试管密封严密，可以将未使用的Calbryte 520 AM原液分装并在<-20°C下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

  

实验步骤

1.除去细胞培养基，并加入0.5 mL测定缓冲液。注意：对于贴壁细胞和非贴壁细胞，建议分别使用4 x 10⁵ – 8 x 10⁵和1 x 10⁶-2 X 10⁶。每个细胞系应根据个体情况进行评估，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。

2.将1µL Calbryte 520 AM储备溶液（500X）加到0.5 mL非标准或贴壁细胞的测定缓冲液（组分B）中。注意：如果细胞（例如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（组分C）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度将为0.125-1 mM），以减少去离子水的泄漏。

3.将细胞在37°C下孵育30分钟。

4.对于非贴壁细胞，将细胞离心并去除染料。将细胞重悬于0.4 mL HHBS（组分D）中。对于贴壁细胞，使用0.5 mM EDTA轻轻地将细胞从板中提起并离心。将细胞重悬于0.4 mL HHBS（组分D）中。注意：要从板上分离贴壁细胞，可以考虑使用酶试剂（例如胰蛋白酶，Accutase），但需要进行测试以确保细胞表面上的目标受体不受影响。

5.用HHBS或所需的缓冲液制备5X激动剂化合物。

6.使用530/30 nm滤光片（FITC通道）在流式细胞仪上检测，在添加100 µL制备的激动剂之前和之后分析样品。注意：为获得最佳结果，重要的是在添加激动剂后1分钟内进行测定。确保激动剂添加到实际读数开始之间的时间对于所有样品保持恒定。

 

图示

 

 

图1.通过Cell Meter 流式细胞钙测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP诱导的细胞内钙释放。将细胞与Calbryte 520 AM染料在37°C下孵育30分钟，然后向细胞中添加10μM的ATP， 在加入ATP后，获得基线并分析其余细胞。这种反应是随着时间的推移而测量的。分析在NovoCyte 3000流式细胞仪上进行。图表上的箭头表示添加ATP和实际分析之间的时间（30秒）。

通过Cell Meter 流式细胞钙测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP诱导的细胞内钙释放。将细胞与Calbryte 520 AM染料在37°C下孵育30分钟，然后向细胞中添加10μM的ATP， 在加入ATP后，获得基线并分析其余细胞。这种反应是随着时间的推移而测量的。分析在NovoCyte 3000流式细胞仪上进行。图表上的箭头表示添加ATP和实际分析之间的时间（30秒）。B.荧光信号随时间的变化。

 

 

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