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Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色荧光
货号 | 13803 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 200 Tests | 价格 | 3924 | |
Ex (nm) | 575 | Em (nm) | ||
分子量 | 溶剂 | |||
产品详细介绍 |
简要概述
Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测转氨酶的试剂盒,丙氨酸氨基转移酶(ALT),也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT),是转移酶家族的成员。 它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移,是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中,少量存在于心脏,肌肉和肾脏中。 在健康受试者中,血清ALT水平低。 然而,当细胞受损时,例如急性和慢性肝炎,阻塞性黄疸,肝癌,心肌梗塞,ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。 因此,测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。
Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应:
丙氨酸(Ala)+α-酮戊二酸=丙酮酸+谷氨酸(Glu)
通过酶偶联反应循环产生蓝色产物来测量产物谷氨酸。 可以通过吸光度酶标仪在~575nm处读取信号,或者通过A570nm至A610nm的吸光度比率来读取信号以提高测定灵敏度。 使用Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒,在100μL反应体积中检测到少至10 mU / mL的ALT。 该测定是稳健的,并且可以容易地适用于各种各样的应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 570/610nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
产品说明书
96孔板测定示例
概述
准备ALT反应混合物(50μL)
加入ALT标准品或测试样品(50μL)
孵育于37°C 30分钟至60分钟
监测吸光度在575±5 nm处增加或在A570nm / A610nm处的吸光度比率
注意:在开始实验之前,在室温下解冻一个组分A和B
操作方法
1.准备ALT标准品的连续稀释液(1至1000 mU / mL):
1.1将100μLDPBS加入ALT阳性对照(组分D)小瓶中,制成100U / mL ALT储备液。
注意:未使用的ALT原液应分成单次使用的等分试样并储存在20℃。
1.2将10μL的100 U / mL ALT标准溶液(来自步骤1.1)加入含有0.1%BSA的990L DPBS缓冲液中,以产生1U / mL ALT标准溶液。
1.3取300μL1U/ mL ALT标准溶液进行1:3连续稀释,得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT标准品系列稀释液。
1.4如说明书中的表1和2中所述,将ALT标准品和含有ALT的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。
注意:如果需要,将测试样品稀释至含有0.1%BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。
2.准备ALT测定混合物:
2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶(组分C)中,得到100X NAD溶液。
2.2将10 mL ALT分析缓冲液(组分B)加入ALT酶混合物瓶中(组分A),并充分混合。
2.3将整瓶100X NAD溶液(来自步骤2.1)加入ALT酶混合物溶液(来自步骤2.2)以得到ALT测定混合物。
注意1:该ALT测定混合物足以用于两个96孔板。在室温下不稳定,应在2小时内及时使用,避免暴露在光线下。
注意2:或者,可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50X的ALT酶混合物原液,然后通过将原液与测定缓冲液(组分B)和100x NAD混合制备ALT测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃,避免冻融循环。
3.运行ALT测定:
3.1将50μLALT测定混合物(来自步骤2.3)添加至ALT标准品,空白对照和测试样品(参见步骤1.4)的每个孔中,以使总ALT测定体积为100μL/孔。
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLALT测定混合物。
3.2在37°C下孵育反应30分钟至60分钟,避光。
注意:空白控制的背景随着时间的推移而增加。
3.3使用吸光度读数器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm监测吸光度增加,以提高检测灵敏度。
参考文献
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Authors: Kazuaki Taguchi, Hongxu Lu, Yanyan Jiang, Tzong-Tyng Hung, Martina Heide Stenzel
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2018)
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产品名称 | 货号 |
Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 | Cat#13802 |