Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg酶试剂盒

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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
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Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg酶试剂盒 – 修饰性PEG

 
Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)（Code No. 632641/632640）产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ，产品内容没有发生变化。（2021年5月）
 
 
          基因敲除    
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  基因敲入        
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降低脱靶效应，可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it™ Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较，脱靶效应受到明显抑制
· NLS（核定位信号）有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明：
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes，适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低，特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较，避免了残留Cas9基因的持续表达，有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程，C末端的NLS（核定位信号）可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物，sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit（Code No. 632635）或者Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）。
 
■ 实验例：
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复（HDR）效率
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34＋造血干细胞中检测同源重组修复（HDR）效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中，包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析，确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点，因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合，通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞，采用Guide-it Mutation Detection Kit（Code No. 631448）确认突变导入效率，％即表示基因编辑效率。如图所示，Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
－70℃
（注意）避免反复冻融。首次溶解之后，建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品（主要产品）
· 电穿孔装置：
Neon Transfection System（Thermo Fisher Scientific）或者 4-D Nucleofector System（Lonza）
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（Code No. 632635）：用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）：用于确认制备的sgRNA的有效性
 
 
产品详情请点击：Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg
 
 
■ 关联资料
相关资料：
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