Firefly Luciferase Assay Kit（萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒）

产品货号: F6024S/F6024M/F6024L

产品规格: 50T/200T/5×200T

目录价（元）:619/1415/5129

推荐仪器：化学发光仪、酶标仪或液闪测定仪

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产品概述：

储存条件：-20℃保存，有效期见外包装

应用范围：真核基因表达调控研究

产品特点

1. 快速：细胞裂解在10-15 min内完成。

2. 方便：试剂易于配制，样品检测步骤简单。

3. 灵敏：能够检测最低10^-20 mol的萤光素酶。

4. 酶的浓度线性范围可达8个数量级。

 

产品组分

组分	F6024S（50T）	F6024M（200T）	F6024L（5×200T）
A. 5×Firefly Luciferase Lysis Buffer	5 mL	20 mL	5×20 mL
B. Firefly Luciferase Assay Buffer	5 mL	20 mL	5×20 mL
C. D-Luciferin	5 mg	5 mg	5×5 mg

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 温度会对酶的活性产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。

3. 如果单管萤光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。

4. 萤火虫萤光素酶催化的生物发光的最强波长为560 nm。

5. 为防止孔间干扰，建议使用白色不透光孔板。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

说明书：

 F6024S/F6024M/F6024L    
常见问题解答：

◆检测的萤光数值很低怎么办？

(1）可能为转染效率低
a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；
b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；
c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。
(2）可能为启动子活性低或诱导失败
a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；
b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；
c.更换强启动子（如SV40、CMV）。
注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。
(3）样品裂解效率低
a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。
b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。
(4）检测过程操作不规范
a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；
b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；
c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；
d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。
(5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，萤火虫荧光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；
b.反应工作液建议现用现配。

◆进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？
（1） 减少质粒转染量。
（2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。
注：不建议通过减少底物量来降低荧光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。