钙紫蓝素450 CytoCalcein 405nm激发

	货号	22012	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	2604
	Ex (nm)	406	Em (nm)	445
	分子量	~600	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：22012

产品名称：钙紫蓝素450 CytoCalcein 405nm激发 

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~600

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：408

发射波长(nm)：450

产品介绍

钙紫蓝素450 CytoCalcein 405nm激发 是美国AAT Bioquest生产的细胞活力测定试剂，CytoCalcein 紫罗兰450是开发的一种活细胞标记染料，其标记方式与Calcein AM相同。它的最大激发光在405nm处，这与流式细胞仪中紫罗兰激光光谱十分吻合。它也可以被带有激发光源荧光显微镜的激发光激发。进入细胞的CytoCalcein Violet 450的荧光微弱，通过水解作用，形成发出强烈荧光的染料，其激发/ 发射光最大波长在405 nm/450 nm处。这中特殊的光谱是从代表性荧光素FACS中分离出来的，它为多重荧光实验提供了更多的染料选择。与钙黄绿素蓝Calcein blue相比，CytoCalcein 紫罗兰450荧光更加明亮，并且在405 nm激发线下可以被更好的激发。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙紫蓝素450 CytoCalcein 405nm激发 。 

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参考文献

iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪胺的优异替代品*

	货号	45020	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Slides	价格	3924
	Ex (nm)	491	Em (nm)	516
	分子量	1037.99	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 488 Styramide是Alexa Fluor 488酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 488 Styramide。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

 

相关产品

名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品*	491	516	75000	0.9
iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的优异替代品*	557	570	100000	0.64
iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品*	568	587	100000	0.57

线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的卓越代替品

	货号	22204	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5×100 uL	价格	1272
	Ex (nm)	508	Em (nm)	524
	分子量	583.34	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

线粒体膜电位荧光探针JC-10是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的荧光探针是JC-1的完美替代品。JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10已被开发为JC-1的替代物。与JC-1相比，我们的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）转变为570nm（即J-聚集体形式的发射）。当在490nm激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，JC-10还可用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用JC-10的方案。在一些细胞系中，JC-10具有优于JC-1的性能。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

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产品说明书

JC-10的分析方案

概述

准备含有测试化合物的细胞

添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

在室温或37 ℃孵育1小时

在Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

操作步骤

1.准备JC-10工作溶液：

1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶应储存在<-20℃。注意：避免反复冻融循环，并避光.

1.2准备1X JC-10工作溶液：在实验当天，解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7-8，含0.02％Pluronic [表情] F-127）中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均匀。注意：对于某些细胞系，pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。

2.用荧光酶标仪进行JC-10检测：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-10加载板在37 oC，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.4监测Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的荧光变化，进行比率分析。

可选：从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-10检测：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C，5％CO2培养箱中孵育10至30分钟，避光。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

3.5使用荧光显微镜（使用FITC和TRITC过滤器）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm处的荧光变化。可选：移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光显微镜下分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

参考文献

JC-10™ has been used to study many biologically significant processes across several key disciplines. To list a few, JC-10™ has been used to investigate topics such as mitochondrial membrane potential, cytotoxicity, cell viability, oxidative stress, cancer metastasis, apoptosis, signal transduction, mitochondrial fission and induced pluripotent stem cells (iPSCs). 

Below, you may find a small sampling of specific JC-10™ applications. To inquire about a potential application of JC-10™, or to consult with our fluorescent dye specialists, please contact us at support@aatbio.com or 1-800-990-8053.

High-content assays for hepatotoxicity using induced pluripotent stem cell–derived cells.
Researchers use JC-10™ to monitor mitochondrial depolarization as an indication of hepatotoxicity and oxidative stress in induced pluripotent stem cell-derived cells, with the ultimate goal of designing a reliable, high-content and imaging-based in vitro toxicity assay. 

High-Content High-Throughput Assays for Characterizing the Viability and Morphology of Human iPSC-Derived Neuronal Cultures
JC-10™ was used to study neurons derived from induced pluripotent stem-cells. Since JC-10™ will accumulate in the mitochondria of viable cells, it was used to determine cell viability in a high-throughput assay context.

Anticancer Activity of New Synthetic α-Methylene-δ-Lactones on Two Breast Cancer Cell Lines
Researchers chose JC-10™ to investigate mitochondrial membrane potential and membrane integrity in cells treated with natural products, such as α-Methylene-δ-Lactones, with the goal of developing new treatments for breast cancer.

Tetrandrine protects mouse retinal ganglion cells from ischemic injury.
JC-10™ was used in flow cytometry to study mitochondrial membrane potential (ΔΨm) in primary cultured retinal ganglion cells, as an extension of the field of drug discovery into prevention of ischemic injury. 

Midazolam induces cellular apoptosis in human cancer cells and inhibits tumor growth in xenograft mice
In a study of human cancer cells, JC-10™ was employed to track cellular apoptosis as a function of mitochondrial membrane potential, and consequently, mitochondrial activity. Researchers were interested in the possible anesthetic properties of midazolam for anticancer drug delivery.

Mitochondrial proteomics with siRNA knockdown to reveal ACAT1 and MDH2 in the development of doxorubicin-resistant uterine cancer
JC-10™ was used by researchers for the purposes of drug discovery. In particular, researchers were interested in finding new treatments for doxorubicin-resistant uterine cancer, using JC-10™ to monitor mitochondrial membrane potential and validate cell viability results. 

Cold exposure lowers energy expenditure at the cellular level
Researchers used JC-10™ to investigate the relationship between temperature and cellular activity. In particular, researchers wanted to explore if cold temperature acts as a stressor on mitochondrial membrane potential, with regards to the oxidative phosphorylation process which generates ATP.

Susceptibility of gametes and embryos of the eastern oyster, Crassostrea virginica, to Karenia brevis and its toxins
JC-10™ was used in the study of sperm viability, fertilization successs and embryonic survival of Crassostrea virginica. Specifically, JC-10™ was used to quantify mitochondrial membrane potential in sperm cells and to determine possible toxicity effects of algal blooms.

Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma
JC-10™ was used by researchers to study cell cycle and apoptosis in human multiple myeloma. JC-10™ functioned as a probe for the detection of mitochondrial membrane potential depolarization, which was crucial to the study of caspase activated apoptosis.

Activation of the mitochondrial apoptotic pathway produces reactive oxygen species and oxidative damage in hepatocytes that contribute to liver tumorigenesis
Researchers were interested in the pathways involved with liver tumorigenesis. To that end, they used JC-10™ to study activation of apoptotic pathways related to changes in mitochondrial membrane potential, with the ultimate goal of discovering if antioxidant therapy might help suppress liver carinogenesis.

iFluor 546 Styramide * Alexa Fluor 546酪胺的优异替代品*

	货号	45025	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Slides	价格	3924
	Ex (nm)	541	Em (nm)	557
	分子量	1326.69	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 546 Styramide是Alexa Fluor 546酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 546 Styramide。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

 

相关产品

名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品*	491	516	75000	0.9
iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的优异替代品*	557	570	100000	0.64
iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品*	568	587	100000	0.57

活细胞染色 CytoTell 绿色

	货号	22240	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	1272
	Ex (nm)	492	Em (nm)	514
	分子量	~500	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

活细胞染色 CytoTell 绿色是美国AAT Bioquest生产的活细胞染色探针，流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群体的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是广泛用于活细胞分析的优选细胞增殖指示剂。然而，与使用CFSE监测细胞增殖相关的几个严重问题。 1），CFSE对细胞有很强的毒性。 CFSE与所有氨基无差别地反应，因此改变了许多关键的细胞内蛋白质功能（例如细胞膜GPCR）; 2），CFSE反应慢，不方便使用。第二代细胞的CFSE荧光强度比第一代减少10倍以上。你将不得不等待另一代人开始细胞增殖分析。 3），由于CFSE与培养基成分发生反应，您必须使用流式细胞仪去除细胞分析培养基。 CytoTell Green已开发用于消除这些CFSE限制。根据我们客户对CytoTell Green的反馈，CytoTell UltraGreen是我们最新的改进。它有明显的优势。 1），CytoTell UltraGreen很好地保留在细胞中; 2），CytoTell UltraGreen的反应速度更快，使用起来比CFSE更方便。第一代和第二代之间的荧光强度差距显着减小。随着细胞分裂，CytoTell UltraGreen在子细胞之间平均分布，可以测量为染料荧光强度的连续减半; 3）， CytoTell UltraGreen比CFSE更敏感。最多可以显现9代; 4）， CytoTell UltraGreen比CFSE更稳定。 CytoTell UltraGreen原液可以在室温下储存几天。 CytoTell UltraGreen也可以用于标记细胞的长期追踪。使用双参数图进行分析可以为每一代提供更好的分辨率，特别是在未分裂的细胞和第一代细胞之间。使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液，用CytoTell UltraGreen标记的细胞可以被固定和透化以用于细胞内靶标的分析。 CytoTell UltraGreen具有519 nm的峰值激发，并且可以被蓝色（488 nm）激光线激发，从而与FITC滤光片组兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的活细胞染色 CytoTell 绿色。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37 ^o C 下将染料与细胞一起孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

CytoTell 染料储备液（500X）：
将500 µL DMSO加入到染料粉瓶中，通过涡旋使其充分混合，得到储备液（500X）。注意：储备溶液应及时使用；应将所有剩余的溶液等分并在<-20 ^o C下冷冻。避免重复冻融循环，并避光。

2.工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：
在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的pH 7缓冲液中以1至500稀释500X DMSO储备溶液（例如1到500的DMX储备溶液稀释到500 µL缓冲液）。涡旋混合均匀。注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定染料工作溶液的最终浓度。建议以至少十倍以上的浓度进行测试。例如，CytoTell Red在某些细胞类型中使用的量可能要比建议的浓度少得多。

样品示例及操作

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ⁵个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。可选：可以将500X DMSO储备溶液直接添加到细胞中而无需去除培养基（例如，将500 µL DMSO储备溶液添加到500 µL细胞中）

4.在室温或37°C下，将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜监测在Ex / Em（参见表1）下的荧光变化。

参考文献

Cooperation of innate immune cells during Hepatitis C virus infection
Authors: Volker Klöss
Journal: (2017)

CXCL12–CXCR4 Axis Is Required for Contact-Mediated Human B Lymphoid and Plasmacytoid Dendritic Cell Differentiation but Not T Lymphoid Generation
Authors: Hirohito Minami, Keiki Nagaharu, Yoshiki Nakamori, Kohshi Ohishi, Naoshi Shimojo, Yuki Kageyama, Takeshi Matsumoto, Yuka Sugimoto, Isao Tawara, Masahiro Masuya
Journal: The Journal of Immunology (2017): ji1700054

Interaction and Mutual Activation of Different Innate Immune Cells Is Necessary to Kill and Clear Hepatitis C Virus-Infected Cells
Authors: Volker Klöss, Oliver Grünvogel, Guido Wabnitz, Tatjana Eigenbrod, Stefanie Ehrhardt, Felix Lasitschka, Volker Lohmann, Alexander H Dalpke
Journal: Frontiers in Immunology (2017): 1238

Onionin A inhibits ovarian cancer progression by suppressing cancer cell proliferation and the protumour function of macrophages
Authors: Junko Tsuboki, Yukio Fujiwara, Hasita Horlad, Daisuke Shiraishi, Toshihiro Nohara, Shingo Tayama, Takeshi Motohara, Yoichi Saito, Tsuyoshi Ikeda, Kiyomi Takaishi
Journal: Scientific Reports (2016)

Multiplexing analysis of cell proliferation and cellular functions using a new multicolor panel of fluorescent cell proliferation dyes (P1290)
Authors: Jinfang Liao, Qin Zhao, Yibo Wu, Zhenjun Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2013): 119–4

相关产品

iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪胺的优异替代品*

	货号	45027	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Slides	价格	3924
	Ex (nm)	557	Em (nm)	570
	分子量	1023.15	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 555 Styramide是Alexa Fluor 555酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 555 Styramide。

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

 

相关产品

名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品*	491	516	75000	0.9
iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的优异替代品*	557	570	100000	0.64
iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品*	568	587	100000	0.57

活细胞染色 CytoTell 绿色

	货号	22241	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	2×500 Tests	价格	1944
	Ex (nm)	492	Em (nm)	514
	分子量	~500	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

活细胞染色 CytoTell 绿色是美国AAT Bioquest生产的活细胞染色探针，流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群体的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是广泛用于活细胞分析的优选细胞增殖指示剂。然而，与使用CFSE监测细胞增殖相关的几个严重问题。 1），CFSE对细胞有很强的毒性。 CFSE与所有氨基无差别地反应，因此改变了许多关键的细胞内蛋白质功能（例如细胞膜GPCR）; 2），CFSE反应慢，不方便使用。第二代细胞的CFSE荧光强度比第一代减少10倍以上。你将不得不等待另一代人开始细胞增殖分析。 3），由于CFSE与培养基成分发生反应，您必须使用流式细胞仪去除细胞分析培养基。 CytoTell Green已开发用于消除这些CFSE限制。根据我们客户对CytoTell Green的反馈，CytoTell UltraGreen是我们最新的改进。它有明显的优势。 1），CytoTell UltraGreen很好地保留在细胞中; 2），CytoTell UltraGreen的反应速度更快，使用起来比CFSE更方便。第一代和第二代之间的荧光强度差距显着减小。随着细胞分裂，CytoTell UltraGreen在子细胞之间平均分布，可以测量为染料荧光强度的连续减半; 3）， CytoTell UltraGreen比CFSE更敏感。最多可以显现9代; 4）， CytoTell UltraGreen比CFSE更稳定。 CytoTell UltraGreen原液可以在室温下储存几天。 CytoTell UltraGreen也可以用于标记细胞的长期追踪。使用双参数图进行分析可以为每一代提供更好的分辨率，特别是在未分裂的细胞和第一代细胞之间。使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液，用CytoTell UltraGreen标记的细胞可以被固定和透化以用于细胞内靶标的分析。 CytoTell UltraGreen具有519 nm的峰值激发，并且可以被蓝色（488 nm）激光线激发，从而与FITC滤光片组兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的活细胞染色 CytoTell 绿色。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37^oC下将染料与细胞一起孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

CytoTell 染料储备液（500X）：
将500 µL DMSO加入到染料粉瓶中，通过涡旋使其充分混合，得到储备液（500X）。注意：储备溶液应及时使用；应将所有剩余的溶液等分并在<-20 ^o C下冷冻。避免重复冻融循环，并避光。

2.工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：
在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的pH 7缓冲液中以1至500稀释500X DMSO储备溶液（例如1到500的DMX储备溶液稀释到500 µL缓冲液）。涡旋混合均匀。注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定染料工作溶液的最终浓度。建议以至少十倍以上的浓度进行测试。例如，CytoTell Red在某些细胞类型中使用的量可能要比建议的浓度少得多。

样品示例及操作

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ^5个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。可选：可以将500X DMSO储备溶液直接添加到细胞中而无需去除培养基（例如，将500 µL DMSO储备溶液添加到500 µL细胞中）

4.在室温或37°C下，将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜监测在Ex / Em（参见表1）下的荧光变化。

参考文献

Cooperation of innate immune cells during Hepatitis C virus infection
Authors: Volker Klöss
Journal: (2017)

CXCL12–CXCR4 Axis Is Required for Contact-Mediated Human B Lymphoid and Plasmacytoid Dendritic Cell Differentiation but Not T Lymphoid Generation
Authors: Hirohito Minami, Keiki Nagaharu, Yoshiki Nakamori, Kohshi Ohishi, Naoshi Shimojo, Yuki Kageyama, Takeshi Matsumoto, Yuka Sugimoto, Isao Tawara, Masahiro Masuya
Journal: The Journal of Immunology (2017): ji1700054

Interaction and Mutual Activation of Different Innate Immune Cells Is Necessary to Kill and Clear Hepatitis C Virus-Infected Cells
Authors: Volker Klöss, Oliver Grünvogel, Guido Wabnitz, Tatjana Eigenbrod, Stefanie Ehrhardt, Felix Lasitschka, Volker Lohmann, Alexander H Dalpke
Journal: Frontiers in Immunology (2017): 1238

Onionin A inhibits ovarian cancer progression by suppressing cancer cell proliferation and the protumour function of macrophages
Authors: Junko Tsuboki, Yukio Fujiwara, Hasita Horlad, Daisuke Shiraishi, Toshihiro Nohara, Shingo Tayama, Takeshi Motohara, Yoichi Saito, Tsuyoshi Ikeda, Kiyomi Takaishi
Journal: Scientific Reports (2016)

Multiplexing analysis of cell proliferation and cellular functions using a new multicolor panel of fluorescent cell proliferation dyes (P1290)
Authors: Jinfang Liao, Qin Zhao, Yibo Wu, Zhenjun Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2013): 119–4

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iFluor 647 Styramide * Alexa Fluor 647酪胺的优异替代品*

	货号	45045	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Slides	价格	3924
	Ex (nm)	656	Em (nm)	670
	分子量	1231.63	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 647 Styramide是Alexa Fluor 647酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 647 Styramide。

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

 

相关产品

名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
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iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品*	568	587	100000	0.57

活细胞染色 CytoTell 绿色

	货号	22254	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	2×500 Tests	价格	1944
	Ex (nm)	510	Em (nm)	525
	分子量	419.24	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

活细胞染色 CytoTell 绿色是美国AAT Bioquest生产的活细胞染色探针，流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群体的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是广泛用于活细胞分析的优选细胞增殖指示剂。然而，与使用CFSE监测细胞增殖相关的几个严重问题。 1），CFSE对细胞有很强的毒性。 CFSE与所有氨基无差别地反应，因此改变了许多关键的细胞内蛋白质功能（例如细胞膜GPCR）; 2），CFSE反应慢，不方便使用。第二代细胞的CFSE荧光强度比第一代减少10倍以上。你将不得不等待另一代人开始细胞增殖分析。 3），由于CFSE与培养基成分发生反应，您必须使用流式细胞仪去除细胞分析培养基。 CytoTell Green已开发用于消除这些CFSE限制。根据我们客户对CytoTell Green的反馈，CytoTell UltraGreen是我们最新的改进。它有明显的优势。 1），CytoTell UltraGreen很好地保留在细胞中; 2），CytoTell UltraGreen的反应速度更快，使用起来比CFSE更方便。第一代和第二代之间的荧光强度差距显着减小。随着细胞分裂，CytoTell UltraGreen在子细胞之间平均分布，可以测量为染料荧光强度的连续减半; 3）， CytoTell UltraGreen比CFSE更敏感。最多可以显现9代; 4）， CytoTell UltraGreen比CFSE更稳定。 CytoTell UltraGreen原液可以在室温下储存几天。 CytoTell UltraGreen也可以用于标记细胞的长期追踪。使用双参数图进行分析可以为每一代提供更好的分辨率，特别是在未分裂的细胞和第一代细胞之间。使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液，用CytoTell UltraGreen标记的细胞可以被固定和透化以用于细胞内靶标的分析。 CytoTell UltraGreen具有519 nm的峰值激发，并且可以被蓝色（488 nm）激光线激发，从而与FITC滤光片组兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的活细胞染色 CytoTell 绿色。 

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样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37 ^o C 下将染料与细胞一起孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的过滤器进行分析

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

CytoTell 染料储备液（500X）：
将500 µL DMSO加入到染料粉瓶中，通过涡旋使其充分混合，得到储备液（500X）。注意：储备溶液应及时使用；应将所有剩余的溶液等分并在<-20 ^o C下冷冻。避免重复冻融循环，并避光。

2.工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：
在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的pH 7缓冲液中以1至500稀释500X DMSO储备溶液（例如1到500的DMX储备溶液稀释到500 µL缓冲液）。涡旋混合均匀。注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定染料工作溶液的最终浓度。建议以至少十倍以上的浓度进行测试。例如，CytoTell Red在某些细胞类型中使用的量可能要比建议的浓度少得多。

样品示例及操作

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离心细胞以获得每管1-5×10 ^5个细胞。

3.在500 µL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。可选：可以将500X DMSO储备溶液直接添加到细胞中而无需去除培养基（例如，将500 µL DMSO储备溶液添加到500 µL细胞中）

4.在室温或37°C下，将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 µL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜监测在Ex / Em（参见表1）下的荧光变化。

参考文献

Effector T Cell Resistance to Suppression and STAT3 Signaling during the Development of Human Type 1 Diabetes
Authors: Emmi-Leena Ihantola, Tyyne Viisanen, Ahmad M Gazali, Kirsti Näntö-Salonen, Auni Juutilainen, Leena Moilanen, Reeta Rintamäki, Jussi Pihlajamäki, Riitta Veijola, Jorma Toppari
Journal: The Journal of Immunology (2018): ji1701199

Nanocomposite injectable gels capable of self-replenishing regenerative extracellular microenvironments for in vivo tissue engineering
Authors: Koji Nagahama, Naho Oyama, Kimika Ono, Atsushi Hotta, Keiko Kawauchi, Takahito Nishikata
Journal: Biomaterials Science (2018)

Cooperation of innate immune cells during Hepatitis C virus infection
Authors: Volker Klöss
Journal: (2017)

CXCL12–CXCR4 Axis Is Required for Contact-Mediated Human B Lymphoid and Plasmacytoid Dendritic Cell Differentiation but Not T Lymphoid Generation
Authors: Hirohito Minami, Keiki Nagaharu, Yoshiki Nakamori, Kohshi Ohishi, Naoshi Shimojo, Yuki Kageyama, Takeshi Matsumoto, Yuka Sugimoto, Isao Tawara, Masahiro Masuya
Journal: The Journal of Immunology (2017): ji1700054

Interaction and Mutual Activation of Different Innate Immune Cells Is Necessary to Kill and Clear Hepatitis C Virus-Infected Cells
Authors: Volker Klöss, Oliver Grünvogel, Guido Wabnitz, Tatjana Eigenbrod, Stefanie Ehrhardt, Felix Lasitschka, Volker Lohmann, Alexander H Dalpke
Journal: Frontiers in Immunology (2017): 1238

Onionin A inhibits ovarian cancer progression by suppressing cancer cell proliferation and the protumour function of macrophages
Authors: Junko Tsuboki, Yukio Fujiwara, Hasita Horlad, Daisuke Shiraishi, Toshihiro Nohara, Shingo Tayama, Takeshi Motohara, Yoichi Saito, Tsuyoshi Ikeda, Kiyomi Takaishi
Journal: Scientific Reports (2016)

Multiplexing analysis of cell proliferation and cellular functions using a new multicolor panel of fluorescent cell proliferation dyes (P1290)
Authors: Jinfang Liao, Qin Zhao, Yibo Wu, Zhenjun Diwu
Journal: The Journal of Immunology (2013): 119–4

JSRM Code: 013020300010 Full Text PDF
Authors: A Bertolo, D Pavlicek, A Gemperli, M Baur, T Pötzel, J Stoyanov
Journal: Unknown

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iFluor 680 Styramide * Alexa Fluor 680酪胺的优异替代品*

	货号	45050	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Slides	价格	3924
	Ex (nm)	684	Em (nm)	701
	分子量	1151.28	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。iFluor 680 Styramide是Alexa Fluor 680酪酰胺或其他光谱相似的荧光酪酰胺缀合物或TSA试剂的优良替代品。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 680 Styramide。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号	产品名称	Ex/Em(nm)
17548	核蓝 DCS1	350/461
17550	核绿 DCS1	503/526
17551	核橙 DCS1	528/576
17552	核红 DCS1	642/660

 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

 

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名称	激发（nm）	发射（nm）	消光系数（cm -1 M -1）	量子产率
iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品*	491	516	75000	0.9
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