iFluor Ultra 750 琥珀酰亚胺酯

	货号	71682	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg	价格	11628
	Ex (nm)	749	Em (nm)	773
	分子量	1426.78	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

荧光染料缀合抗体是许多应用中鉴定蛋白质的一种工具，包括荧光细胞成像、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫组织化学等。使用荧光标记抗体的优势包括更高的灵敏度、多路复用能力和易用性。 iFluor Ultra 系列是我们广受欢迎的 iFluor 染料的最新升级版，并针对用于荧光成像和流式细胞术应用的标记抗体进行了优化。用 iFluor Ultra 750 制备的抗体缀合物远远优于其他现有类似染料的缀合物，如 Alexa Fluor® 750。iFluor Ultra 750 缀合物在相同条件下比用 Alexa Fluor® 750 制备的缀合物更亮。此外，iFluor Ultra 750 的荧光不受 pH (4-10) 的影响。 iFluor Ultra 750 SE 染料相当稳定，并表现出与蛋白质氨基的良好反应性和选择性。 iFluor Ultra 750 的光谱特性和反应性类似于 Alexa Fluor® 750（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。

产品说明书

实验方案

储备溶液配制

1. 蛋白质原液（溶液 A）
将 100 µL 反应缓冲液（例如，1 M 碳酸钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液，pH ~ 9.0）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白质浓度 >2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记原液。
注意：蛋白质溶液（溶液 A）的 pH 值应为 8.5 ± 0.5。如果蛋白质溶液的 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M pH 9.0 磷酸盐缓冲液将 pH 值调整到 8.0-9.0 的范围内。
注意：蛋白质应溶于1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在 Tris 或甘氨酸缓冲液中，则必须用 1X PBS，pH 7.2-7.4 进行透析，以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和醋酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，缀合效率会显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。

2. iFluor Ultra 750 SE 原液（溶液 B）
将无水 DMSO 添加到 iFluor Ultra 750 SE 小瓶中，制成 10 mM 储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液 B），并及时使用。染料原液的长期储存可能会降低染料活性。溶液 B 在避光和防潮的情况下可以在冰箱中储存两周，避免冻融循环。

操作步骤

该标记方案是为山羊抗小鼠 IgG 与 iFluor Ultra 750 SE 的缀合而开发的。 您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意：每种蛋白质需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的特性。 蛋白质的过度标记会对其缀合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。

1.进行缀合反应
1.1使用 10:1 的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比作为起点：将 5 μL 的染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）在有效摇动下倒入蛋白质溶液（95 µL 溶液 A）小瓶中。 假设蛋白质浓度为 10 mg/mL 且蛋白质的分子量为 ~200KD，则蛋白质的浓度为 ~0.05 mM。
注意：我们建议使用 10:1 摩尔比的溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）。 如果太低或太高，分别确定最佳染料/蛋白质比例为 5:1、15:1 和 20:1。
1.2在室温下继续旋转或摇动反应混合物 30-60 分钟。

2.纯化缀合物
以下方案是使用 Sephadex G-25 柱进行染料-蛋白质缀合物纯化的示例。
根据制造说明准备 Sephadex G-25 柱。
2.1将反应混合物（来自“1.进行缀合反应”）加载到 Sephadex G-25 列的顶部。
2.2样品刚好在顶部树脂表面下方运行时，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。
2.3向所需样品中添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱纯化。 结合含有所需染料-蛋白质偶联物的组分。
注意：要立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
注意：对于长期储存，染料-蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

3.数据处理

3.1表征所需的染料-蛋白质缀合物
取代度 (DOS) 是表征染料标记蛋白质的最重要因素。 较低 DOS 的蛋白质通常具有较弱的荧光强度，但较高 DOS 的蛋白质（例如 DOS > 6）也往往具有较低的荧光强度。 大多数抗体的最佳 DOS 建议在 2 到 10 之间，具体取决于染料和蛋白质的特性。 为了有效标记，应控制取代度，使 6-8 摩尔 iFluor Ultra 750 SE 对 1 摩尔抗体。 以下步骤用于确定 iFluor Ultra 750 SE 标记蛋白质的 DOS。

3.2吸收检测
要检测染料-蛋白质缀合物的吸收光谱，建议将样品浓度保持在 1-10 µM 的范围内，具体取决于染料的消光系数。

3.3读取 280 nm 处的 OD（吸光度）和染料最大吸光度（对于 iFluor Ultra 750 染料，ƛmax = 588 nm）
对于大多数分光光度计，样品（来自色谱柱馏分）需要用去离子水稀释，以便 OD 值在 0.1 到 0.9 的范围内。 OD（吸光度）在 280 nm 是蛋白质的最大吸收，而 588 nm 是 iFluor Ultra 750 SE 的最大吸收。 要获得准确的 DOS，请确保缀合物中不含非结合染料。

3.4计算DOS
您可以通过链接使用我们的工具计算DOS

参考文献

A fully integrated isotachophoresis with a programmable microfluidic platform.
Authors: Shebindu, Adam and Somaweera, Himali and Estlack, Zachary and Kim, Jungtae and Kim, Jungkyu
Journal: Talanta (2021): 122039

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链霉亲和素偶联物 RPE-标记

	货号	16900	存储条件	在2-8度冷藏保存, 避免光照
	规格	100 ug	价格	1200
	Ex (nm)	566	Em (nm)	574
	分子量	~292000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：16900

产品名称：链霉亲和素偶联物 RPE-标记

规格：100ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：564

发射波长(nm)：574

产品介绍

链霉亲和素偶联物 RPE-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素，链霉亲和素缀合物与生物素缀合物一起广泛用于特异性检测多种蛋白质，蛋白质基序，核酸和其他分子，因为链霉亲和素对生物素具有非常高的结合亲和力。该RPE-链霉亲和素缀合物包含链霉亲和素（作为生物素结合蛋白）和共价连接的RPE（作为荧光标记）。当与生物素化的一抗结合使用时，通常用作间接免疫荧光染色的第二步试剂。它是使用流式细胞仪，酶标仪和微阵列平台进行基于生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试的非常有价值的工具。我们的一些客户已将此RPE-链霉亲和素偶联物与Affymetrix的微阵列平台以及Luminex的XMAP®和XTAG®技术（例如Bio-Rad’ 的Bioplex检测系统）。多种互补的生物素化试剂可从许多商业供应商处获得。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的链霉亲和素偶联物 RPE-标记。 

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参考文献

Overexpression of MACC1 and the association with hepatocyte growth factor/c-Met in epithelial ovarian cancer
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	货号	17780	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	0
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	856.76	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：17780

产品名称：死细胞核染料EthD-1 [Ethidium Homodimer-1]

CAS：61926-22-5

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：856.76

外观：固体

溶剂：DMSO

产品介绍

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链霉亲和素偶联物 RPE-标记

	货号	16901	存储条件	在2-8度冷藏保存, 避免光照
	规格	1 mg	价格	3924
	Ex (nm)	566	Em (nm)	574
	分子量	~292000	溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：16901

产品名称：链霉亲和素偶联物 RPE-标记

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：564

发射波长(nm)：574

产品介绍

链霉亲和素偶联物 RPE-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素，链霉亲和素缀合物与生物素缀合物一起广泛用于特异性检测多种蛋白质，蛋白质基序，核酸和其他分子，因为链霉亲和素对生物素具有非常高的结合亲和力。该RPE-链霉亲和素缀合物包含链霉亲和素（作为生物素结合蛋白）和共价连接的RPE（作为荧光标记）。当与生物素化的一抗结合使用时，通常用作间接免疫荧光染色的第二步试剂。它是使用流式细胞仪，酶标仪和微阵列平台进行基于生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试的非常有价值的工具。我们的一些客户已将此RPE-链霉亲和素偶联物与Affymetrix的微阵列平台以及Luminex的XMAP®和XTAG®技术（例如Bio-Rad’ 的Bioplex检测系统）。多种互补的生物素化试剂可从许多商业供应商处获得。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的链霉亲和素偶联物 RPE-标记。 

点击查看光谱

参考文献

Overexpression of MACC1 and the association with hepatocyte growth factor/c-Met in epithelial ovarian cancer
Authors: Hongyu Li, Hui Zhang, Shujun Zhao, Yun Shi, Junge Yao, Yanyan Zhang, Huanhuan Guo, Xingsuo Liu
Journal: Oncology letters (2015): 1989–1996

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