阿折地平片说明书

Hampton品牌代理商–上海金畔
1. Hampton品牌介绍
美国Hampton Research公司是蛋白质晶体研究方面的专家，其提供的试剂长期以来在该领域居于领先地位，为广大研究人员提供了极大的方便，促进了蛋白质晶体的研究，为世界范围内的蛋
白质晶体研究人员所信赖。
2. Hampton重点产品
蛋白质晶体
仪器耗材
3. Hampton官网
http://hamptonresearch.com/
4. 金畔生物代理Hampton品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq: 2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com

Corning品牌代理商–上海金畔

1. Corning品牌介绍
康宁公司是在生命科学实验室产品方面拥有90多年历史的全球领先开发商、制造商和供应商，对于药物研发过程中提高效率、降低成本、节约时间等方面有着突出贡献，成为众多科研人员最
为信赖的实验室伙伴。凭借在光学、材料科学、特殊表面和生物方面等多专业领域内的丰富积累，康宁的一系列革命性解决方案，提高制药业产能，并使突破性发现成为可能。
除了在生命科学研究领域作为玻璃耗材和塑料实验室用品供应的全球领导者，康宁还致力于不断研发和制造生命科学的其他产品，有康宁 Epic® 系统用于无标记探测，HYPERFlask® 细
胞培养瓶用于大规模细胞培养，新型表面如超低吸附表面和CellBIND® 表面，提高化验精度。我们仍持续满足客户独特的需求和不断变化的需求。
2. Corning重点产品
实验室耗材
培养基
3. Corning官网
http://www.corning.com
4. 金畔生物代理Corning品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq: 2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com

实验十三 DNA片段的连接技术
一、目的与原理
DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。
二、材料和方法
1． 仪器
离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器
2． 试剂
T4DNA连接酶，10×T4DNA连接酶缓冲液、200mM Tris-HCl(pH7.6)、50mM MgCl2、50mM DTT、500μg/ml牛血清白蛋白、5mM ATP、λDNA、酚，TE缓冲液，电泳缓冲液、3M NaAc
三、操作步骤
取干净、灭菌新Eppendorf管，按下表加入各试液
试液 体积（μl）
T4DNA连接酶缓冲液 1.5
λDNA 10
ATP 1
无菌水 1.5
连接酶 1
总体积 15
19–20℃ 保温2小时，提取已连接好的DNA片段。电泳分析。
四、结果 （略）
五、注意事项
1、 该实验用的T4DNA连接酶最适反应是37℃，但该温度下DNA退火效率低，连接效率还不如22℃高。
2、 如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。
实验十四 受体菌感受态细胞的制备
一、目的与原理
当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。
二、材料和方法
1． 材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2． 仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3． 试剂
LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴
TFB：10Mm MES（pH6.3）
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
三、操作步骤
大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)在LB培养基平板上划线培养12-16小时，挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)到对数期。取1ml培养物7000rpm，离心3min，收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体，冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体，冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙（或TFB），放置于冰浴，即得感受态细胞，此细胞可现用，也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中，投入液氮，然后储于-70℃保存。
四、结果 （略）
五、注意事项
一般地，新制备的感受态细胞48h后转化效率降低，15d后失效。因此，感受态细胞不能保存太久，4℃保存一周，但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔，损伤感受态细胞。
实验十五 重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理
转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)(Genetic Engineering)领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。
二、材料和方法
1.材料：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)(Escherichia coli)
2.仪器：
离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
3.试剂
LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB：10mM MES（pH 6.3）,45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
三、操作步骤
1. 感受态细胞融化（在手心）
2. 加入溶于TE的待转化外源DNA，冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 加入0.4 ml LB液体培养基，37℃保温摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄青霉素、IPTG、X-gal培养基上，37℃培养。
四、实验结果及分析：
培养皿上有白色菌落和兰 色菌落，但兰色菌落数量很少。由于受体细胞本身的菌落为兰色，所以白色菌落说明转化成功；兰色应为转化不成功。但是由于转化的质粒经过了酶切和连接，若是在原酶切位点的连接进行的转化，菌落为白色；若为酶切去一段DNA的的连接质粒进行的转化，菌落为兰色（说明在酶切上成功，连接上也成功，转化上也成功）。
五、注意事项
关键要严格控制热激时间，超过2min，则转化会失败。
免疫学实验
实验十六 单向琼脂扩散实验
一、原理
单向琼脂扩散实验又称单向免疫扩散实验。指可溶性抗原在相应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、定量抗原。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.取15ml琼脂糖加到56℃预热玻璃管中，加入约200微升抗血清，充分混匀后铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.待凝胶凝固后打孔，直径为3㎜，将孔内琼脂弄出。
4.将系列稀释的标准抗原和待检抗原分别加到凝胶孔内，每孔5微升。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果。
三、实验结果
发现沉淀环的大小与抗原的浓度成反比，基本成线性相关。其大小不仅与孔中抗原的浓度相关，而且和琼脂中抗体的浓度有关。
实验十七 双向琼脂扩散实验
一、原理
双向琼脂扩散实验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。
二、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。
3.打孔，孔距为4㎜，
4.将抗血清按二倍稀释法稀释成1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32的不同浓度。
在周围孔中加入不同浓度的抗体，中心孔加抗原。
将凝胶板置于湿盒内，室温过夜，观察结果
三、实验结果
浓度不同，形成不同的沉淀的线。
实验十八 免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台，将1%琼脂糖融化，56℃水浴中保温。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.在孔内加入抗原，其中一孔内加电泳指示剂。
4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳，确定电泳时间。
5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽的长槽，加入抗血清。
二、实验结果
将凝胶板放入湿盒，室温放置12小时，可观察在到沉淀弧线。
实验十九 对流免疫电泳
一、操作步骤
1．1％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2．取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，凉干。
3．将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
4．在孔内分别加入抗原和抗体，每孔5微升，抗体点阳极，抗原点阴极。
5．在电场中电泳50min，5V。
二、实验结果
在小孔中间出现沉淀线。
实验二十 火箭免疫电泳
一、操作步骤
1.取一块干净的玻璃板，用少量75%乙醇冲洗，晾干后置于水平台。
3％琼脂糖融化后，置于56℃备用。
2.将琼脂糖铺于玻璃板上，厚度约为1㎜。凝固后，打孔。
3.将抗原按倍比稀释，在孔内分别加入标准抗原和代测样品，每孔5微升。
在10V电场中电泳3小时。
二、实验结果
发现在电泳方向上有拖尾，拖尾长度与抗原浓度有关。
 

Avanti品牌代理商–上海金畔

1. Avanti品牌介绍
Avanti磷脂—世界实验室磷脂知名品牌
Avanti —–优质的脂质产品 丰富的产品种类，将为您的实验保驾护航
Avanti Polar Lipids Inc.享誉全球的磷脂类和甾体类中间体和试剂生产商，在磷脂类和甾体类的研发与生产方面具有国际一流实力，它为各地的制药厂及研究机构提供1000种以上的磷脂类产品。其产品的高纯度为客户提供了有质量保证的产品，该公司能提供从毫克级到公斤级乃至吨级的磷脂类和甾体类中间体和试剂。该公司将为广大中国用户提供：齐全的品种种类、各种不同的包装规格、高品质的磷脂产品、专业的技术支持、人性化的服务。
2. Avanti重点产品
磷脂产品种类：
1   Natural Lipids——天然脂质
2   Sphingolipids   ——鞘脂类
3   Phospholipids——磷脂
4   Sterols——固醇
5   Bioactive Lipids    生物活性脂质
6   Neutral Lipids  中性脂肪
7   Detergents  去污剂 等等
8   Fluorescent Lipids  荧光脂质
9   Cationic Lipids (Transfection)  阳离子脂质
10  Coenzyme A & Derivatives    辅酶A:及衍生物
11  Fatty Acid Modified Lipids  脂肪酸改性脂质
12  Headgroup Modified Lipids   头基改性脂质
13  Stable Isotopes & ESR Probes 同位素及ESR探头
14  Polymers & Polymerizable Lipids脂类聚合物
3. Avanti官网
www.avantilipids.com
4. Avanti重点产品清单

Avanti磷脂产品种类：
1   Natural Lipids——天然脂质
2   Sphingolipids   ——鞘脂类
3   Phospholipids——磷脂
4   Sterols——固醇
5   Bioactive Lipids    生物活性脂质
6   Neutral Lipids  中性脂肪
7   Detergents  去污剂 等等
8   Fluorescent Lipids  荧光脂质
9   Cationic Lipids (Transfection)  阳离子脂质
10  Coenzyme A & Derivatives    辅酶A:及衍生物
11  Fatty Acid Modified Lipids  脂肪酸改性脂质
12  Headgroup Modified Lipids   头基改性脂质
13  Stable Isotopes & ESR Probes 同位素及ESR探头
14  Polymers & Polymerizable Lipids脂类聚合物
及设备  Mini-Extruder,Packaging Container等。
Lyso PC 溶源性卵磷脂
Lyso PA 溶源性磷脂酸
Lyso PA Analogues 溶源性磷脂酸类似物
Lyso bio-PA溶源性双磷脂酸
Lyso PE, PG & PS 溶源性脑磷脂，磷脂酰甘油和磷脂酰丝氨酸
Alkyl PC 烷基卵磷脂
Diether & Diphytanoyl ether lipids 二醚与二植烷醚脂质
PAF 血小板活化因子
Acyl PAF Analog 酰化血小板活化因子类似物
Brominated phosphocholines 溴代胆碱磷酸
Alkyl phosphate derivatives 烷基磷酸盐衍生物
Plasmalogen 缩醛磷脂
Functionalized lipids 功能性脂类
Biotinylated lipids 生物素酰化脂质
Synthetic phospholipids 合成磷酸
Avanti磷脂产品试剂报价：
该类产品的的包装从10mg-1g不等的包装，其中存在三种状态，氯仿状，乙醇状和粉末状，所以报价也各不相同，最小包装的产品报价范围是300-2000元不等。最大包装的报价范围是2000-30000元不等。具体报价需咨询上海生物科技有限公司工作人员。
Avanti磷脂品质性能参数
Avanti磷脂的保存环境是零下-20°保存，其产品的保质期各不相同有的保质期是2年有的保质期是1年还有的保质期是6个月。产品的纯度均大于99%。
5 金畔生物代理Avanti品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq:  2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com

Abcam品牌代理商–上海金畔

1. Abcam品牌介绍
Abcam 位于英国的剑桥科学园，成立于1998年，专门生产和分销研究型抗体。我们的在线目录 (www.abcam.cn) 已有超过120,000 种抗体和试剂，并不断添加，供应予全球百多个国家。Abcam 于2005年11月在伦敦证券交易所上市，在美国、日本、香港、中国均设有分公司。
2. Abcam重点产品
生产和分销研究型抗体
3. Abcam官网
www.abcom.com
4. 金畔生物代理abcom品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq:  2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com;

DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献

上海金畔生物科技有限公司提供DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献
简单介绍
探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate，DSS)诱导的小鼠肠炎模型病变结肠组织的谷胱甘肽(GSH)变化及其与病变组织分泌的Th1/Th2型细胞因子IFN-g,IL-4及黏膜损伤的关系

DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献  的详细介绍
DSS诱导小鼠实验性肠炎建模参考文献
GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用
张  静, 韩  英, 纪  欣, 王志红, 李虹义, 郑  力
张静, 中国人民解放军总医院军医进修学院  北京市  100853
韩英, 纪欣, 王志红, 李虹义, 郑力, 北京军区总医院消化内科  北京市  100700
张静, 女, 1973-05-02生, 河北保定人, 汉族. 1997年承德医学院本科毕业, 解放军总医院军医进修学院2002级硕士研究生, 主治医师, 主要从事炎症性肠病的发病及免疫机制等方面的研究.
北京市自然科学基金资助项目, No. 7042064
通讯作者: 韩英, 100853, 北京市东城区南门仓5号, 北京军区总医院消化内科.
电话: 010-66721009
收稿日期: 2005-04-11    接受日期: 2005-04-27
Roles of Glutathione in dextran sodium sulphate-induced colitis in mice
Jing Zhang, Ying Han, Xin Ji, Zhi-Hong Wang, Hong-Yi Li, Li Zheng
Jing Zhang, Postgraduate Medical School, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Ying Han, Xin Ji, Zhi-Hong Wang, Hong-Yi Li, Li Zheng, Department of Gastroenterology, General Hospital of Beijing Military Command, Beijing 100700, China
Supported by the Natural Science Foundation of Beijing, China, No.7042064
Correspondence to: Dr. Ying Han, Department of Gastroenterology, General Hospital of Beijing Military Command, 5 Nanmencang, East District, Beijing 100700, China.
Received: 2005-04-11    Accepted: 2005-04-27
Abstract
AIM: To investigate the expression of glutathione (GSH) in dextran sodium sulphate(DSS)-induced colitic mucosa and its relationship with cytokine secretion as well as mucosal injury.
METHODS: BALB/c mice in DSS group (n = 10) were fed with 50 g/L DSS to induce experimental colitis and those in normal controls (n = 10) were fed with distilled water. All the mice were killed after 7 days. The pathological changes of the colonic tissues were examined while immunohi-stochemstry was performed with GSH1 antibody to determine the GSH expression. ELISA was used to detect the expression of IL-4 and IFN-g.
RESULTS: The manifestations of acute colitis such as weight decrease, diarrhea and bloody stool appeared in mice of DSS group. focal crypt lesionsPathologically, focal crypt distortion, granulocyte and macrophage invasion were observed. The level of GSH in DSS group was significantly lower than that in control group (20.6 vs 3.14±1.0, t = 3.95, P = 0.01), whereas the expression of IL-4 was marked higher (38.7±4.7 vs 28.7±6.7, t = 3.16, P = 0.009). The content of IFN-g was decreased in DSS group (P>0.05).
CONCLUSION: Low expression of GSH is related to the increase of IL-4, decrease of IFN-g and mucosal injury in DSS-induced colitis in mice.
Key Words: Glutathione; Dextran sodium sulphate; Colitis; Mice; IL-4; IFN-g; Mucosal injury
Zhang J, Han Y, Ji X, Wang ZH, Li HY, Zheng L. Roles of Glutathione in dextran sodium sulphate-induced colitis in mice. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi  2005;13(12):1400-1403
摘要
目的: 探讨硫酸葡聚糖钠(dextran sodium sulphate，DSS)诱导的小鼠肠炎模型病变结肠组织的谷胱甘肽(GSH)变化及其与病变组织分泌的Th1/Th2型细胞因子IFN-g,IL-4及黏膜损伤的关系.
方法: 实验组小鼠(n = 10)给予含50 g/L DSS的蒸馏水自由饮用7 d之后处死，分离出的病变结肠一部分评价其病理学改变并用GSH1抗体做免疫组化，另一部分结肠培养后检测其IL-4、IFN-g的表达.对照组小鼠(n = 10)给予蒸馏水自由饮用7 d之后处死.
结果: DSS诱导实验性肠炎小鼠口服50 g/L的DSS溶液7 d出现体重减轻、腹泻、血便等急性肠炎的表现.病理学切片HE染色发现小鼠病变结肠腺体结构紊乱，黏膜和黏膜下单核细胞和多核细胞浸润.DSS组病变肠段组织GSH表达较对照组明显减少(2±0.6 vs 3.14±1.0，t = 3.95, P = 0.01<0.05)，病变结肠分泌的IL-4明显升高(38.7±4.7 vs 28.7±6.7，t = 3.16, P = 0.009<0.01)， IFN-g轻度降低(P>0.05).
结论: DSS诱导的实验性肠炎小鼠病变结肠组织GSH的减少与病变结肠组织分泌的细胞因子IL-4增加、IFN-g下降以及黏膜损伤相关.
关键词: 谷胱甘肽; 硫酸葡聚糖钠; 肠炎; 小鼠; IL-4; IFN-g;黏膜损伤
张静, 韩英, 纪欣, 王志红, 李虹义, 郑力. GSH在DSS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用. 世界华人消化杂志  2005;13(12):1400-1403
http://www.wjgnet.com/1009-3079/13/1400.asp
0  引言
炎症性肠病炎(inflammatory bowel disease，IBD)是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病，包括了两种独立的疾病，溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn’s disease，CD).虽然IBD的发病机制尚不清楚，目前发现其病因学机制与免疫异常、遗传影响、以及环境因素有关.近年来的研究发现，反应性氧簇(reactive oxygen species，ROS)产生过量对IBD的发展起着重要的作用.胃肠道黏膜自身有一些抗氧化防御系统，可以通过中和连续生成的ROS抵消其损害的影响.在这些防御网络中，内生硫氢基团，主要是还原型谷胱甘肽(GSH)，在一些动物模型中对胃肠道黏膜细胞保护抵抗氧化应激起着重要的作用[1-2].以往对抗氧化剂作用的大量研究中，已经报道了在IBD患者和实验性肠炎中包括GSH在内的抗氧化剂水平的降低[3-4]，而对于DSS诱导的实验性肠炎病变组织GSH的变化及其与黏膜损伤及细胞因子分泌的关系尚不明确，本实验将对上述问题进行研究和分析.

1  材料和方法
1.1 材料 雄性BALB/c小鼠，5-6周龄，质量18-22 g;DSS(Sodium Dextran Sulfate 5000，Wako Pure Chemical Industries Ltd.大阪，日本和光纯药工业株式会社);HBSS(Hank’s balanced salt solution，Sigma公司);无酚红、无抗生素的RPMI 1640(HyClone，公司);complete medium RPMI 1640(Cambrex公司);LPS(脂多糖，Sigma公司);DTT(1，4-Dithiothretol，二硫基苏糖醇，Sigma公司);胎牛血清FBS(中国杭州江滨生物技术有限公司);小鼠IL-4、IFN-g检测试剂盒(Sigma公司);GSH1:山羊GSH抗体(Santa Cruz公司，sc-15087);山羊SP试剂盒(北京中杉生物试剂公司).
1.2 方法 取10只BALB/c小鼠，将DSS加入蒸馏水中配成50 g/L的DSS溶液，给小鼠自由饮用7 d，8 d处死.正常对照组小鼠10只给予蒸馏水自由饮用7 d，8 d处死.各组小鼠处死后，先将整段结肠取下，测量结肠长度，肉眼观察结肠的形态，充血、溃疡、糜烂程度和范围，计算质量减少率.取充血、糜烂最明显部位的肠段(环状、片状各1块，正常组取回盲部及近肛门部组织环状、片状各1块)于中性甲醛溶液小瓶送检病理.便血评分:便血评分将取病理后的肠段纵行切开，其血性内容物用0-3+标准评价:0:无出血，1+:结肠1/3出血，2+:结肠2/3出血，3+:整个结肠均有出血.肠道标本积分:炎症细胞的渗出评分标准:0分-黏膜固有层内有极少量炎症细胞，1分-黏膜固有层内有较多的炎症细胞或黏膜固有层内的炎症细胞增多，2分-炎症细胞扩散至黏膜下层，3分-全层均有炎症细胞渗出;组织损伤评分标准:0分-没有黏膜损坏，1分-不连续的淋巴上皮损坏，2分-表层黏膜糜烂，3分-广泛的黏膜破损并向肠壁深层结构扩展[5].
1.2.1 病变组织GSH的表达 应用山羊GSH1抗对病变组织切片进行免疫组化分析，并根据阳性强度及阳性率评分的半定量标准.阳性强度评分标准:0分:(-)，1分:(＋)，2分:(＋＋)，3分(＋＋＋).阳性率评分标准:0分:<10%，1分:10-25%，2分:26-50%，3分:>50%.总分为0-6分.
1.2.2 病变组织产生细胞因子的测定 将肠道病变组织标本置于含10 mmol/L DTT的HBSS中静置15 min，而后用RPMI1640液清洗肠段2次以除去DTT，在六孔培养板中加入含100 mL/L FBS 1 mL的RPMI1640共2 mL，置于CO2孵育箱内培养24 h，然后收集池内培养液，分装在3个eppindofe管中，-30℃冻存.应用小鼠IL-4，IFN-g检测试剂盒(ELISA法)测定IL-4，IFN-g.
统计学处理 应用STATA 7.0软件进行统计学处理，先用F检验，验证方差齐性，再进行t检验，P<0.05为差异有显著性.
2  结果
2.1 临床症状及病理学评价 BALB/c小鼠口服50 g/L的DSS溶液7 d成功诱导出急性肠炎，表现为体重减轻、腹泻、血便等.病理学切片HE染色发现小鼠左半结肠较右半结肠为重，结肠腺体结构紊乱，黏膜及黏膜下单核细胞和多核细胞浸润等.质量:DSS组小鼠体重下降而正常对照组体重增加(-0.7±0.8 g vs 2.4±0.9 g，t = -7.47，P = 0<0.001).血便:正常对照组小鼠结肠处死后结肠切开未发现血便，而DSS诱导组6只小鼠结肠发现血便(0.7±0.5 vs 0，t = 4.42，P = 0.003<0.001).结肠缩短:DSS诱导肠炎组小鼠与正常对照组小鼠比较，结肠有明显的充血，水肿，溃疡形成及长度缩短(9.2±0.6 vs 10.4±0.8，t = -3.72，P = 0.0 017 <0.01).病理评分:结肠病理切片HE染色发现，DSS诱导的实验性肠炎组小鼠的结肠局部腺体结构紊乱，黏膜及黏膜下中性粒细胞及单核细胞和多核细胞等炎性细胞浸润，黏膜局部糜烂，部分隐窝破坏，而对照组小鼠未发现上述变化(3.0±0.5 vs 0.4±0.7，t = -8.18，P = 0<0.001，图1).
2.2 小鼠结肠病变组织GSH表达 应用山羊GSH1抗对病变组织切片进行免疫组化分析，发现GSH主要表达在黏膜表面及腺体细胞的胞质内.通过半定量标准评分，发现DSS诱导实验性肠炎小鼠的病变肠段组织GSH表达明显低于对照组 (2±0.6 vs 3.14±1.0，t = 3.95，P = 0.01<0.05，图2).
2.3 小鼠病变结肠分泌的IFN-g及IL-4 DSS组病变肠段分泌的Th2细胞因子IL-4 显著高于对照组(38.7±4.7 vs 28.7±6.7，t = 3.16，P = 0.009<0.05);DSS组病变肠段分泌的Th1细胞因子IFN-g较对照组减少但差别无显著性(20.6±7.4 vs 23.2±5.6，t = -0.70，P = 0.50>0.05).由于DSS组IL-4显著升高，同时IFN-g下降，致IL-4/IFN-g升高，显著高于对照组(1.88，1.24).

图1  对照组和实验组小鼠结肠组织的病理变化(HE×200). A: 对照组; B: 实验组.
图2  对照组和实验组小鼠结肠组织GSH的表达(×100). A: 对照组; B: 实验组.

3  讨论
DSS诱导的BALB/c小鼠急性实验性肠炎模型表现为体重减轻，腹泻，血便等.病理学检查发现小鼠左半结肠病变较右半结肠为重，结肠黏膜腺体结构紊乱，单核细胞和多核细胞浸润，黏膜局部糜烂，部分隐窝破坏等[6-7].IBD患者的胃肠道炎症中渗透的大量炎症细胞包括巨噬细胞和中性粒细胞等通过产生反应性氧簇(reactive oxygen species，ROS)而将炎症肠道暴露于氧化应激中.而胃肠道黏膜自身有一些抗氧化防御系统，可以通过中和连续生成的ROS抵消其损害的影响.在这些防御网络中，内生硫氢基团，主要是还原型谷胱甘肽(GSH)起着重要的作用.GSH是一种包含一个巯基的非蛋白三肽，GSH大量存在于各种不同细胞中在多种生化过程中起着重要的作用.GSH构成细胞防御氧化损伤机制中的第一道防线，而且是普遍存在的细胞类型中的主要氧化还原缓冲剂.在其众多功能中，其含半胱氨酸的三肽可以减轻蛋白质的二硫化，减轻自由基和内毒素的毒性作用，并维持细胞内氧化还原的平衡[8].Sido et al[4]的研究发现与健康对照组比较IBD患者半胱氨酸浓度明显减少，其减低水平与疾病临床活动指数相关，去蛋白血浆中总的巯基成分均明显减少，术后3 mo恢复到正常水平.Zea-Iriarte et al[9]发现在TNS(三硝基苯硫酸，trinitrobenzene sulphonic acid)诱导的实验性肠炎中，GSH浓度及谷胱甘肽硫基转移酶，Cu，Zn超氧化物歧化酶均减低，但是谷胱甘肽过氧化物酶却增加.我们的实验研究发现 DSS组病变肠段组织GSH表达明显低于对照组 (2±0.6 vs 3.14±1.0，t = 3.95，P = 0.01<0.05)，与文献报告相似，说明GSH不足与IBD和实验性肠炎的炎症相关，削弱黏膜的抗氧化能力可能会促进肠道的氧化损伤.
Th1和Th2细胞因子反应类型对于小鼠炎症和感染的慢性化和侵袭性可产生影响，是慢性肠道炎症重要的决定因素.Th1/Th2型反应平衡是由分泌细胞因子的类型决定的.Th1型是以通过伴随抗原提呈细胞(APC)生成的IL-12而产生IFN-g为特征.Th2型则是以低IFN-g/高IL-4和低IFN-g/高IL-10为特征[10].本实验中DSS诱导的实验性肠炎小鼠病变肠段分泌的IL-4明显增加，IFN-g下降，致IL-4/IFN-g显著升高，说明DSS诱导的急性实验性肠炎是以Th2型免疫反应为主的炎性改变.Peterson et al[11]和Murata et al[12]曾报道鼠的抗原提呈细胞(APC)或腹腔定居的巨噬细胞中GSH的损耗可使IL-12的分泌减少并导致典型的Th1细胞因子形式向Th2反应模式转化.Peterson et al[11]的研究还显示应用GSH损耗或补充药物时巨噬细胞内GSH的水平可以影响Th1/Th2细胞因子的倾向.且将来源于GSH损耗小鼠的T细胞与未处理的BALB/C鼠的巨噬细胞一起培养可产生正常量的IFN-g，因此IFN-g产量减少是由于巨噬细胞而不是T细胞中GSH损耗造成的.另外Jeannin et al[13]在研究易于产生IL-4的培养细胞系统中发现在培养液中增加GSH的水平可使IL-4的产量以量效依赖的方式减低.这些研究结果充分表明巨噬细胞内的GSH水平对于调节在免疫反应中向Th1或Th2细胞因子反应的发展趋势具有重要的作用.
总之，本研究结果显示DSS诱导的急性实验性肠炎小鼠病变结肠的组织GSH的减少与病变结肠组织分泌的细胞因子IL-4增加、IFN-g减低及结肠黏膜损伤有相关性，但是其机理不明.GSH的表达有可能影响不同类型炎性细胞因子的分泌进而影响黏膜组织的损伤.同时提示肠道黏膜免疫异常在IBD发病机制中的作用不容忽视，特别是巨噬细胞中的GSH的变化是否与黏膜炎症损伤及Th1/Th2细胞因子分泌的相关性有待于探讨.

4    参考文献
1    Goldin E, Ardite E, Elizalde JI, Odriozola A, Panes J, Pique JM, Fernandez-Checa JC. Gastric mucosal damage
in experimental diabetes in rats: role of endogenous glutathione. Gastroenterology  1997;112:855-863
2    Takeuchi K, Okada M, Ueshima K, Ohuchi T, Okabe S. Endogenous sulfhydryls in healing gastric mucosal
injury induced by HCl in the rat. Digestion  1993;54:91-97
3    Holmes EW, Yong SL, Eiznhamer D, Keshavarzian A. Glutathione content of colonic mucosa: evidence for oxidative
damage in active ulcerative colitis. Dig Dis Sci  1998;43:1088-1095
4    Sido B, Hack V, Hochlehnert A, Lipps H, Herfarth C, Droge W. Impairment of intestinal glutathione synthesis in patients
with inflammatory bowel disease. Gut  1998;42:485-492
5    Loher F, Schmall K, Freytag P, Landauer N, Hallwachs R, Bauer C, Siegmund B, Rieder F, Lehr HA, Dauer M, Kapp
JF, Endres S, Eigler A. The specific type-4 phosphodiesterase inhibitor mesopram alleviates experimental colitis in mice.
J Pharmacol Exp Ther  2003;305:549-556
6    Konrad A, Mahler M, Flogerzi B, Kalousek MB, Lange J, Varga L, Seibold F. Amelioration of murine colitis by feeding
a solution of lysed Escherichia coli. Scand J Gastroenterol  2003;38:172-179
7    Villegas I, Alarcon de la Lastra C, Orjales A, La Casa C. A new flavonoid derivative, dosmalfate, attenuates
the development of dextran sulphate sodium-induced colitis in mice. Int Immunopharmacol  2003;3:1731-1741
8    Murata Y, Amao M, Yoneda J, Hamuro J. Intracellular thiol redox status of macrophages directs the Th1 skewing
in thioredoxin transgenic mice during aging. Mol Immunol  2002;38:747-757
9    Zea-Iriarte WL, Makiyama K, Goto S, Murase K, Urata Y, Sekine I, Hara K, Kondo T. Impairment of antioxidants in
colonic epithelial cells isolated from trinitrobenzene sulphonic acid-induced colitis rats. Protective effect of
rebamipide. Scand J Gastroenterol  1996;31:985-992
10    Romagnani P, Annunziato F, Piccinni MP, Maggi E, Romagnani S. Th1/Th2 cells, their associated molecules and role
in pathophysiology. Eur Cytokine Netw  2000;11:510-511
11    Peterson JD, Herzenberg LA, Vasquez K, Waltenbaugh C. Glutathione levels in antigen-presenting cells modulate
Th1 versus Th2 response patterns. Proc Natl Acad Sci USA  1998;95:3071-3076
12    Murata Y, Ohteki T, Koyasu S, Hamuro J. IFN-gamma and pro-inflammatory cytokine production by
antigen-presenting cells is dictated by intracellular thiol redox status regulated by oxygen tension. Eur J
Immunol  2002;32:2866-2873
13    Jeannin P, Delneste Y, Aubry JP, Lecoanet-Henchoz S, Gauchat JF, Life P, Bonnefoy JY. Thiols decrease human
IL-4 production and IL-4-induced immunoglobulin synthesis. Int Arch Allergy Immunol  1997;113:329-330
免责声明：此文献仅用来做实验参考。
上海金畔生物可以提供供大鼠、小鼠等的肠炎造模产品——硫酸葡聚糖5000（国内文献多使用），硫酸葡聚糖36000-50000（国际文献多使用），TNBS（灌肠实验，美国文献较常见）。其中硫酸葡聚糖造模时采用自由饮用的给药方式较常见，且操作简单，实验结果明显。
更多产品，更多优惠，请联系我们！
上海金畔生物科技有限公司
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
金畔博客：www.jinpanbio.cn
Email：sales@jinpanbio.com

APSC品牌代理商–上海金畔

1. APSC品牌介绍
APSC主要提供有机凝胶色谱标准品（Organic GPC/SEC Standards）和水性凝胶色谱标准品（Aqueous GPC/SEC Standards）两类产品。
GPC(Gel Permeation Chromatography),凝胶渗透色谱，又称为尺寸排阻色谱（Size Exclusion Chromatography,简称SEC），它是基于体积排阻的分离机理，通过具有分子筛性质的固定相，用来分离相对分子质量较小的物质，并且还可以分析分子体积不同、具有相同化学性质的高分子化合物。
GPC是一种特殊的液相色谱，所用仪器与高效液相色谱仪类似，GPC的分离是利用体积排除机理，装填的是多孔性凝胶或微粒，孔径大小与待分离的聚合物分子相似，体积大的高分子化合物不能进入凝胶孔，最先从凝胶粒间流出，淋出体积（时间）最小，高聚物依分子量从大到小依次淋出。这样，通过做已知分子量的高分子聚合物的标准曲线，就能分析同系未知待测高分子化合物了。
2. APSC重点产品
机凝胶色谱标准品（Organic GPC/SEC Standards）和水性凝胶色谱标准品（Aqueous GPC/SEC Standards）两类产品。
3. APSC官网
http://www.ampolymer.com/

4. 金畔生物代理APSC品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址： 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编： 201208
qq:  2743691513
固话总机：021-50837765
订货热线：15221999938
网 址： www.jinpanbio.com
Email：sales@jinpanbio.com