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SPA-PEG-SPA是与胺基反应的线性同双功能化PEG试剂，是NHS-PEG-NHS酯试剂的一种。。 NHS酯与pH 7〜8.5的伯胺基反应形成稳定的酰胺键。 NHS酯与去质子化的伯胺反应，因此，该反应需要中性至碱性pH值才能进行。伯胺通过亲核攻击与NHS酯反应，NHS作为副产物释放。 NHS-酯的水解与水溶液中的反应竞争，并随着pH的增加而增加。反应步骤： 将目标物质溶解在结合缓冲液中。估计目标材料上伯胺基团的浓度。将NHS PEG储备溶液添加到目标结合物中，最终浓度保持至少10 mg / mL。PEG NHS需要10〜50摩尔过量才能达到最佳结合效果；使混合物在室温下搅拌30〜60分钟，或在4℃ 下搅拌2小时。结合物可以通过尺寸排阻色谱法或透析纯化。