上海金畔生物科技有限公司代理Takara Clontech酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。
| 磷蛋白富集试剂盒 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 635624 | Phosphoprotein Enrichment Kit | 6 Preps | ￥4,262 |  |
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| Clontech | 635666 | Phosphoprotein Enrichment Starter Kit | 1 Purification | ￥956 | |
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| Clontech | 635626 | Phosphoprotein Kit-Buffer A | 500 ml | ￥2,173 | |
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| ■ 产品描述 | |||||||||
| 本制品基于亲和原理，为从哺乳动物细胞和组织中提取磷酸化蛋白质提供了有效方法。富集试剂盒中包含了一整套的buffer和6个高结合力的柱子，用于富集胞质中和膜结合的磷酸化蛋白质，无需考虑例如丝氨酸、酪氨酸或苏氨酸等的氨基酸修饰。 | |||||||||
| 这种富集方法的优势： | |||||||||
| · 实验操作快速，从细胞到样品纯化的平均时间少于2 h。 · 操作简单直接，包括4步，将提取/上样buffer加到细胞或组织沉淀中来提取细胞总蛋白质， 然后将提取产物加到亲和纯化柱上，洗涤，最后使用不含清洁剂的Elution Buffer将结合的磷酸化 蛋白质洗脱下来。 |
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| · 一种Buffer多个用途，Extraction/Loading Buffer可以用于蛋白质提取和纯化步骤， 而不需要更换缓冲液，这样便节省了时间也防止样品丢失。 · 实验过程是非变性的，所以整个过程中磷酸化蛋白质是保持折叠构象的，包括提取和洗脱的步骤。 |
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| 每个纯化柱的最大结合能力约为4 mg磷酸化蛋白质。 | |||||||||
| 高选择性富集磷酸化蛋白质 | |||||||||
| 本富集试剂盒可以用于任何类型的哺乳动物细胞。已做过测试的细胞系包括NIH 3T3，HEK 293，HeLa，Cos-7和Jurkat细胞。富集效率很高，已经过Western Blotting分析证实。通过使用磷酸盐比色检测法，可以发现大部分的磷酸化蛋白质都在洗脱液中，在洗涤步骤的组分中只检测到痕量，可以忽略。 使用本试剂盒得到的磷酸化蛋白质是浓缩液，可以使用多种不同的方法进行分析，包括质谱、二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）等。 |
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| ■ 特点 | |||||||||
| · 非变性条件下操作，可保持蛋白质的构象和溶解性 · 适用于质谱和2D-PAGE等多种下游应用 · 提高磷酸化检测实验的灵敏度 |
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| ■ 应用 | |||||||||
| · 质谱样品制备 · 磷酸化分析 · 2D-PAGE样品制备 |
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| ■ 实验例 | |||||||||
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| 使用本制品可以高效富集磷酸化蛋白质。提取HEK 293细胞的总蛋白质，取大约3 mg加入到本制品提供的磷酸化蛋白质亲和纯化柱上。Lane1是提取产物，Lane2是流穿液，Lane3是洗涤组分，Lane4是洗脱组分，然后分别使用特异性结合磷酸化AKT、PTEN和GSK3β蛋白质的抗体经Western Blotting检测，结果分别如图A、B、C所示，可以看出在洗脱液部分清晰地检测到了磷酸化蛋白质。请注意，样品在凝胶上样之前没有被稀释或浓缩。 | |||||||||
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