Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光

	货号	16315	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	502	Em (nm)	535
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。它可以对多种生物分子造成损害，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进针对入侵病原体的宿主防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是涉及生理和病理过程的一系列基本生物氧化剂。由于其半衰期极短且稳态浓度低，因此检测和了解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。 AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green专为满足这种需求而开发。它提供了一种敏感的工具来监测活细胞中的ONOO水平。AAT Bioquest 的 DAX-J2™ PON Green 与细胞间 ONOO- 发生特异性反应，生成亮绿色荧光产物。它可用于荧光成像、流式细胞术和基于荧光酶标仪的检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（500X）：
向DAX-J2 PON Green小瓶（组分A）中添加20 µL DMSO（组分C）。 注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green储备溶液足以装满1个板。

2.工作溶液

将10μL的500X DMSO重构的DAX-J2 过氧亚硝酸盐传感器储备溶液添加到500μL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：工作解决方案不稳定； 使用前根据需要进行准备。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.在90 µL（96孔板）或22.5 µL（384孔板）中添加10 µL /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的DAX-J2 PON Green工作溶液。细胞板中每孔的细胞培养。注意：染色前无需清洗细胞。建议用完全培养基染色细胞。

2.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和22.5 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1。

3.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm（截止波长= 515 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有FITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

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Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光

	货号	16316	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	502	Em (nm)	535
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。 它可以破坏各种生物分子，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，最终导致细胞死亡。 由于其极短的半衰期和低稳态浓度，检测和量化溶液中的过氧亚硝酸盐一直是一项挑战。 为了满足这一需求，AAT Bioquest的Amplite 荧光过氧亚硝酸盐定量试剂盒提供了一种灵敏的工具来测量溶液中的ONOO-。 DAX-J2 PON Green 99与ONOO-反应生成亮绿色荧光产品。 它特异性地与ONOO-反应，对其他活性氧（ROS）和活性氮物质（RNS）具有高选择性。 该试剂盒可与荧光酶标仪和光谱仪配合使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过亚硝酸盐定量检测试剂盒 绿色荧光 。 

产品说明书

样品实验方案 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON Green 99储备溶液（500X）：
在DAX-J2 PON Green 99（组分A）的小瓶中加入20 µL DMSO（组分C），制成500X储备溶液。注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green 99储备溶液足以容纳1个板,远离光线。

1.2 过氧亚硝酸盐（ONOO）储备溶液（未提供）：
根据文献报道合成了过氧亚硝酸盐储备溶液。简而言之，用盐酸（0.6M）酸化亚硝酸钠（0.6M）和过氧化氢（0.7M）的混合物，并在1-2秒内加入氢氧化钠（1.5M）以使溶液呈碱性。使溶液通过短的二氧化锰柱除去过量的过氧化氢。过亚硝酸盐溶液在0.1 M NaOH中的消光系数在302 nm下为1670 M-1cm-1。 ONOO的储备溶液不稳定。我们强烈建议使其新鲜使用。

2.标准溶液

过氧亚硝酸盐标准
在测定缓冲液（组分B）中稀释过氧亚硝酸盐（ONOO）储备液，以得到20 µM ONOO 标准溶液，然后进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的ONOO 标准溶液（O7-O1）。

3.工作溶液

将20μL的500X DAX-J2 PON Green 99储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：此分析混合物足以用于一个96孔板，避光。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中ONOO标准品和测试样品的布局。 O = ONOO标准（O1-O7，0.313至20 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备ONOO标准品（O），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL工作溶液添加到ONOO标准，空白对照和测试样品的每个孔中，以使ONOO测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应5至10分钟。

4.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 490/530 nm（在515 nm处截止）的荧光增加。

参考文献

Branched-chain amino acids promote endothelial dysfunction through increased reactive oxygen species generation and inflammation
Authors: Olha Zhenyukh, Maria González-Amor, Raul R Rodrigues-Diez, Vanesa Esteban, Marta Ruiz-Ortega, Mercedes Salaices, Sebastian Mas, Ana M Briones, Jesus Egido
Journal: Journal of Cellular and Molecular Medicine (2018)

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪

	货号	16317	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	502	Em (nm)	535
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。它可以破坏各种生物分子，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进针对入侵病原体的宿主防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是涉及广泛的生理和病理过程的必需生物氧化剂。由于其半衰期极短且稳态浓度低，因此检测和了解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。为了解决这一未满足的需求，AAT Bioquest的Cell Meter 荧光细胞内过氧亚硝酸盐（ONOO-）检测试剂盒提供了一种监测活细胞中ONOO水平的灵敏工具。 AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green是一种优秀的荧光探针，可与细胞间ONOO’发生特异反应，生成亮绿色荧光产品。该试剂盒针对流式细胞仪进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪 。 

产品说明书

样品实验方案 

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物（刺激ONOO′）和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（400X）：
将25 µL DMSO（组分C）添加到DAX-J2 PON Green（组分A）小瓶中，并充分混合。 注意：1 µL的复配DAX-J2 PON Green储备液足以容纳0.4 mL的细胞。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。将细胞悬浮于1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1（A）。

2.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。有关详细信息，请参见图1（B）。

3.使用流式细胞仪监测FITC通道（Ex / Em = 490/530 nm）的荧光强度。

参考文献

Concept and connotation of oxidative stress in preeclampsia
Authors: Hayder M Al-Kuraishy, Ali I Al-Gareeb, Thabat J Al-Maiahy
Journal: Journal of Laboratory Physicians (2018): 276

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

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