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产品资料 – 糖生物学与蛋白质工具 – 糖苷内切酶
Remove-iT PNGase F 收藏
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#P0706L
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识别位点
Remove-iT PNGase F 水解糖肽/蛋白上所有类型的 N-糖链 [x = H 或者寡糖]。
特性
从糖蛋白上切除 N-连接糖链
更多详细结构特异性请翻阅目录 257页
概述
Remove-iT PNGase F 是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间（1）。Remove-iT PNGase F 携带有几丁质结合域（CBD）标签，易于从反应中去除。以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 和 MS 分析中取得最佳效果。
来源
从脑膜败血性杆菌（Flavobacterium meningo-septicum）中提取纯化。
反应条件
将糖蛋白于 1X DTT（40 mM）中 55℃ 温育 10 分钟使其变性。1X GlycoBuffer 2 反应缓冲液中 37℃ 温育 1 小时。热失活：75℃ 10 分钟。
随酶提供的试剂
10X DTT
10X GlycoBuffer 2 反应缓冲液
分子量
41,000 daltons。
质量保证
无糖苷外切酶污染，无糖苷内切酶F1、F2 或 F3 活性，无蛋白水解活性。
单位定义
1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时从 5 μg DTT 变性的 RNase B 中移除超过95% 的碳水化合物所需要的酶量。
浓度
225,000 units/ml。
注意事项
当使用包含 SDS 和 DTT 的 NEB 糖蛋白变性缓冲液对 RNase B 进行变性时，需要 500,000U/ml 高浓度 Remove-iT PNGase F。
当 Remove-iT PNGase F 在变性条件下使用时，需要在反应混合物中加入 NP-40，因为 SDS 抑制Remove-iT PNGase F 活性。目前还不清楚非离子变性剂抵消 SDS 对 Remove-iT PNGase F 抑制的机理。
去糖基化反应完成后，可以用几丁质磁珠去除Remove-iT PNGase F，且几丁质磁珠的用量与去除Remove-iT PNGase F 成正比线性关系。