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iFluor 450 酪胺 * Opal 480 的卓越替代品*
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货号 | 45097 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Slides | 价格 | 3612 | |
| Ex (nm) | 451 | Em (nm) | 502 | |
| 分子量 | 625.78 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
iFluor 450 酪酰胺经过优化，可替代 Opal 480 或其他光谱相似的荧光酪酰胺偶联物或 TSA 试剂。 Tyramide 试剂可用于检测细胞和组织中极低丰度的靶标，其荧光信号比直接荧光标记试剂显着改善。结合我们具有更高荧光强度、增强光稳定性和增强水溶性的卓越 iFluor 染料，iFluor 染料标记的酪胺偶联物能够以更高的精度和灵敏度产生荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 450 酪胺。
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适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | 绿色滤波片组 |
| 发射： | 绿色滤波片组 |
| 推荐孔板： | 黑色透明底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
- 修复/渗透/阻断细胞或组织
- 在封闭缓冲液中加入一抗
- 添加 HRP 标记的二抗
- 制备酪胺工作溶液并在室温下涂抹于细胞或组织中 5-10 分钟
溶液配制
储备溶液配制
iFluor 450 酪胺储备液 (200X)
向小瓶中加入 100 µL DMSO 并充分混合。
注意：未使用的酪胺原液可以储存在 2-8 °C。
工作溶液配制
iFluor 450 酪胺工作溶液 (1X)
将 100 μL 的 Tyramide 储备溶液添加到 20 mL 您选择的含有 0.003% H2O2 的缓冲液中。
注意 Tris 缓冲液，pH=7.4 可用于获得最佳性能。
注意 酪胺工作溶液应立即使用，并在使用当天全新配制。
注意 20 mL 溶液可用于 200 次检测。
实验步骤
（该步骤适用于细胞或组织染色）
细胞固定和透化
1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。
2.用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。
4.用PBS冲洗细胞或组织两次。
组织固定，脱石蜡和补液
（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）
过氧化物酶标记
1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。
2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。
3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。
4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。
5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。
7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。
酪胺标记
1.向每个样品中添加100 µL 酪胺工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
2.用PBS冲洗3次。
复染和荧光成像
1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。我们提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。
2.加上盖玻片。
3.使用适当的滤波片观察酪胺的荧光信号。
表1.建议用于核复染色的产品。
| 货号 | 产品名称 | Ex/Em(nm) |
| 17548 | 核蓝 DCS1 | 350/461 |
| 17550 | 核绿 DCS1 | 503/526 |
| 17551 | 核橙 DCS1 | 528/576 |
| 17552 | 核红 DCS1 | 642/660 |
相关产品
| 名称
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激发（nm）
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发射（nm）
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消光系数（cm -1 M -1）
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量子产率
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| iFluor 488 Styramide * Alexa Fluor 488酪酰胺的优异替代品* | 491 | 516 | 75000 | 0.9 |
| iFluor 555 Styramide * Alexa Fluor 555酪酰胺的优异替代品* | 557 | 570 | 100000 | 0.64 |
| iFluor 568 Styramide * Alexa Fluor 568酪酰胺的优异替代品* | 568 | 587 | 100000 | 0.57 |
参考文献
Accessibility-dependent topology studies of membrane proteins using a SpyTag/SpyCatcher protein-ligation system.
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