上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法cADP-核糖检测试剂盒
 |
货号 | 20305 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 tests | 价格 | 6564 | |
| Ex (nm) | 420 | Em (nm) | 480 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Amplite 荧光法cADP-核糖检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测核糖的试剂盒，cADP-核糖（cADPR）是衍生自NAD +的新型Ca2 +信使。 ADP-核糖基环化酶（ADPRC）催化从NAD +合成cADPR，但是在高浓度烟酰胺存在下，该反应可以逆转，从化学计量上从cADPR产生NAD +。 可以使用我们新开发的NAD传感器Quest Fluor NAD试剂检测生成的NAD +。 这使得可以在低nM范围内监视组织和细胞培养物中的cADPR。 使用Quest Fluor NAD试剂进行的NAD +检测对NAD +具有特异性，对NADH无反应。 荧光信号可以容易地检测到。 该测定可以在方便的96孔或384孔微量滴定板中进行。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 420nm |
| 发射： | 480nm |
| cutoff: | 435nm |
| 推荐孔板： | 黑色孔板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备并添加cADPR标准和/或测试样品（50 µL）
2.准备并添加ADRPC工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育1小时
4.添加40 µL Quest Fluor NAD探针
5.添加40 µL测定溶液
6.在室温下孵育20分钟
7.添加30 µL增强剂溶液
8.在室温下孵育20分钟
9.在Ex / Em = 420/480 nm处监控荧光强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
cADPR标准储备溶液（5 mM）：
将10 µL ddH2O加入cADPR标准样品瓶（组分F）中，并充分混合。 注意：未使用的cADPR储备溶液应以-20℃一次等份保存。
2.标准溶液
cADPR标准
注意：在测定溶液I（组分C）中准备cADPR系列稀释液。
3.工作溶液
ADPRC工作溶液：
将50 µL ddH2O加入ADPRC酶混合物（组分B）的小瓶中，并充分混合。 将全部内容物转移到5毫升测定溶液I（组分C）中，并充分混合。 注意：ADPRC工作溶液不稳定，请立即使用。
样品示例及操作
表1.黑色96孔微孔板中cADPR标准品和测试样品的布局。 ST = cADPR标准（ST1-ST7）； BL =空白对照； TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| ST1 | ST1 | … | … |
| ST2 | ST2 | … | … |
| ST3 | ST3 | ||
| ST4 | ST4 | ||
| ST5 | ST5 | ||
| ST6 | ST6 | ||
| ST7 | ST7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| ST1-ST7 | 50ul | 连续稀释 |
| BL | 50ul | 分析溶液I（组分C） |
| TS | 50ul | 测试样品 |
NAD生成测定
1.将50 µL cADPR标准液，空白对照和测试样品加到黑色固体96孔微孔板中（如表1和表2所示）。
2.在cADPR标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL /孔的ADPRC工作溶液。 注意：对于384孔板，请在每个孔中加入12.5 µL样品和12.5 µL ADPRC反应混合液。
3.避光保存，室温下孵育反应60分钟。
NAD检测分析
1.将40 µL Quest Fluor NAD探针（组分A）添加到cADPR标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（总计140 µL /孔），并充分混合。
2.向每个孔中加入40 µL分析溶液II（组分D）（总量为180 µL /孔），混合均匀。 注意：对于384孔板，将10 µL Quest Fluor NAD探针和10 µL分析溶液II加到每个孔中。
3.避光保存，室温下孵育反应10-20分钟。
4.向每个孔中添加30 µL增强剂溶液（组分E），使总NAD测定体积为210 µL /孔，并在避光的条件下在室温下孵育10-20分钟。 注意：对于384孔板，请添加7.5 µL增强剂溶液。
使用荧光板读数器在420/480 nm处监测荧光的增加。
参考文献
Acetylcholine Promotes Ca2+ and NO-Oscillations in Adipocytes Implicating Ca2+→ NO→ cGMP→ cADP-ribose→ Ca2+ Positive Feedback Loop-Modulatory Effects of Norepinephrine and Atrial Natriuretic Peptide
Authors: Turovsky, Egor A and Turovskaya, Mariya V and Dolgacheva, Ludmila P and Zinchenko, Valery P and Dynnik, Vladimir V
Journal: PloS one (2013): e63483
Ca 2+ release induced by cADP-ribose is mediated by FKBP12. 6 proteins in mouse bladder smooth muscle
Authors: Zheng, Ji and Wenzhi, Bi and Miao, Lin and Hao, Yumin and Zhang, Xu and Yin, Wenxuan and Pan, Jinhong and Yuan, Zengqiang and Song, Bo and Ji, Guangju
Journal: Cell calcium (2010): 449–457
ADP-ribose and cADP-ribose–endogenous regulators of cellular ionic balance. Cardiotropic effects of ADP-ribose
Authors: Kuz’min, VS and Sosulina, LIu and Sukhova, GS and Ashmarin, IP
Journal: Uspekhi fiziologicheskikh nauk (2006): 3–17
Ryanodine receptor subtype 2 encodes Ca2+ oscillations activated by acetylcholine via the M2 muscarinic receptor/cADP-ribose signalling pathway in duodenum myocytes
Authors: Fritz, Nicolas and Macrez, Nathalie and Mironneau, Jean and Jeyakumar, Loice H and Fleischer, Sidney and Morel, Jean-Luc
Journal: Journal of cell science (2005): 2261–2270
Modulation of spontaneous transient Ca 2+-activated K+ channel currents by cADP-ribose in vascular smooth muscle cells
Authors: Cheung, Donald W
Journal: European journal of pharmacology (2003): 57–59
A novel cycling assay for cellular cADP-ribose with nanomolar sensitivity
Authors: Graeff, Richard and Lee, Hon Cheung
Journal: Biochemical Journal (2002): 379–384
Effect of halothane on cADP-ribose-induced Ca2+ release system in tracheal smooth muscle
Authors: Chini, Eduardo N and Keller, Thomas F and Prakash, Yedatore S and Pabelick, Christina M and Sieck, Gary
Journal: Anesthesiology: The Journal of the American Society of Anesthesiologists (2002): 1022–1024
cADP-ribose activates reconstituted ryanodine receptors from coronary arterial smooth muscle
Authors: Li, Pin-Lan and Tang, Wang-Xian and Valdivia, Hector H and Zou, Ai-Ping and Campbell, William B
Journal: American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology (2001): H208–H215
cADP-ribose/ryanodine channel/Ca2+-release signal transduction pathway in mesangial cells
Authors: Yusufi, Ahad NK and Cheng, Jingfei and Thompson, Michael A and Dousa, Thomas P and Warner, Gina M and Walker, Henry J and Grande, Joseph P
Journal: American Journal of Physiology-Renal Physiology (2001): F91–F102
Functional overlap of IP3-and cADP-ribose-sensitive calcium stores in guinea pig myenteric neurons
Authors: Turner, Douglas J and Segura, Bradley J and Cowles, Robert A and Zhang, Weizhen and Mulholland, Michael W
Journal: American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology (2001): G208–G215