Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns酶试剂盒

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基因编辑后突变检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
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Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns酶试剂盒 – 修饰性PEG

 
 
          基因敲除    
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  基因敲入        
          ↘ Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns        
 
 
Guide-it™突变检测试剂盒可以用于确认由CRISPR/Cas9、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)等工程核酸酶所导入的基因突变。本试剂盒采用简单的PCR方法即可简便快速地检测出基因突变。性能卓越的 Terra™ PCR Direct Polymerase Mix可直接以细胞为起始进行扩增，无需提取基因组DNA。扩增产物经过变性及退火处理后形成不完全匹配DNA，Guide-it解离酶会剪切错配DNA部分，之后通过琼脂糖凝胶电泳确认剪切产物。
 
■ 特点
· 识别哺乳动物细胞中插入或者缺失突变的简便方法
· 可直接以细胞为起始进行PCR扩增，与同类产品相比较更为快速有效
· 完整试剂盒: 包含Guide-it Resolvase、Terra PCR Direct Polymerase和所有缓冲液
· 规格: 可提供100次和25次反应规格，25次反应规格可用于小规模基因编辑实验
· 可用于CRISPR/Cas9、ZFNs、TALENs下游研究突变序列确认
 
■ 操作流程
Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns
 
■ 实验例
Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns
 

图1. 比较Guide-it和Surveyor方法。转染表达Cas9核酸酶的质粒和特异作用于AAVS1位点的sgRNA至293T细胞，转染48 hr 后收集细胞，将其与未经转染的细胞按照不同比例*进行混合，分别进行突变导入检测。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix扩增含有AAVS1位点的目的片段并纯化其产物，之后分别采用Guide-it解离酶和Cel1酶（Surveyor assay）进行剪切。采用Guide-it解离酶剪切后条带清新易于识别，而Surveyor assay剪切后则显示明显的弥散，这样使得不容易测定突变效率并且低水平突变导入很难检测得到。*泳道1-6 : 100％, 80％, 60％, 40％, 20％, 0％（转染细胞的比例）
 
 
■ 产品组份
  100 次（产品编号 631443） 25 次（产品编号 631448）
 Extraction Buffer 1 5 ml × 4    5 ml
 Extraction Buffer 2      2 ml 500 μl
 Guide-it Resolvase   100 μl  25 μl
 Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)   100 μl  25 μl
 2 × Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml × 3 750 μl
  PCR-Grade Water 1 ml × 5    1 ml
 
■ 保存
－20℃
 
 
产品详情请点击：Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns
 
 
■ 关联资料
Guide-it™ 突变检测试剂盒宣传页：
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