Cell Meter 比色细胞细胞毒性检测试剂盒

简要概述

Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞毒性检测的试剂盒，Cell Navigator荧光成像试剂盒是一类荧光成像工具，用来标记亚细胞，细胞器；例如细胞膜、溶酶体、线粒体和细胞核等。Cell Navigator系列细胞器或亚细胞结构标记试剂盒提供最全的细胞及相关细胞器荧光标记方案，每种检测方案均能提供蓝色/绿色/红色/橙色等不同荧光检测方法。这种高效的细胞标签为从空间上和时间上研究发生的细胞活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter比色法细胞毒性检测试剂盒 使用可溶于水的四唑染料。在电子载体（PMS）存在的细胞还原性条件下，该染料能产生水溶性的甲瓒。四唑盐经细胞脱氢酶变成橙色的甲瓒产物，它在培养基是可溶的。一定数目甲瓒产物与一定数目活细胞成比例。我们的试剂盒比其他基于四唑细胞毒性检测试剂盒（如MTT、XTT）提供更强有力操作方案。不需要预混合，我们试剂盒四唑盐染料直接加入细胞。此外，我们的试剂盒比其他四唑细胞毒性检测试剂盒（如MTT、XTT）具有更高的灵敏度。能广泛的使用多种设备平台。适应于多种的研究，例如细胞粘附、细胞趋化、多耐药性、细胞生存能力、凋亡和细胞毒性等。该试剂盒具备最佳的组分和实验操作流程，适合于增殖或者不增殖的细胞，并能用于悬浮细胞或者贴壁细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 比色法细胞毒性检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.添加1/5体积的分析溶液（组分A）
3.将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1-24小时
4.监测A570nm / A605nm的吸光度比

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中，并在37℃，5％CO 2培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。 对于96孔板，建议的总体积为100μL，对于384孔板，建议的总体积为50μL。

2.对照设置
2.1阳性对照：含有细胞和已知的增殖或细胞毒性诱导剂。

2.2阴性对照：含有细胞但不含有测试化合物。

2.3载体对照：含有细胞和用于递送测试化合物的载体。

2.4非细胞对照：含有不含细胞的生长培养基。

2.5测试化合物对照：含有用于递送测试化合物[Hank’s平衡盐溶液（HBSS）或磷酸盐缓冲盐水（PBS）]和测试化合物的载体对照。 一些测试化合物具有强自发荧光并且可能产生假阳性结果。 注意：对于96孔板，将所有对照的总体积与100μL匹配，对于具有生长培养基的384孔板，将所有对照的总体积与50μL相匹配。

3.将测定溶液（组分A）预热至37°C。 在开始实验之前彻底混合。

4.向每个孔中加入20μL（96孔板）或10μL（384孔板）的测定溶液（组分A）。 轻轻摇动平板30秒，混合试剂。

5.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育1-24小时，避光。 注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型的代谢率和使用的细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 不推荐极长的孵育时间，因为指示剂可以转化为无色化合物。

6.用吸光度读板仪在OD比率A570nm / A605nm下监测吸光度的增加。 OD₅₇₀与OD₆₀₅的比率用于确定每个孔中的细胞活力。 注意：细胞存活率与OD₅₇₀增加和OD₆₀₅减少成正比。

数据分析

        从含有细胞的那些孔的值中减去从非细胞对照孔读取的背景吸光度。注意：空白孔的背景吸光度可以根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。

        每个孔中的吸光度读数表示孔中的细胞数。

根据以下公式计算样品和对照的细胞活力百分比：
％细胞活力= 100×（Rsample – Ro）/（Rctrl – Ro）
Rsample是在测试化合物存在下OD570 / OD605的吸光度比。
Rctrl是不存在测试化合物（载体对照）时OD570 / OD605的吸光度比。
Ro是OD570 / OD605的平均背景（非细胞对照）吸光度比。

        从空白标准孔获得的读数（Abs）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算细胞数/孔样品。

图1.用Cell Meter 比色细胞细胞毒性测定试剂盒测量CHO-K1细胞数量反应。 将1至10个细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在Costar黑壁/透明底96孔板中接种过夜。 将细胞与20μL/孔的测定溶液（组分A）在37℃下孵育3小时。用SpectraMax plus（Molecular Devices）在570nm和605nm下测量吸光度强度。 OD570 / OD605的比例与所示的细胞数成比例。

参考文献

Detection of thalidomide embryotoxicity by in vitro embryotoxicity testing based on human iPS cells
Authors: Nobuo Aikawa, Atsushi Kunisato, Kenji Nagao, Hideaki Kusaka, Katsumi Takaba, Kinya Ohgami
Journal: Journal of pharmacological sciences (2014): 201–207

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