用于定量测定血清/血浆样品和细胞培养上清液中的人类载脂蛋白E（apoE）。请注意，洗涤，封闭和孵育缓冲液应包含清洁剂。吐温20，Triton X-100或NP40的使用浓度为0.05-0.5％。在封闭缓冲液和孵育缓冲液中，建议使用0.1％BSA。

血清/血浆样品：分析人血清/血浆样品时，建议使用Apo ELISA缓冲液稀释样品，标准品和检测抗体。该缓冲液可防止可能由于人血浆和血清中常见的嗜异性抗体的干扰而引起的假阳性读数。Apo ELISA缓冲液已使用来自正常健康人类献血者的血清/血浆进行了验证。请注意，尚未评估来自患有各种疾病或其他状况的人类受试者的样品中的嗜异性抗体干扰。可以使用含有EDTA，柠檬酸盐或肝素的血清和血浆样品。但是，由于蛋白聚糖结合的apoE的置换，含肝素的样品会产生更高的apoE值。载脂蛋白分析所需的样品的Triton X处理不会干扰载脂蛋白E分析。
注意：该试剂盒中未提供Apo ELISA缓冲液。

试剂：抗体是在含有叠氮化钠（0.02％）的无菌过滤（0.2μm）PBS中提供的。链霉亲和素-HRP用0.1M Tris缓冲液和0.002％Kathon CG提供。
标准范围：0.6-40 ng / ml

样品实验方案

储备溶液配制

通过将小瓶4内试剂重新溶于含0.5 mM DTT和0.1％BSA的1 ml PBS中来制备apoE标准品，不要搅拌，在室温下放置20分钟。这将产生5μg/ ml的储备溶液，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。对于测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。

操作步骤

1. 通过添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白结合ELISA板，将其在pH 7.4的PBS中稀释至2μg/ ml。在4-8°C下孵育过夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗涤两次。
3. 通过添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育缓冲液）的0.05％Tween 20来封闭板。在室温下孵育1小时。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗涤五次。
5. 通过将小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中来制备apoA1标准品，不要搅拌，在室温下放置15分钟，然后涡旋振荡3s。得到的储备液为4μg/ ml，应立即使用或以等分试样的形式储存在-20°C下，以备将来使用。我们建议等分试样在初次使用后不要重新冷冻。为了进行测试，请使用标准范围作为指导来准备原液的稀释液。
6. 加入100μl/孔的样品或在血清或血浆样品的孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中稀释的标准液，并在室温下孵育1-2小时。血清/血浆样品的稀释建议可在以下网址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步骤4进行清洗。
8. 在孵育缓冲液或Apo ELISA缓冲液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血浆样品。在室温下孵育1小时。
9. 按照步骤4进行清洗。
10. 在孵育缓冲液中以100：1 /孔的比例稀释1：1000的链霉亲和素HRP。在室温下孵育1小时。请注意，缓冲液中使用的叠氮化钠会抑制HRP活性。
11. 按照步骤4进行清洗。
12. 加入100μl/孔的适当底物溶液，如TMB(#11012)。
13.  在适当时间的显影后，在ELISA读数器中测量光密度。