Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测

	货号	16350	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	552	Em (nm)	575
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样本实验方案

概述

在生长培养基中制备细胞

用测试化合物孵育细胞和Nitrixyte™橙色工作溶液

添加测定缓冲液II

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中以30,000至80,000个细胞/孔/90μL对96孔板进行平板培养过夜，或对于384孔板以8,00至20,000个细胞/孔/20μL进行平板培养。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，将细胞沉淀悬浮于125,000-250,000细胞/孔/90μL的培养基中，96孔poly-D赖氨酸平板或30,000-60,000细胞/孔 /20μL，用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

2.准备工作解决方案：

2.1使用前将所有试剂盒组分置于室温下。

2.2为一个细胞板制备Nitrixyte™橙色工作溶液：将20μLNitrixyte™橙色储备溶液（组分A）加入10 mL分析缓冲液I（组分B）中，并充分混合。工作溶液在室温下稳定至少2小时。

注意：20μL的Nitrixyte™Orange原液足以用于一个平板。 在<-20℃下等分并储存未使用的Nitrixyte™Orange原液。 保护它免受光照，避免反复冻融循环。

3.运行NO测定：

3.1为刺激内源性NO，在细胞培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。 然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。 在抽吸后加入90μL/孔（96孔板）和20μL/孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。 或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

3.2在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Nitrixyte™Orange工作溶液（来自步骤2.2）。将细胞与测试化合物和Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下共孵育一段所需的时间，避光。

注意1：不要去除测试化合物。

注意2：对于NONOate阳性对照处理：将细胞与Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下孵育30分钟。除去工作溶液，将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。详细信息请参见说明书的图1。

注意3：我们使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte™Orange，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）在37℃的细胞培养基中孵育16小时。

3.3在每口井中取出溶液。添加测定缓冲液II（组分C）100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

注意：在添加Assay Buffer II之前，请勿清洗细胞。

3.4使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪观察荧光增加，或者使用具有TRITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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	货号	16351	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	552	Em (nm)	575
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 µL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Ni​​trixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.添加1 µL 500X Nitrixyte 红色
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间
4.使用FL4通道的流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照治疗储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照治疗原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的最佳细胞密度。

2.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte Red（组分A）。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Red孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37℃的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与Nitrixyte Red工作溶液，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.降低已经用Ni​​trixyte Red预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测FL4通道（Ex / Em = 630/660 nm）处的荧光强度。

参考文献

MAGI1 Mediates eNOS Activation and NO Production in Endothelial Cells in Response to Fluid Shear Stress
Authors: Kedar Ghimire, Jelena Zaric, Begona Alday-Parejo, Jochen Seebach, Mélanie Bousquenaud, Jimmy Stalin, Grégory Bieler, Hans-Joachim Schnittler, Curzio Rüegg
Journal: Cells (2019): 388

Functions of transcription factors NF-$kappa$B and Nrf2 in the inhibition of LPS-stimulated cytokine release by the resin monomer HEMA
Authors: Helmut Schweikl, Marialucia Gallorini, Gerd Pöschl, Vera Urmann, Christine Petzel, Carola Bolay, Karl-Anton Hiller, Amelia Cataldi, Wolfgang Buchalla
Journal: Dental Materials (2018)

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
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	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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产品说明书

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液I（组分B）中，并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

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样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO，请在细胞培养基或所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和20 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间，并避光。注意：请勿去除测试化合物。注意：对于NONOate阳性对照治疗：将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液，并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息，请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。有关详细信息，请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II（组分C），对于96孔板是100 µL /孔，对于384孔板是25 µL /孔。注意：在添加测定缓冲液II之前，请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于流式细胞仪近红外检测

	货号	16360	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	4584
	Ex (nm)	650	Em (nm)	680
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

产品说明书

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间
4.使用APC通道通过流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照治疗储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照治疗原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的最佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Nitrixyte NIR（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中将Raw 264.7细胞与Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.旋转已用Nitrixyte NIR预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的荧光强度。

参考文献

The Selective Acetamidine-Based iNOS Inhibitor CM544 Reduces Glioma Cell Proliferation by Enhancing PARP-1 Cleavage In Vitro
Authors: Marialucia Gallorini, Cristina Maccallini, Alessandra Ammazzalorso, Pasquale Amoia, Barbara De Filippis, Marialuigia Fantacuzzi, Letizia Giampietro, Amelia Cataldi, Rosa Amoroso
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2019): 495

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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