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Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒*绿色荧光**无铜*
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货号 | 22305 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 6564 | |
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞活力的试剂盒，检测细胞增殖是评估细胞活力、细胞周期和基因毒性的最可靠方法之一。检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的 S 期期间在胸苷存在的情况下测量 DNA 合成。 Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒使用 FOL-FdU，一种胸苷类似物。 FOL-FdU 在 DNA 合成过程中被整合到细胞 DNA 中。固定细胞后，通过我们的 Buccutite 标记技术用 MTA-iFluor 488 标记掺入的 FOL-FdU。细胞中形成的 iFluor 488 标记 DNA 在 FITC 通道中可以被荧光仪器检测到。 Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒提供了一种替代抗 BrdU 抗体的检测和 EdU 点击化学检测的方法。它是一种环境友好的无铜检测方法，用于在单细胞水平上检测活性 DNA 合成。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒。
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适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | 490nm |
| 发射： | 525nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备细胞（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
2.对于96孔板，以100 µL /孔添加2X FOL-FdU工作溶液
3.在37ºC下孵育3小时
4.取出培养基，并在室温下用100µL冰冷的90％甲醇的PBS溶液固定细胞15分钟
5.除去固定液并用PBS洗涤3次
6.加入1X iFluor 488-MTA工作溶液（100 µL /孔）并在室温下染色30分钟。
7.除去每个孔中的工作溶液，并用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次。
8.加入100µL 1X洗涤缓冲液/孔，并用FITC滤光片组观察紫外荧光显微镜。
溶液配制
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 FOL-FdU储备溶液（1000X）：
将500 µL DMSO（组分E）添加到FOL-FdU（组分A）中，制成1000X储备溶液。注意：此1000X浓度是使用具有最佳FOL-dU浓度的HeLa细胞开发的。生长培养基，细胞密度，细胞类型变化和其他因素可能会影响标记。我们建议测试一系列FOL-FdU浓度，以确定适合您的细胞类型和实验条件的最佳浓度。
1.2 iFluor 488-MTA储备溶液（400X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到iFluor 488-MTA（组分B）中，制成400 X iFluor 488-MTA储备溶液。
2.工作溶液
2.1 X FOL-FdU工作溶液
在完全培养基中将1000X FOL-FdU储备溶液稀释500倍，以制备2X FOL-FdU工作溶液。
2.2 X iFluor 488-MTA工作溶液
将2.5 µL 400X iFluor 488-MTA储备溶液添加到1mL染色缓冲液（组分C）中，以制备1X iFluor 488-MTA工作溶液。
2.3 X洗涤缓冲液
向9mL PBS中加入1mL 10X洗涤缓冲液（组分D），制成1X Washing Buffer。
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操作步骤
1.准备细胞
1.1对于贴壁细胞：将细胞在生长培养基中以10,000至40,000个细胞/孔/ 100 µL（对于96孔板）过夜培养，以2,500至10,000个细胞/孔/ 20 µL（对于384孔板）过夜培养。
1.2对于非贴壁细胞：离心培养液中的细胞，并将细胞沉淀以1-2 X 106细胞/ ml（对于10个96孔板为10 mL）悬浮在培养液中。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。
2.用FOL-FdU标记细胞
2.1将等体积的2X FOL-FdU工作溶液添加到含有要处理的细胞的培养基中，以在每个孔中获得1X FOL-FdU溶液。我们不建议更换所有培养基，因为这可能会影响细胞增殖速率。
2.2在最适合细胞类型的条件下孵育细胞3小时。FOL-FdU暴露于细胞的时间可以直接测量合成DNA的细胞。孵育时间取决于细胞生长速率。
3.细胞固定
3.1孵育后，移出培养基，并向每个孔中加入100µL冰冷的PBS中的90％甲醇（未提供，甲醇/ PBS，v / v为90/10），并在室温下孵育15分钟。
3.2除去固定缓冲液，并用PBS清洗每个孔中的细胞两次。
4.染色细胞
4.1在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的1X iFluor™488-MTA工作溶液。在避光的条件下，将细胞与工作溶液在室温下孵育30分钟。
4.2除去每个孔中的工作溶液。
4.3用1X洗涤缓冲液洗涤细胞3次，洗涤后每孔加入100µL洗涤缓冲液。注意：如果需要Hoechst 33342染色剂，请在1X洗涤缓冲液中制成5-10 µg / ml Hoechst 33342溶液并染色30分钟。
4.4使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。
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